引用本文
席雪芹, 穆原, 金跃. 葡萄糖对尿液白细胞干化学法测定影响的探讨. 2009, 24(4): 274-277
XI Xueqin, MU Yuan, JIN Yue. Investigation of the effects of glucose on urine leukocyte esterase test. Labratory Medicine, 2009, 24(4): 274-277  
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葡萄糖对尿液白细胞干化学法测定影响的探讨
席雪芹1, 穆原2, 金跃1
1. 徐州医学院附属淮安医院检验科,江苏 淮安 223002
2. 南京医科大学第一临床医学院,江苏 南京 210029

作者简介:席雪芹,女,1980年生,学士,技师,主要从事临床基础检验工作。

摘要
目的

分析葡萄糖(Glu)对尿液白细胞(WBC)干化学酯酶法(简称干化学法)测定的影响,以提高检测准确率。

方法

对584例WBC镜检阳性的临床尿液检测资料回顾分析其Glu和WBC干化学结果;选取只有WBC干化学结果分别为±、+、++、+++阳性的新鲜尿液各5份,每份2管(每管10 mL),分为Glu加入组和H2O2加入组,分别对每组样本加入不同浓度Glu和H2O2,并进行干化学测定。在Glu加入组每次测定的同时,用去除Glu模块的试条进行重复测定。

结果

584例尿检结果中,Glu +++组与Glu ++++组的WBC干化学假阴性率均高于Glu阴性组( P=0 .001, P=0.000)。WBC干化学阳性检出数随尿Glu浓度的升高而减少[优势比( OR) =0 .100, P=0.000],但不受H2O2的影响。

结论

尿Glu浓度为83.33 mmol/L(15 g/L)时,尿WBC干化学测定已明显受干扰,其受干扰程度随尿Glu浓度的升高而增大,是Glu干扰了尿WBC干化学测定,而非Glu模块的反应产物H2O2。

关键词: 葡萄糖; 白细胞酯酶; 尿液分析; 干化学法
中图分类号:R446.12 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)04-0274-04
Investigation of the effects of glucose on urine leukocyte esterase test
XI Xueqin1, MU Yuan2, JIN Yue1
1.Department of Clinical Laboratory, Huai'an Hospital, Xuzhou Medical College, Jiangsu Huai'an 223002, China
2.The First Clinical Medical College of Nanjing Medical University, Jiangsu Nanjing 210029, China
Abstract
Objective

To explore the effects of glucose (Glu) on urine leukocyte esterase test, and seek the strategy to ensure the accuracy of urinalysis.

Methods

Urinary leukocyte and Glu were measured by dry chemistry method, the results were analyzed retrospectively in 584 cases whose urinary leukocytes were ide.pngied positive by microscope. 5 fresh urinary samples of which leukocytes were measured positive (including ±, +, ++, +++) in urinalysis using dry chemistry method as well as the rest tests negative were divided into 2 tubes (10 mL per tube) Glu was added in one group, H2O2 was added in another group. Urines of the two groups were assayed by dry chemistry method. Additionally urinalysis performed in Glu-added group were repeated by urine dipstrip without Glu test film in the meanwhile.

Results

In the 584 cases, the false negative rates of Glu +++ group and Glu ++++ group were higher than that of Glu negative group (P =0 .001, P=0.000). The positivities of urinary leukocyte assayed by dry chemistry method was decreased while the Glu concentration increased [odds ratio ( OR)=0.100, P=0.000], but was not interfered by H2O2.

Conclusions

The interference occurs obviously when the Glu concentration in urine raises to 83.33 mmol/L (15g/L), and grows intensively while the Glu concentration increases. The interference is just from Glu in urine, but not from H2O2 resulted in the reaction of Glu on the film of the dipstrip.

