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骆华, 骆方军. CD62P和CD63评价羟乙基淀粉130/0.4对血小板活化抑制的意义. 2009, 24(7): 542-544
  
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CD62P和CD63评价羟乙基淀粉130/0.4对血小板活化抑制的意义
骆华, 骆方军
浙江省诸暨市人民医院检验科,浙江 诸暨 311800

作者简介:骆华,女,1974年生,学士,主管技师,主要从事临床输血检验工作。

摘要
目的

探讨CD62P和CD63在羟乙基淀粉(HES)130/0.4对血小板(PLT)活化抑制的意义。

方法

采用流式细胞术检测输HES130/0.4前基础值(T1期 )、输注完后(T2期)、手术完毕1h(T3期)的PLT膜糖蛋白CD62P、CD63的表达水平。

结果

CD62P、CD63表达水平在T2期平均分别下降了24.3%和24.0%,明显低于T1期,差异有统计学意义( P<0.01);CD62P在术后1 h恢复至T1期水平( P>0.05)。CD63表达水平在术后1 h仍有6.7%(2/30)的病例未达到正常水平( P<0.05)。

结论

作为HES130/0.4对PLT活化抑制的评价中,以CD62P和CD63两者联合检测为宜。

关键词: 血小板膜糖蛋白; CD62P、CD63; 羟乙基淀粉130/0.4
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)07-0542-03
Abstract
Keyword:

羟乙基淀粉(HES)是目前常用的、比较安全的血浆代用品, 由于HES不同的理化特性, 对凝血系统的干扰是有区别的[1]。Stogermulle 等[2]研究结果表明, HES可使血小板(PLT)膜结构发生变形, 糖蛋白空间构型改变, 从而减弱激动剂对其的活化作用。HES对PLT活化程度评价的常用指标是P-选择素(CD62P)。其实CD62P只在脱颗粒的PLT表面, 而脱颗粒的PLT在继续进入循环, 恢复功效时会迅速丢弃其表达部分。因此, 用CD62P对活化PLT的检测适用于新近发生(在5 min之内)或连续性的活化刺激的标本。而不适用于一些较长时间或者末梢性的刺激的标本, 其用于连续输注高溶性稀释液HES对PLT是否活化的观察, 有一定的局限性, 而CD63与CD62P一样在脱颗粒的PLT表面表达, 却无上述现象。本实验采用流式细胞术检测CD63、CD62P, 旨在观察两者在HES130/0.4对PLT活化抑制评价上是否存在差异。

材料和方法
一、材料

1. 标本来源 选择浙江省诸暨市人民医院腹部手术老年患者, 年龄65~81岁, 手术种类包括(贲门癌根治术、胃癌根治术、直肠癌根治术、结肠癌根治术)美国麻醉医师协会(ASA)Ⅰ ~Ⅱ 级共30例。血红蛋白(Hb)> 110g/L, PLT> 100× 109/L, 红细胞压积(HCT)> 28%, 活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fb)等各项指标均在正常范围内, 心、肺、肝、肾功能正常, 无血浆代用品禁忌症的患者。

2. 仪器与试剂 EPICS-XL型四色流式细胞仪(美国Coulter公司); CD41异硫氰酸荧光素(FITC)IM0649、CD62P-PE IM1759、CD63-PE IM1165; 同型对照分别为Mouse IgG1-FITC IM0639、Mouse IgG1-PE IM0670、Mouse IgG2a-PE IM1203(法国ImmunoTech公司)。

二、方法

采用Flow-check荧光微球调整光路, 使半峰度(HPCV)在2%以内, 分别用真空管于输液前基础值(T1期 )、输注完毕(T2期)、手术后1 h(T3期)抽取枸橼酸钠抗凝静脉血2 mL。为防止因操作过程繁多而激活PLT, 本实验取全血5 μ L加入各20μ L CD41、CD62P单克隆抗体用于检测CD62P的表达。另1管也取全血5 μ L加入各20 μ L CD41、CD63单克隆抗体用于检测CD63的表达。再取全血5 μ L加入各20 μ L相应的同型对照; 室温放置15 min后加PBS缓冲液1mL上机检测。前向散射光(FS)和侧向散射光(SS)确定全血中的PLT群, 再用SS和CD41设门, 保证设门PLT在95%以上, 收集10 000个, 记录CD62P(%)、CD63(%)表达水平。

