引用本文
陆怡德, 杨帆, 陆秋涯, 施新民, 樊绮诗. 表面健康人群血清氨基末端B型钠尿肽原参考区间的调查. 2009, 24(12): 874-877
LU Yide, YANG Fan, LU Qiuya, SHI Xinming, FAN Qishi. Investigation of the serum N-terminal pro-B-type natriuretic peptide reference intervals in apparently healthy individuals. Labratory Medicine, 2009, 24(12): 874-877  
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表面健康人群血清氨基末端B型钠尿肽原参考区间的调查
陆怡德, 杨帆, 陆秋涯, 施新民, 樊绮诗
上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海 200025

作者简介:陆怡德,男,1972年生,学士,主管技师,主要从事临床生化检验工作。

通讯作者:樊绮诗,联系电话:021-64370045-600619

摘要
目的

调查表面健康人群血清氨基末端B型钠尿肽原(NT-proBNP)的参考区间。

方法

参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)C28-A2文件对德灵公司Dimension X-PAND生化分析仪及NT-proBNP原装配套试剂(简称X-PAND NT-proBNP检测系统)的性能进行验证和评价。检测261名表面健康人群(男127名、女134名)的NT-proBNP水平,通过 Z检验,按照性别分组,以第95百分位数分别建立男、女的参考区间。

结果

X-PAND NT-proBNP检测系统性能良好,符合临床要求。NT-proBNP随着年龄的增长呈上升趋势,且女性的水平明显高于男性。检测结果呈偏态分布,<75岁男性的参考区间为<64.4 ng/L,<75岁女性的参考区间为<122.4 ng/L。

结论

对于存在明显种族差异、生物变异的检测项目,每个实验室应参照NCCLS C28-A2对参考区间进行调查或采取纠正措施。建立合适的NT-proBNP参考区间对心力衰竭的诊断、鉴别诊断及预后分析具有临床应用价值。

关键词: 氨基末端B型钠尿肽原; 参考区间; 表面健康人群
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)12-0874-04
Investigation of the serum N-terminal pro-B-type natriuretic peptide reference intervals in apparently healthy individuals
LU Yide, YANG Fan, LU Qiuya, SHI Xinming, FAN Qishi
Department of Clinical Laboratory, Ruijin Hospital, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China
Abstract
Objective

To investigate the distribution of reference intervals of serum N-terminal pro-B-type natriuretic peptide (NT-proBNP).

Methods

According to the National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS)C28-A2 Document, the performance of X-PAND NT-proBNP determination system (including the Dade Behring Dimension X-PAND biochemistry analyzer and NT-proBNP original reagent) was analyzed and evaluated. The serum NT-proBNP levels in 261 apparently healthy individuals (127 males, 134 females) were determined. All individuals were classified according to sex. The NT-proBNP reference intervals of males and females were established by 95th percentile respectively.

Results

The X-PAND NT-proBNP determination system had good analytical performance. Following the increasing age, the NT-proBNP level also increased, and the level in females was higher than that in males. The results of serum NT-proBNP were presented as skewness distribution. The reference interval of NT-proBNP was less than 64.4 ng/L for males and less than 122.4 ng/L for females under the age of 75.

Conclusions

Clinical laboratories should investigate or establish the appropriate reference intervals for the tests items with ethnic distinction and biomutation. There is a clinical application value to establish the appropriate reference interval for serum NT-proBNP in the diagnosis, differential diagnosis and prognosis analysis of heart failure.

Keyword: N-terminal pro-B-type natriuretic peptide; Reference interval; Apparently healthy individual

人心肌细胞含有108个氨基酸的B型钠尿肽原(pro-B-type natriuretic peptide, pro-BNP), 在内切酶的作用下被分割为含76个氨基酸的氨基末端B型钠尿肽原(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide, NT-proBNP)和含32个氨基酸的C端多肽钠尿肽(BNP)[1]。国外大规模多中心临床试验的结果证实, 检测血液中BNP和NT-proBNP有助于心力衰竭的诊断与鉴别, 并与心力衰竭的严重程度、预后情况明显相关[2, 3]。尤其是NT-proBNP, 其半衰期长、体外稳定, 循环浓度高、波动小, 更有利于心力衰竭的诊断[4]。

