1. 研究对象及分组 URSA组 为 2006年12月至2008年12月就诊于台州医院门诊的URSA未孕患者70例, 年龄(28.6± 3.9)岁, 自然流产 ≥ 2次。排除染色体、解剖、内分泌方面的异常, 排除感染、自身免疫性疾病。病理妊娠组 20例, 年龄(26.3± 3.6)岁, 为同期2次难免流产患者, 自然流产 ≥ 1次, 本次妊娠B超证实胚胎停止发育。正常妊娠组 22例, 年龄(25.4± 3.0)岁, 为同期就诊、妊娠 12周内人工流产的正常妇女, B超证实胚胎发育正常。正常非孕妇女组 20例, 年龄(29.3± 4.1)岁。

2.主要仪器和试剂 美国BD公司生产的FACScalibur型流式细胞仪。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人IgG1(IgG1-FITC)、藻红蛋白(PE)标记的小鼠抗人IgG2a(IgG2a-PE)、CD25-FITC(IgG1)、CD4-PE(IgG2a)均购自美国BD公司。

3. 流式细胞术(FCM)分析 数据经Cell Quest软件获取和分析, 每份标本检测1× 10⁴个细胞 计算CD4⁺ CD25高表达Treg比例。

4.统计学方法 利用SPSS 13.0软件, 用 x̅± s对数据进行描述, 采用t检验进行统计分析。

URSA组外周血CD4⁺CD25高表达Treg细胞比例明显低于正常非孕妇女组, 两组比较差异有统计学意义(P< 0.01); 病理妊娠组外周血中CD4⁺CD25高表达Treg细胞低于正常妊娠妇女组, 两组比较差异有统计学意义(P< 0.01)。见表1。

表1

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表1 4组妇女外周血CD4+CD25高表达Treg细胞比例的比较(%, x̅± s) 组别 例数 CD4+CD25高表达 CD4+CD25低表达 CD4+CD25- URSA组 70 2.90± 1.45* 14.08± 5.30 82.10± 7.79 正常非孕妇女组 20 4.26± 0.67 17.55± 3.90 78.25± 4.00 正常妊娠组 22 6.45± 0.96# 29.38± 11.28 65.71± 6.63 病理妊娠组 20 4.27± 1.51 18.42± 6.39 77.31± 6.66 注:与正常非孕妇女组比较, * P< 0.01; 与病理妊娠组比较, #P< 0.01

表1 4组妇女外周血CD4+CD25高表达Treg细胞比例的比较(%, x̅± s)

Treg细胞是近10年来免疫学研究的一个热点。人类Treg细胞仅存在于CD4⁺CD25高表达亚群 , 而CD4⁺CD25低表达T细胞亚群主要是正常活化的 T细胞^[1], CD4⁺CD25高表达Treg细胞才是一群具有抑制作用的Treg细胞。其来源于胸腺 DC细胞, 能诱导胸腺 CD4⁺CD25^-T淋巴细胞增殖分化为 CD4⁺CD25⁺ Foxp3的Treg细胞^[2], Foxp 3是Treg细胞发挥功能的关键。

正常妊娠妇女孕期CD4⁺CD25⁺ Treg细胞绝对数增多, 且在整个妊娠期呈现动态变化, 早孕外周血中的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的比例高于非孕女性, 至孕中期达到峰值^{[3, 4]}。本研究结果与文献报道一致, 提示在正常妇女的外周血中, 存在一定数量的CD4⁺CD25高表达Treg细胞, 发挥着免疫抑制功能, 而在妊娠时进一步得到加强, 诱导母胎免疫耐受, 进而使妊娠获得成功; 而URSA组CD4⁺CD25高表达Treg细胞比例的降低, 有可能不能有效下调母胎半同种移植抗原的免疫应答, 从而使胚胎遭到母体的免疫功击而被排斥导致流产。本研究进一步发现, 病理妊娠组外周血中CD4⁺CD25高表达Treg细胞明显低于正常妊娠组, 提示病理妊娠时, 有可能CD4⁺CD25高表达Treg细胞比例达不到母胎免疫耐受所需, 使效应 T细胞对外界刺激的增殖反应不能有效被Treg细胞反馈抑制, 胎儿受到效应 T细胞功击引起免疫应答, 导致免疫性流产发生。

因实验时试剂供应的原因, 本研究未同时测定CD4⁺CD25⁺细胞上的Foxp 3抗原, 使研究结果的科学性和先进性受到一定的影响, 有待进一步研究时完善。

目前研究表明, CD4⁺CD25高表达Treg细胞参与母胎免疫耐受, 但有关其效应机制及其与URSA发生关系还不明确, 尚需进一步实验研究。