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王芝, 康海虎. 人类免疫缺陷病毒载量与T淋巴细胞检测分析. 2009, 24(9): 690-692
  
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人类免疫缺陷病毒载量与T淋巴细胞检测分析
王芝, 康海虎
青海省传染病专科医院检验科,青海 西宁 810000

作者简介:王 芝,女,1957年生,副主任技师,主要从事分子生物学研究。

摘要
目的

分析获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者及人类免疫缺陷病毒(HIV)携带者病毒载量与CD3、CD4、CD8淋巴细胞含量及CD4/CD8比值的关系。

方法

采用病毒载量仪实时核酸扩增检测分析HIV载量,用四色流式细胞技术计数CD3、CD4、CD8淋巴细胞。

结果

19例HIV携带者病毒载量(3 600±700)IU/mL,CD3(1 498±329)个/μL,CD4(401±76)个/μL,CD8(891±316)个/μL,CD4/CD8 0.45±0.07,8例AIDS患者病毒载量(75 000±23 000)IU/mL,CD3(1 568±698)个/μL,CD4(92±59)个/μL,CD8(693±312)个/μL,CD4/CD8 0.26±0.09。

结论

检测HIV感染和AIDS患者血浆中的病毒载量及全血中的CD3、CD4、CD8淋巴细胞绝对计数,是观察和了解患者病程发展的理想方法。

关键词: 人类免疫缺陷病毒; 获得性免疫缺陷综合征; 病毒载量; T淋巴细胞
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)09-0690-03
Abstract
Keyword:

T淋巴细胞的免疫功能对获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和人类免疫缺陷病毒(HIV)携带者的病情进展有重要影响。我们观察了AIDS患者和HIV携带者的病毒载量与CD3、CD4、CD8淋巴细胞含量及CD4/CD8比值的关系。

材料和方法
一、研究对象

青海省传染病专科医院2005年2月至2008年3月门诊随诊及住院患者HIV携带者19例, AIDS患者13例, 排除先天性T细胞免疫缺陷。AIDS和HIV感染的诊断按照卫生部2005年制定的《艾滋病诊疗指南》的诊断标准和HIV感染诊断标准, 酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选为HIV抗体阳性, 以免疫印迹试验为确认试验测定血清HIV抗体, 均经青海省疾病控制中心筛选, 由青海省疾病控制中心HIV确认实验室证实病例, 其中男25例, 女7例, 年龄26~49岁, 平均年龄(35± 6)岁, 其中5例AIDS患者症状明显, 8例AIDS患者无明显症状。同时随机抽取健康查体者20名, 男13名, 女7名, 平均年龄37岁, 排除HIV感染、病毒性肝炎及其他传染性疾病。

二、仪器与试剂

HIV病毒载量检测采用法国生物梅里埃Nuclisens EasyQ病毒载量仪及Mini Mag核酸提纯仪。使用仪器配套试剂, 严格按试剂说明书要求规范操作。T淋巴细胞计数采用美国Beckman coulter Epios XL流式细胞仪。使用仪器配套试剂, 严格按试剂说明书要求规范操作。

三、方法

HIV病毒载量检测首先按要求将所需血浆核酸提纯, 内标定量、分子信标探针、实时核酸扩增检测分析HIV病毒载量。T淋巴细胞计数首先用 CD45-异硫氰酸荧光素(FITC)/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5四色抗体避光染色, 加入A、B、C稀释液, 以荧光球为绝对值, 所得数据为T淋巴细胞绝对计数值。

四、 统计学方法

采用SPSS 11.0软件进行t检验分析。

结 果

一、3组人群HIV载量与T淋巴细胞亚群绝对计数结果见表1。19例HIV携带者病毒载量范围在2 900~4 300 IU/mL不等, CD3 1 169~1 827个/μ L、CD4 325~477个/μ L, CD8 575~1 207个/μ L不等。8例无明显症状的AIDS患者病毒载量范围为52 000~98 000 IU/mL, 其中3例病毒载量79 000~98 000 IU/mL不等, CD3 870~2 266个/μ L、CD4 33~151个/μ L, CD8 381~1 005个/μ L。HIV病毒复制对CD3、CD8 T淋巴细胞绝对数影响不明显。HIV携带组、AIDS组HIV载量、CD3、CD4、CD8和CD4/CD8分别与对照组比较, 差异有统计学意义(P< 0.01)。

表1 3组人群HIV载量与T淋巴细胞绝对计数及比值结果( x̅± s)