目前临床使用的NT-proBNP参考区间皆直接沿用生产厂商所提供的、来源于欧美人群的数据。但根据美国临床生化科学院(NACB)心脏标志物应用指南, 种族、性别、年龄的差异均会对NT-proBNP造成影响, 临床必须了解更适合国人的NT-proBNP参考区间。为此, 我们严格按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) C28-A2的指导建议, 对NT-proBNP的参考区间进行了初步的统计与评价。

材料和方法
一、对象

收集上海交通大学附属瑞金医院261名表面健康志愿者空腹静脉血样本(其中男127名、女134名), 年龄21~90岁。经临床检查均无心脏病史、无高血压、无慢性阻塞性肺炎、无慢性肾功能衰竭、无血糖及血脂异常。心电图检查无异常。胸部X线检查未见心脏扩大迹象。

二、仪器和试剂

Dimension X-PAND生化分析仪(美国德灵公司); 采用原装配套试剂, 批号为FB9042和BA9097; 配套中值、高值质控品批号为CTL10042和CTL10043。

三、性能验证

1、不精密度试验 选取德灵公司NT-proBNP的中值质控品, 在同一天内重复测定20次, 记录结果数据并统计标准差(s)及变异系数(CV), 了解批内不精密度。选取德灵公司NT-proBNP的中值、高值两级质控品, 连续测定10 d, 每天进行2次检测, 记录结果数据并统计s及CV, 了解天间不精密度。

2、线性分析 依据NCCLS颁布的EP-6A文件, 分别选取了NT-proBNP高值和低值的血清样本, 按照7:0、6:1、5:2、4:3、3:4、2:5、1:6、0:7的比例进行梯度稀释。所有样本充分混匀, 随机排列上机检测, 每个样本重复检测4次。对实验数据的可靠性进行考核后, 采用多项式回归方案进行线性评价 [5]。

3、检测低限(lower limit of detection, LLD) 以德灵公司提供的NT-proBNP零点校准品为空白样本, 重复检测20次, 通过计算空白响应量的均值( x̅)与s, 得出单次检测空白响应量的95%可能性: x̅空白± 2s空白[6]。

四、261名表面健康人员检测结果数据分析

检查有无明显的离群点, 绘制分布图, 了解数据的分布特性, 选择合适的统计方法估计参考区间。根据NCCLS C28-A2文件[7], 参考区间是否需要分组(如按性别或年龄)主要依据临床意义和生理变异, 按照以下公式进行Z检验, 比较分组后均值间的差异有无统计学意义。

z=x̅1-x̅2s12n1+s22n212

式中, x̅1和 x̅2分别为两组各自的均值, s12和 s22分别为2组各自的方差, n1和n2为2组各自的参考值个数。

结 果
一、分析方法的性能验证

1. 不精密度试验 德灵公司NT-proBNP中值质控品的批内不精密度s为36.6 ng/L、CV为8.91%, 中值、高值质控品的天间不精密度见表1, 实验估计的总不精密度属于临床可接受范围。

表1 NT-proBNP的天间不精密度

2. 线性分析 通过检验程序判定本次实验数据中无离群点, 且Te=6 665 075, SSMAX=2 562 742, C=SSMAX/Te=0.384 5, C0.05=0.598 1, C< C0.05。8组数据的方差均无差异, 各组间离散程度较为均衡, 不会影响线性的判断。使用SPSS11.0软件对其进行多项式回归分析, 回归结果表明其二次系数、三次系数皆与0无差异, 最适多项式为一次多项式, 可直接判定NT-proBNP在45~28 000 ng/L范围内呈线性关系。

3. LLD 95%可能性 LLD为-5.7~6.8 ng/L。对于< 6.8 ng/L的结果应报告为“ 分析物未检出, 浓度< 6.8 ng/L” 。

二、表面健康人群参考区间的调查

261名表面健康人群按性别分为男性组(127名)及女性组(134名)。NT-proBNP呈偏态分布, 且随着年龄的增长呈现上升趋势, 女性均值高于男性。见图1、表2。261名表面健康人群检测结果经过Z检验, 表明同年龄组的男性和女性之间均值的差异有统计学意义, 因此需按性别分别建立参考区间。以各组中位数作统计学处理, 75岁以上年龄组的NT-proBNP水平明显高于75岁以下年龄组。见表3。