Keyword: Glucose; Leukocyte esterase; Urinalysis; Dry chemistry

尿液白细胞(WBC)检测是临床重要的检验指标之一, 对泌尿系感染性疾病的诊断及鉴别诊断有重要意义。尿WBC干化学法多采用酯酶法测定, 以其快速简便的特点, 已被广泛应用, 但只局限与中性粒细胞反应, 且易受温度、尿pH值、药物、试剂、仪器、样本保存方法及时间等因素的影响。国内已有多家报道[1~7], 在尿液葡萄糖(Glu)阳性的患者中, WBC干化学法测定结果的假阴性率有所提高, 但多仅限于尿检结果的回顾性分析。为此, 我们就Glu对尿液WBC干化学法测定的影响加以探讨。

材料和方法
一、仪器与试剂

尿干化学检测采用试带法(韩国盈东URISCAN pro型尿液分析仪及配套尿11项试条); 尿液质控品为上海伊华医学科技有限公司产品; 镜检用OLYMPUS CH-2显微镜和牛鲍氏计数板; Glu干粉(C6H12O6· H2O)购自上海惠兴生化试剂有限公司), 用时以双蒸水配成0.5 g/mL(w/v)的Glu加入液; 30% H2O2(购自国药集团化学试剂有限公司), 用时以双蒸水稀释成3%(v/v)的H2O2加入液。

二、尿液检测方法

用一次性塑料尿杯留取尿液, 吸管混匀后取10 mL加入刻度离心管, 先进行干化学检测, 再以1 500 r/min离心5 min后, 吸去上清, 留取沉淀0.2 mL, 充分混匀后充液到牛鲍氏计数板, 以高倍镜计数WBC, 参考值见文献[8], 以男性> 5个/μ L、女性> 12个/μ L为WBC镜检阳性。WBC镜检为阳性而干化学阴性者为干化学法假阴性。所有实验均在取样后2 h内完成。尿液干化学质控方法参照文献[9]进行。

三、回顾性资料

对徐州医学院附属淮安医院2006年9月至2007年9月尿Glu阳性(包括± ~++++)且WBC镜检阳性的220例患者(男女比为4:6)尿检结果进行回顾性分析, 以尿Glu阴性且WBC镜检阳性的364例患者(男女比为4:6)作为对照组。

四、干扰物加入试验

随机选取尿检结果仅WBC干化学结果阳性(包括± 、+、++、+++)的新鲜尿液, 各等级5份, 每份2管(每管10mL), 随机分为Glu加入组和H2O2加入组。

1. Glu加入试验 在Glu加入组的每份样本中分步加入Glu加入液, 使Glu终浓度依次为8.33、16.67、38.89、83.33、166.67 mmol/L, 相对应的干化学等级分别为± 、+、++、+++、++++。于每步加入后颠倒混匀, 立即进行1次干化学测定, 同时用去除Glu模块的试条进行重复测定。

2. H2O2加入试验 在H2O2加入组的每份样本中分步加入H2O2加入液, 使H2O2终浓度依次为1.76、5.29、12.35、24.70、44.12 mmol/L, 相对应的干化学等级分别为± 、+、++、+++、++++。于每步加入后颠倒混匀, 立即进行1次干化学测定。

五、统计学方法

统计学软件为Stata/SE 9.2, 率的比较用χ 2检验; 多组等级资料比较采用Kruskal-Wallis秩和检验, 组间多重比较用Wilcoxon秩和检验; 多变量关系分析采用非条件logistic回归。

结 果
一、回顾性分析

584例WBC镜检阳性的临床尿检资料中, Glu各等级组的WBC干化学结果差异有统计学意义(χ 2=31.58, P=0.000)。Glu +++组与Glu ++++组的WBC干化学假阴性率均高于Glu阴性组(χ 2=10.77, P=0.001; χ 2=24.62, P=0.000)。见表1。

