引用本文
吕军, 王玮, 陈彬, 曹峰, 冯景, 李显东, 谢飞. 两种检测血清高敏C反应蛋白方法的性能比较. 2009, 24(9): 695-696
  
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《检验医学》编辑部
两种检测血清高敏C反应蛋白方法的性能比较
吕军1, 王玮2, 陈彬2, 曹峰1, 冯景1, 李显东1, 谢飞1
1. 郧阳医学院附属太和医院检验科,湖北 十堰 442000
2. 郧阳医学院附属太和医院心血管内科,湖北 十堰 442000

作者简介:吕 军,女,1963年生,学士,副主任技师,主要从事医学检验工作。

摘要
关键词: 高敏C反应蛋白; 乳胶增强透射免疫比浊法; 速率散射免疫比浊法
中图分类号:R446.61 文献标志码:B 文章编号:1673-8640(2009)09-0695-02

C反应蛋白(CRP)不但是炎症反应性指标, 而且是导致动脉粥样硬化的直接参与者, 其含量在预测心血管疾病中起重要作用。检测高敏CRP(hs-CRP)的方法使用比较多的有乳胶凝集试验、免疫沉淀法、免疫浊度法和标记免疫测定法等, 而其中的乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法是目前公认的最为理想的2种方法。我们分别用这2种方法检测临床血清标本中hs-CRP浓度, 评估他们的敏感性和精确性。

一、 材料和方法
1. 标本来源

太和医院住院患者130例, 其中冠心病患者42例, 有心肌缺血表现而冠脉造影检查正常者88例。门诊体检健康者44名, 排除感染、手术、创伤。采集空腹静脉血5 mL, 及时分离血清, 置-70 ℃冰箱保存备用。

2. 仪器和试剂

(1)仪器:日立7170型全自动生化分析仪(日本), Beckman Array360特种蛋白检测仪(美国); (2)试剂:乳胶增强透射免疫比浊法检测试剂盒及配套的校准品由武汉中太生物技术有限公司提供, 产品编号为YZB/鄂 0586-2008, 批准文号为20050149, 最低检测限0.1 mg/L, 线性范围0.1~20 mg/L。速率散射免疫比浊法检测试剂CRP定标卡、定标液由Beckman公司提供, 注册证号为M2070527, 最低检测限0.1 mg/L, 线性范围0.1~200 mg/L。

3. 方法

(1)乳胶增强免疫透射比浊法:将标准品稀释配制成5个不同浓度的标准品— — 10、19、38、76和162 mg/L, 进行5点定标, 形成标准曲线。标本为20 μ L, 试剂1为180 μ L, 试剂2为35 μ L, 波长340 nm, 5 min后进行透射比浊; (2)速率散射免疫比浊法:用Beckman公司配备的定标卡进行校准, 标本量为200 μ L, 试剂量为50 μ L, 30 s完成比浊测定。

4. 统计学方法

检验结果以 x̅± s表示, 以SPSS 13.0软件包作统计学分析。

二、结果

不同hs-CRP浓度同时以2种方法检测, 结果见表1。

表1 乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法测定CRP结果比较
三、讨论

临床常规测定CRP的方法标本浓度一般为3~200 mg/L, 因缺乏较高的敏感性已不足以预测心血管事件的危险。近年相继采用乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法等技术大大提高了分析的敏感性, 可测定低浓度(如0.01~3 mg/L)范围内CRP浓度。

乳胶增强透射免疫比浊法是依据标本中CRP与相应的抗体在液相中产生反应, 生成抗原抗体复合物, 并产生一定的浊度, 其浊度的高低与标本中的hs-CRP浓度呈正比[1]。速率散射免疫比浊法是测量入射光遇到CRP与抗体形成的复合物后呈一定角度散射的光量, 抗原抗体反应速率快速达到峰值, 该峰值的高低与抗原量呈正比, 通过动态测定达到峰值前的散射光量获知待检抗原浓度[2]。

本研究结果表明, 2种检测方法在3~5、5~10和> 10 mg/L范围内测定hs-CRP浓度的相关系数分别为0.996、0.995、0.982, 表明2种检测方法的相关性较好。而在< 1及1~3 mg/L的测定中, 2种方法的相关系数分别为0.928和0.930。由于在乳胶增强透射免疫比浊法检测中, 如果抗原抗体复合物的数量太少, 则阻挡不了光线的通过, 因此在血清hs-CRP浓度太低时测定的敏感性会有所影响。而速率散射免疫比浊法是测定抗原抗体反应复合物形成速度最快时间段的信号值, 可测到最大速率散射信号峰值, 因此该测定不受本底散射信号的干扰, 检测快速, 敏感性高, 对检测微量的hs-CRP更为理想[3]。本研究还发现, 在高浓度的hs-CRP测定中, 如hs-CRP浓度> 10 mg/L, 由于抗原过量, 乳胶增强透射免疫比浊法测定时, hs-CRP浓度明显超出了检测限上限, 会发生测定结果显著低于实际含量或无法测出的现象。而在速率散射免疫比浊法中, 为保证准确性和精确性, 仪器设计有抗原过量检测系统, 提示应将待测标本进一步稀释, 重新进行检测, 以获取全部抗原的真实浓度, 本研究通过5倍稀释标本, 得到了较高浓度hs-CRP的精确值。由此看来, 速率散射免疫比浊法在低值和高值测定中优于乳胶增强透射免疫比浊法。

临床上如将CRP用于急慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、手术损伤等观察, 则完全可用普通检测方法如乳胶凝集试验、免疫沉淀法进行检测; 如用于健康人心血管疾病发生风险的非特异性炎症预测指标, 则需采用更为精确、敏感的乳胶增强透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法, 特别是其含量较低时, 更能做到早期发现、预防和诊治。

hs-CRP测定方法简便, 个体日间和生理变异较少, 是心血管事件一个较好的预测指标, 美国已将hs-CRP检测作为每年健康体检的内容之一, 其检测费用低廉而效果明显, 应在临床加以推广应用。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 杨溢. 免疫比浊法测定血清C-反应蛋白的评价[J]. 四川省卫生管理干部学院, 2003, 22(3): 165-166. [本文引用:1]
[2] 陈晓玲. 速率散射比浊法与胶乳凝集法检测血清C反应蛋白的评价[J]. 上海医学检验杂志, 2002, 17(2): 141-145. [本文引用:1]
[3] 陶义训. 现代医学检验仪器导论[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2002: 85-97. [本文引用:1]