图1 261名表面健康人群NT-proBNP检测结果均值直方图

表2 261名表面健康人群NT-proBNP测定值
表3 男、女性NT-proBNP不同年龄组参考区间分组表
讨 论

国外多项临床研究证实, NT-proBNP是很好的心力衰竭诊断标志物, 是最好的心力衰竭危险分层和预后评估的神经激素类标志物之一, 并且与纽约心脏病协会(NYHA)制定的心功能分级相对应, 能够大大提升诊断心力衰竭的正确率[8]。NT-proBNP的影响因素较多, 心绞痛、慢性肾衰竭、慢性阻塞性肺炎以及左室肥大、舒张性左室功能不全的高血压等都会引起NT-proBNP的升高。基于其较高的临床应用价值, NT-proBNP受到了国内临床实验室的普遍认可与重视, 但其参考区间一般都沿用生产厂商提供的、来源于欧美人群的数据。已有文献报道, NT-proBNP检测值有明显的种族差异[9]。因此在了解NT-proBNP生物差异的基础上, 必须建立适合于国人的参考区间。

根据NCCLS C28-A2文件, 在进行参考区间调查前, 应对德灵公司X-PAND NT-proBNP检测系统的性能进行评价或验证。本次研究结果显示NT-proBNP中值质控品的批内不精密度为8.91%, 中值、高值质控品的天间不精密度分别为9.63%和7.29%, 符合美国NACB心脏标志物指南中规定的总CV≤ 10%的要求; 线性范围检测结果显示NT-proBNP在45~28 000 ng/mL之间线性关系良好, 理论值与实测值存在较小的偏倚。该检测系统的LLD为6.8 ng/L, 低于试剂说明书上的10 ng/L。以上各项结果皆符合临床的使用要求。

在选择参考个体时, NCCLS C28-A2文件建议采用前瞻性采样法, 先查阅文献, 了解其生物学变异, 为制定分组标准建立基础, 然后通过编制调查表以选择合适的参考个体, 切不可将青年人群作为参考范围的“ 金标准” 。我们选取了表面健康人群, 排除潜在疾病(高血压、肾功能异常、肥胖、慢性阻塞性肺炎等)对NT-proBNP结果的影响。我们依据NCCLS- H3(静脉穿刺血液样本采集程序)进行样本的采集、处理和储存, 保证了分析前的质量控制, 使检测结果更适合参考区间的调查。在调查参考区间的过程中, 为确保检验结果的可靠, 我们用质控品进行常规质量控制, 在监测整个分析操作过程的同时, 也确保了长期监测结果的一致性。

本研究的NT-proBNP检测结果明显低于德灵公司试剂说明书中同年龄层的欧美人群数据(见表2), 进一步验证了不同种族、不同年龄需要建立各自的NT-proBNP参考区间。NT-proBNP水平随着年龄的增长呈现上升趋势, 且女性高于男性, 这一结论与国内外报道基本一致[9]。 Z检验证实男性和女性之间由于生理变异等因素引起的NT-proBNP水平差异具有统计学意义, 需分别建立参考区间。NT-proBNP总体呈偏态分布, 且有文献报道NT-proBNP不适用于无症状人群的筛查[3]。NT-proBNP的检测高值更具有临床应用价值。因此采取单侧第95百分位数为参考区间上限, < 75岁男性参考区间上限为64.4 ng/L, < 75岁的女性参考区间上限为122.4 ng/mL。德灵公司试剂说明书中对大量临床患病组的NT-proBNP检测结果进行统计, 最终以125 ng/L和450 ng/L分别作为< 75岁人群和> 75岁人群的阳性阈值。我们也正在与临床联系, 调查表面健康人群的同时对患病人群跟踪随访, 为今后进一步探讨适合人群的阳性阈值累计长期的资料与数据。有关这些参考区间在临床上应用的价值, 需对心力衰竭患者作更多的实际观察后作出判断。

总之, 依据NCCLS C28-A2文件的推荐程序和方法步骤确定定量检测项目的参考区间, 能够保证其在临床应用中的科学性、适用性。对于医学决定水平更具临床诊断价值的检测项目, 如NT-proBNP, 只有在建立合适的参考区间基础上, 才能逐步确立医学决定水平, 帮助临床分析疾病的各种类型, 及时掌握疾病过程中的动态变化。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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