二、AIDS患者首次检测CD4淋巴细胞与病毒载量分析见表2。13例患者首次检测病毒载量范围在58 000~86 000 IU/mL不等, CD4淋巴细胞132~196个/μ L, 这些患者时隔1~2年不等 , 在1年内 5例患者经抗病毒治疗(高效联合抗逆转录病毒治疗), 病毒载量8 000~16 000 IU/mL, CD4淋巴细胞317~513个/μ L, 8例患者经过1年的无症状期后病毒载量增到52 000~98 000 IU/mL不等, CD4淋巴细胞降到 94~168个/μ L, 其中3例患者在2年内病毒载量76 000~98 000 IU/mL不等, CD4淋巴细胞33~47个/μ L不等。病毒载量与CD4呈明显反比关系。

表2 AIDS患者距首次检测不同时间HIV载量与CD4淋巴细胞绝对计数结果
讨 论

HIV感染检测病毒载量和T淋巴细胞是2个必检项目, 根据中国疾病预防控制中心2004年10月颁布实施的《全国艾滋病检测技术规范》, 病毒载量决定着HIV复制量的高低, 是确定HIV感染性疾病治疗是否有效的重要依据。

T淋巴细胞免疫功能状况是决定HIV感染性疾病发展最重要的因素。在HIV感染初期, T淋巴细胞稳定, CD4淋巴细胞略有下降, 但AIDS期免疫功能下降, T淋巴细胞特别是CD4淋巴细胞下降很明显, 最终导致免疫功能缺陷, 所以T淋巴细胞的数量决定着人体免疫力的高低。HIV感染性疾病的病程发展速度与CD4淋巴细胞绝对计数的下降密切相关, 感染HIV, CD4淋巴细胞即逐渐减少, HIV主要侵犯的是CD4淋巴细胞, 引起宿主陷入免疫功能不全状态。所以CD4淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的细胞, 其数量直接影响着人体的免疫功能, 正常的CD4淋巴细胞绝对数在500~1 200个/μ L不等, 而HIV感染者CD4淋巴细胞绝对数一般会降到500个/μ L以下。本研究13例患者首次检测CD4淋巴细胞降到临界点(< 200个/μ L), 按艾滋病诊疗标准[1]可视为AIDS, 进入AIDS期, 机体的免疫功能下降, 使宿主陷入免疫功能不全状态, 容易发生机会性感染[2]。8例患者经过1年较长的无症状期后, CD4淋巴细胞绝对数降至200个/μ L以下, 其中3例CD4淋巴细胞严重降至50个/μ L以下, 已经错过了最佳治疗时机, 于是出现卡氏肺孢子虫肺炎等临床症状[3]。表1中CD8 T淋巴细胞较稳定但略呈下降趋势, CD4/CD8比值下降明显, 也是感染的重要指标[4]。

血中HIV病毒载量的测定直接反映病毒活跃程度, 其作为评估患者病情的临床意义已被公认, 既可判定病情的进展, 又可以用于指导抗病毒药物的选择和疗效的监测。HIV病毒载量可直观反映HIV活跃程度, 与CD4、 CD4/CD8呈明显的相关性。当病毒载量较高时, HIV感染者体内病毒载量与CD4、 CD4/CD8比值的变化趋势相反。急性感染期HIV在体内大量复制, 本研究8例AIDS患者HIV载量> 50 000 IU/mL, 其中3例病毒载量高达79 000~98 000 IU/mL不等。利用病毒载量可在患者急性感染期检测出高水平含量的特点, 检测病毒载量结果可以判断患者是否处于急性感染期, 可指导抗病毒药物的选择以及监测抗病毒治疗效果。因此, 将HIV病毒载量作为HIV复制重要指标, 同时检测HIV病毒载量和T淋巴细胞计数对抗病毒药物疗效的观察、指导药物用量和免疫功能的重建起着极其重要的作用。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 马金翠, 宋玉霞, 阿迪里, 等. 16例AIDS病人治疗前后CD4+T淋巴细胞绝对计数及病毒载量结果分析[J]. 中国艾滋病性病, 2008, 10(5): 506-507. [本文引用:1]
[2] 姚茂军, 徐小平, 瞿章书, 等. 湖南湘西23例艾滋病病人机会性感染分析[J]. 中国艾滋病性病, 2008, 12(6): 625. [本文引用:1]
[3] 刘静, 张晏, 张子宁, 等. 艾滋病病毒感染者淋巴细胞总数和CD4阳性T淋巴细胞数相关性研究[J]. 中华检验医学杂志, 2004, 27(3): 156-158. [本文引用:1]
[4] 邱志峰, 李太生, 阮桂仁, 等. 有效抑制HIV复制下AIDS患者CD4+T淋巴细胞的动态变化[J]. 中国医学科学院学报, 2006, 28(2): 386-389. [本文引用:1]