表1 WBC镜检阳性尿标本的干化学结果
二、Glu加入试验

不同Glu浓度加入组的尿WBC干化学阳性检出数差异有统计学意义(χ 2=22.438, P=0.000)。Glu +++组与Glu ++++组的WBC干化学阳性检出数均低于Glu阴性组(P=0.004、P=0.000)。见表2。logistic回归分析提示, WBC干化学阳性检出数随尿Glu浓度的升高而减少[优势比(OR)=0.100, P=0.000]。用去除Glu模块的试条进行重复测定, 得到相似的结果, Glu +++组与Glu ++++组的WBC干化学阳性检出数均低于Glu阴性组(P=0.004、P=0.000)。见表3。

表2 不同Glu浓度时WBC干化学阳性检出数
表3 去除Glu模块的试条在不同Glu浓度时的WBC干化学阳性检出数
三、H2O2加入试验

分步加入H2O2后, 尿Glu干化学结果呈等级递增, 提示H2O2加入成功, 见表4。不同H2O2浓度组的WBC干化学阳性检出数差异无统计学意义(χ 2=0.496, P=0.992)。

表4 不同H2O2浓度时WBC干化学阳性检出数
讨 论

干化学法测定WBC是基于中性粒细胞浆内含有酯酶, 可催化吲哚酚酯水解出吲哚酚和有机酸, 吲哚酚可进一步氧化成靛蓝; 或吲哚酚和重氮盐反应生成重氮色素的原理, 其颜色深浅与粒细胞的多少呈正比例关系。但淋巴细胞与单核细胞胞质中不含酯酶, 因此该检测方法只对粒细胞敏感, 从而存在一定比例的假阴性。本研究也证实此点, 当尿Glu阴性时假阴性率为20.6%。

干化学法检查与显微镜检查是2种基于不同原理的实验方法, 并无完全对应关系。WBC结果报告是以镜检为判断标准, 而干化学仅用于筛检, 其阳性等级并非包含更多的诊断价值, 因此对于表1中WBC干化学结果只分为阳性和阴性2类。

本研究结果表明, 尿Glu浓度为83.33 mmol/L(15g/L)时, 已明显影响干化学法检测WBC, 使之检测不出, 其受干扰程度随尿Glu浓度的升高而加大, 当尿Glu为“ ++++” 时, 其假阴性率高达53.1%。多数作者认为[1~6], 该假阴性可能与尿Glu、WBC干化学法同时进行有关。尿Glu测定一般采用氧化酶法, 产生H2O2等反应物质, 后者能抑制白细胞胞浆内的酯酶活性, 从而干扰了白细胞酯酶的反应, 但本研究结果并非支持此假说。在原WBC干化学阳性的尿液中加入梯度浓度H2O2后进行干化学检测, 其Glu阳性等级呈现梯度递增, 表明加入的H2O2很好地模拟了Glu氧化酶-过氧化物酶反应, 但WBC结果并未发生明显变化。而在Glu加入组, WBC干化学阳性检出数随Glu浓度的升高而减少, 如此可以认为Glu对尿WBC干化学检测的干扰, 并非因H2O2所致。但在Glu模块上发生的酶促反应中, 并不止H2O2一种产物的生成, 为了完全排除Glu模块反应的影响, 我们将试条上的Glu模块去除后进行Glu加入实验, 结果表明是Glu自身干扰了WBC干化学法测定, 而非Glu模块的反应产物H2O2所致。

Glu对尿WBC干化学测定的干扰, 具有重要的临床意义。尿Glu阳性多发现于糖尿病患者, 尿WBC阳性提示泌尿系感染, 泌尿系感染也是糖尿病患者非常易发的并发症, 而且糖尿病合并泌尿系感染患者中有40%左右无自觉症状[10, 11], 感染可引起糖代谢的进一步恶化, 往往成为糖尿病酮症酸中毒的原因[12]。本研究结果表明, 当尿Glu达到“ +++” 时, WBC干化学假阴性率已超过45%。因此, 这些患者在初诊进行尿液常规检测时, 可能受尿Glu干扰引起WBC干化学结果假阴性, 从而导致糖尿病患者泌尿系感染的漏诊。因此, 对尿WBC干化学检测阴性的糖尿病患者的尿沉渣镜检显得很有必要。

The authors have declared that no competing interests exist.

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