1.研究对象 选取体检者37名,男23名,女14名,年龄31~45岁,经查均无异常。每人取血6 mL,平均置于6支试管中:2支干管、4支含有50 μL EDTA-K₃的试管(浓度分别为30、40、50和60 mg/mL),抗凝管充分混匀,与1支干管离心后待测(5组样本以下简称干管组、30 mg组、40 mg组、50 mg组、60 mg组),另1支干管的血样采后立即冰冻至溶血,制成自身血红蛋白液。

2.仪器、试剂与方法 采用AXSYM免疫分析仪、胰岛素配套试剂(Abbott公司,美国)测定5组样本的胰岛素含量,检测后准确提取血清或血浆400 μL,加入16 μL血红蛋白液,以血细胞计数仪将血红蛋白浓度调节为5 g/L,室温静置3 h,检测溶血后的胰岛素含量。

3.统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件,以干管组未溶血的检测值为原始标准值,数据采用 x- ±s表示,溶血与未溶血的组间样本均数间的显著性分析采用方差分析,同组溶血前后的数据采用配对 t检验,以 P<0.05为差异具有统计学意义。

5组血清在未溶血状态下检测,差异无统计学意义( F=0.04, P>0.05);5组血清在溶血状态下检测,差异有统计学意义( F=27.75, P<0.05);经 q检验分析,30 mg组与40 mg组、50 mg组与60 mg组间差异无统计学意义( P=0.08、0.94),其余各组之间两两比较差异均有统计学意义( P<0.01);同组溶血前后的数据经配对 t检验,干管组、30 mg组、40 mg组溶血前后差异有统计学意义,50 mg组、60 mg组溶血前后差异无统计学意义,见 表1。

表1

表1

表1 5组样本溶血前后胰岛素的检测结果( x- ±s,μU/mL) 组别 未溶血 溶血 t值 P值 干管组 9.8±5.0 1.1±0.4 26.36 0.00 30 mg组 9.7±4.9 4.4±3.6* 14.80 0.00 40 mg组 9.6±6.1 6.1±4.3* 14.61 0.00 50 mg组 9.7±6.2 9.7±4.8*#△ 1.66 0.11 60 mg组 9.7±4.7 9.6±4.9*#△ 2.06 0.16 注:与干管组比较,* P<0.01;与30 mg组比较,# P<0.01;与40 mg组比较,△ P<0.01

表1 5组样本溶血前后胰岛素的检测结果( x- ±s,μU/mL)

EDTA是非选择金属络合剂,与重金属离子1∶1络合,血清中的金属离子全部被络合以后,才能屏蔽锌的作用。因此我们配制4种浓度的EDTA -K₃溶液作为IDE的阻断剂, EDTA -K₃加到血样后的最终浓度为1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL。检测结果显示,EDTA -K₃对正常血清中胰岛素的测定均无影响;加入自身血红蛋白液后,干管组的胰岛素几乎被IDE完全降解,显著低于溶血前的检测值,与国内文献报道结果相似^{[ 3]};而其他组溶血后的胰岛素检测值随着EDTA-K₃浓度的增高,溶血的干扰逐渐减小,50与60 mg组溶血前后的胰岛素检测值差异无统计学意义,说明50 mg组EDTA -K₃的浓度足以屏蔽IDE;30与40 mg组溶血后的胰岛素检测值显著低于溶血前,但却显著高于溶血后的干管组,这2组血清中的EDTA只屏蔽了部分锌的作用;而40 mg组比较30 mg组虽无显著性差异,但40 mg组中约1/4的检测值已经接近原始标准值,说明其中的IDE完全被抑制,可能是金属元素及IDE的个体差异所致。

综上所述,每毫升血样中加入50 μL浓度50 mg/mL的EDTA-K₃既可以防止溶血后IDE对胰岛素的降解,又不影响胰岛素的检测,有一定的临床推广价值。但配制高浓度的EDTA-K₃难度大,如何寻找一种临床实验室更乐于接受的方法,还有待于进一步研究。