产前筛查血样采集因素的探讨

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徐雪琴, 唐少华. 产前筛查血样采集因素的探讨. 2009, 24(2): 142-144
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《检验医学》编辑部

产前筛查血样采集因素的探讨

徐雪琴, 唐少华

温州市第二人民医院检验科,浙江温州 325000

作者简介:徐雪琴,女,1980年生,学士,技师,主要从事产前筛查与诊断工作。

基金:浙江省卫生厅基金资助项目(2002B050)

摘要

目的

探讨血样采集因素对人甲胎蛋白(hAFP)、人游离绒毛膜促性腺激素(hAFP、Free HCGβ)二联筛查测定结果的影响,以制定有效的改进措施。

方法

观察进食、溶血、脂浊和血清分离时间等因素对时间分辨荧光免疫分析技术检测hAFP、Free HCGβ结果的影响,观察其变化规律。

结果

进食使hAFP、Free HCGβ测定值偏低;溶血和脂浊对hAFP、Free HCGβ测定结果影响不明显;采血后样本置37 ℃ 2、4和6 h,置室温4和6 h时分离血清的各实验组与对照组(置37 ℃ 1 h内分离血清)Free HCGβ差异均有统计学意义。

结论

血清样本未能及时分离和进食对产前筛查结果有影响,建议空腹取血,在采集样本后放置室温并尽快分离血清,以保证产前筛查的质量。

关键词: 产前筛查; 甲胎蛋白; 游离绒毛膜促性腺激素; 时间分辨荧光免疫分析技术

中图分类号:R446.61 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)02-0142-03

Abstract

Keyword:

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目前, 我国产前筛查主要检测孕中期(15~20周)孕妇静脉血人甲胎蛋白(hAFP)、人游离绒毛膜促性腺激素(Free HCGβ )水平, 结合孕周、末次月经、采血日期等因素, 经Multicalc 2000软件系统分析, 评估胎儿患唐氏综合征、18-三体和神经管畸形的风险率。鉴于绒毛膜促性腺激素(HCG)不稳定, 易降解, 影响筛查指标Free HCGβ 的水平, 可能导致漏检, 我们着重探讨了检测前血样采集因素(进食、溶血、脂浊和血清分离时间)对检测的影响, 这是一个最容易被忽略却是至关重要的环节。该研究为减少或避免误检, 确保产前筛查质量, 制定有效的改进措施提供可靠依据。

材料和方法

一、样本来源及采集方法

志愿参加孕中期(15~20周)筛查的孕妇30名, 年龄20~31岁, 空腹抽取静脉血5 mL(不抗凝)分为2管, 分别置于37 ℃和室温, 在采样后1 h内及2、4和6 h时分离血清, 保存于-20 ℃冰箱, 7 d内同批测定; 统一进食(牛奶加面包)后2 h抽取静脉血, 置于37 ℃。1 h内分离血清, 保存于-20 ℃冰箱; 脂浊样本的采集方法通过加入不同量的脂浊血清样本(hAFP、Free HCGβ 水平正常)于筛查血清中, 在日立7170A型全自动生化分析仪上检测三酰苷油(TG)含量, 将TG> 5.65 mmol/L的样本列入重度脂浊组, TG 2.83~65 mmol/L的样本列入轻度脂浊组, 从而得到不同程度脂浊干扰的筛查血清样本; 溶血样本的采集方法通过外力作用捣碎红细胞, 离心后取血清用库尔特-JT血球计数仪测血红蛋白(Hb)含量, 将Hb< 2 g/L的样本列入轻度溶血组, Hb 5~12 g/L的样本列入重度溶血组, 从而得到不同程度溶血干扰的筛查血清样本。