三、统计学方法

以P< 0.05为差异有统计学意义, 采用SPSS11.5软件, 作重复测量设计的方差分析。

结 果
一、PLT颗粒设门及CD62P、CD63的全血检测方案

见图1、图2、图3、图4。

图1 FS和SS图上选定PLT颗粒

图2 SS和CD41图上选定PLT颗粒

图3 PLT颗粒CD62P的表达

图4 PLT颗粒CD63的表达

二、CD62P、CD63表达水平

在T2期平均分别下降了24.3%和24.0%。明显低于T1期, 差异有统计学意义(P< 0.01), CD62P术后1 h恢复至T1期(P> 0.05)。CD63的表达水平在术后1 h的表达水平仍有6.7%(2/30)未达到基础水平(P< 0.05), 结果见表1。

表1 HES130/0.4对各时点PLT膜糖蛋白表达水平的影响( x̅± s)
讨 论

HES 130/0.4具有低克分子取代级、改进的C2/C6取代比等优异的理化特性, 对机体凝血功能影响轻微[3]。CD62P存在于PLT胞浆α 颗粒和内皮细胞Weibel-Palad体内, 当PLT激活或受凝血酶刺激后, 此抗原转移到PLT表面, CD63是相对分子质量为53的溶酶体膜糖蛋白, 在PLT激活后跨位于浆膜, 为PLT活化的特异性标志。Chen等[4]用CD62P评价HES 130/0.4对PLT的活化评价中发现, HES 130/0.4能显著抑制PLT凝集, 输注后6 h即恢复到正常水平。此点与本实验结果一致。但PLT膜糖蛋白极不稳定, 易活化。本实验采用全血, 孵育15 min检测, 整个过程从抽血到检测完毕不超过30 min, 保证检测的标准化和结果的可靠。结果发现, CD63在术后1 h仍有6.6%(2/30)没有恢复至T1水平。可能原因是HES 130/0.4作为血浆代用品是根据手术情况连续输注的, 随着血液的流动, CD62P一方面表达, 一方面又脱落, 因此从检测数据来看其下降速度较快, 而CD63不存在这种边表达又边脱落的现象。因此在观察时间段内CD63仍有6.6%的病例不能恢复至输注前的水平。鉴于以上原因, 在评价血浆代用品是否能抑制PLT活化时, 还是以CD62P和CD63联合评价为宜, 有利于麻醉医师对老年患者应用血浆代用品后发生高凝状态的预防。

至于使用HES 130/0.4在手术后多长时间CD63的表达水平会完全恢复至正常水平, 仍需作进一步探讨。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 李月光, 张玉龙, 夏闵涛, 等. 羟乙基淀粉130/0. 4对血小板膜糖蛋白表达的影响[J]. 江苏医药, 2007, 33(5): 495-496. [本文引用:1]
[2] Stogermuller B, Stark J, Willschke H, et al. The effect of hydroxyethyl starch 200 KD on platelet function[J]. Anesth Analg, 2000, 91(4): 823-827. [本文引用:1]
[3] 单闯, 吴国荣, 张顺. 急性高容量血液稀释对全髋关节置换术患者血小板膜糖蛋白表达的影响[J]. 中华麻醉学杂志, 2003, 23(9): 648-650. [本文引用:1]
[5] Chen G, Yan M, Lu QH, et al. Effects of two different hydroxyethyl starch solutions HES 200/0. 5 vs. HES 130/0. 4 on the expression of platelet membrane glycoprotein[J]. Acta Anaesthesiol Scand , 2006, 50(9): 1089-1094. [本文引用:1]