二、hAFP、Free HCGβ 的测定

筛查指标hAFP、Free HCGβ 的测定方法采用Wallac 1420型时间分辨荧光免疫分析系统及配套双标试剂盒(由贝因美公司提供)进行检测, 测定方法按说明书进行。基本原理如下:血清中的hAFP、Free HCGβ 被包被板上相应的单抗捕获, 形成抗原-抗体复合物, 再与荧光标记的hAFP、Free HCGβ 单抗结合, 形成抗体-抗原-标记抗体三明治夹心结构, 洗涤去除未结合组分, 加入增强液使荧光标记物解离, 形成强荧光的螯合物进行检测。

三、仪器

Wallac 1420型时间分辨荧光免疫分析仪及配套的Multicalc 2000软件分析系统。

四、统计学方法

各组数据以 $\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}$ ± s表示, 比较用配对t检验。

结果

一、血样本放置时间、温度对hAFP、Free hCGβ 测定的影响

置37 ℃ 2、4和6 h分离血清的实验组与对照组的Free HCGβ 水平差异有统计学意义; 置室温4和6 h分离血清的实验组与对照组的Free HCGβ 水平差异有统计学意义, 检测结果均高于对照组水平; 而各实验组的hAFP水平与对照组差异无统计学意义, 见表1。

表1 时间、温度对hAFP、Free HCGβ 测定的影响 (

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

血清分离时间	例数	hAFP值 (U/mL)	Free HCGβ 值 (ng/mL)
37 ℃ 1 h内	30	49.29± 10.65	16.31± 10.70
37 ℃ 2 h	30	45.58± 9.78	20.25± 9.87^*
37 ℃ 4 h	30	47.88± 9.12	27.38± 10.52^*
37 ℃ 6 h	30	50.10± 10.12	39.25± 9.29^*
室温 1 h	30	49.00± 9.29	16.22± 9.95
室温 2 h	30	48.25± 9.75	17.12± 10.15
室温 4 h	30	47.58± 8.98	22.03± 9.72^*
室温 6 h	30	50.25± 9.97	32.11± 10.23^*

注:与37 ℃ 1 h内比较, * P< 0.05

表1 时间、温度对hAFP、Free HCGβ 测定的影响 (

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

二、进食对hAFP、Free HCGβ 测定的影响

进食后2 h采血测得的hAFP和Free HCGβ 水平均与空腹采血所测值比较, 差异有统计学意义, 进食使hAFP和Free HCGβ 水平降低, 见表2。

表2 进食对hAFP、Free HCGβ 测定的影响 (

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

采血时间	例数	hAFP (U/mL)	Free HCGβ (ng/mL)
空腹	30	49.29± 14.66	16.31± 10.69
进食后2 h	30	45.66± 14.49^*	14.69± 8.67^*

注:与空腹时比较, * P< 0.05

表2 进食对hAFP、Free HCGβ 测定的影响 (

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

三、溶血对hAFP、Free HCGβ 测定的影响

本实验分别收集轻度溶血(< 2 g/L)和重度溶血(5~12 g/L)样本各10例, 其所测hAFP、Free HCGβ 水平与无溶血样本比较差异无统计学意义, 见表3。

表3 溶血对hAFP、Free HCGβ 测定的影响(

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

溶血程度	例数	hAFP值 (U/mL)	Free HCGβ 值 (ng/mL)
无溶血	10	41.30± 9.65	28.31± 7.70
轻度溶血	10	41.70± 9.78	29.52± 7.87
重度溶血	10	40.90± 9.12	27.38± 7.52

表3 溶血对hAFP、Free HCGβ 测定的影响(

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

四、脂浊对hAFP、Free HCGβ 测定的影响

本实验采用外加不同量的脂浊样本入筛查样本中, 形成不同程度的脂浊筛查样本, 共测试10例, 所测hAFP、Free HCGβ 水平与对照组比较, 差异均无统计学意义, 见表4。

表4 脂浊对hAFP、Free HCGβ 测定的影响(

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

脂浊程度	例数	hAFP值 (U/mL)	Free HCGβ 值 (ng/mL)
对照组	10	41.30± 9.65	28.31± 7.70
轻度脂浊	10	41.20± 9.05	29.01± 7.35
重度脂浊	10	42.05± 9.42	28.56± 7.24

表4 脂浊对hAFP、Free HCGβ 测定的影响(

\begin{matrix} \overset{̅}{x} \end{matrix}

± s)

讨论

孕中期(15~20周)孕妇外周血hAFP、Free HCGβ 的变化水平作为产前筛查唐氏综合征的指标已经被广泛采用, 国内近几年正在大力推广产前筛查工作, 以减少或避免唐氏患儿的出生。而影响产前筛查检测结果有多方面的因素, 如采血时间、孕妇的孕周、孕妇有无吸烟史、是否患胰岛素依赖型糖尿病^[1]和双胞胎等。而本研究所探讨的是一个容易被忽略却至关重要的环节— — 检测前血样采集过程中的影响因素, 着重探讨进食、采血后血清样本未能及时分离、溶血和脂浊带来的影响。

本研究发现, 由于HCG不稳定、易降解, 使 Free HCGβ 含量增多, 从而影响hAFP、Free HCGβ 的测定结果。据Stevenson等^[2]报道, 温度和时间对Free HCGβ 水平有不同程度的影响, 而对hAFP测定则无明显影响, 与本实验的结果吻合。从观察的实验组来看, 样本放置37 ℃ 2和4 h分离血清所测得的Free HCGβ 水平与放置37 ℃ 1 h分离血清(对照组)差异有统计学意义, 实验组的Free HCGβ 水平高于对照组; 样本放置室温1和2 h分离血清所测得的Free HCGβ 水平与对照组差异无统计学意义, 而置室温4和6 h分离血清所测得的Free HCGβ 水平与对照组差异有统计学意义, 实验组的Free HCGβ 水平高于对照组; 各实验组与对照组hAFP水平差异均无统计学意义。因此, 采样后应尽早送检, 建议样本放置室温, 尽快分离血清, 保存于-20 ℃冰箱。从溶血实验来看, 轻度溶血(< 2 g/L)和重度溶血(5~12 g/L)对hAFP、Free HCGβ 水平的测定无明显影响。从脂浊实验来看, 不同程度的脂浊对hAFP、Free HCGβ 水平的测定无明显影响。因为餐后采集样本是否对测定结果产生影响是临床非常关注的问题, 故本实验对此进行了研究, 结果显示进食后2 h采集的样本所测得的hAFP、Free HCGβ 水平与空腹采血所测值差异有统计学意义, 其hAFP、Free HCGβ 水平呈一致的降低趋势, 这可能与体内胰岛素、血糖水平有关, 具体机制还有待于进一步研究。

综上所述, 产前筛查样本在收集过程中应注意以下问题:需空腹采血, 采集样本后及时送检, 放置室温并尽快分离血清, 存于-20 ℃冰箱, 1周内检测。在实际工作中, 这个环节很容易被忽略, 影响了hAFP、Free HCGβ 的检测, 从而导致产前筛查的漏检, 影响筛查工作的顺利开展。因此, 必须在工作人员接受培训时特别强调此环节的重要性, 提高质量意识教育, 严把每个环节的质量关, 从而不断提高我们的产前筛查质量, 推动筛查工作的顺利开展。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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[1]	Wald NJ, Densem JW, Cheng R, et al. Maternal serum free alpha- and free beta-human chorionic gonadortrophin in pregnancies with insulin-dependent diabetes mellitus: implications for screening for Down's syndrome[J]. Prenat Diagn, 1994 , 14(9): 835-837. [本文引用:1]
[2]	Stevenson HP, Leslie H, Sheridan B. Serum free β-human chorionic gonadotrophin concentrations increase in unseparated blood specimens[J]. Ann Clin Biochem, 1993, 30(6): 99-100. [本文引用:1]