1 000例阴道分泌物的标本采用革兰染色二步法, 检出滴虫128例, 阳性检出率为12.8%(128/1 000), 检出霉菌159例, 阳性检出率为15.9%(159/1 000); 采用革兰染色四步法, 检出滴虫128例, 阳性检出率为12.8%(128/1 000), 检出霉菌162例, 阳性检出率为16.2%(162/1 000)。2种方法检出的阳性率比较差异无统计学意义(P> 0.05)。

在念珠菌性阴道炎中, 可见明显的菌丝相, 孢子相, 菌丝胞子双相的涂片染色。革兰染色二步法与革兰染色四步法均可见滴虫染在G⁺的紫色, 霉菌孢子呈西瓜子样, 镜下可找到成群革兰阳性浓染的卵圆形孢子, 可见芽生孢子和假菌丝(细长而直, 有分枝或者隔, 呈节段状, 形状似竹竿)革兰染色二步法的视野清晰, 未见明显杂质。在细菌性阴道炎中, 革兰染色二步法染色可见紫蓝色的棒状乳酸杆菌大量减少, 可发现有大量深紫色小杆菌或球状杆菌聚集在淡红色上皮细胞上形成其边缘灰暗呈锯齿状的线索细胞。上皮细胞, 浆丰富, 染成淡红色; 边缘色深, 视野清晰, 小杆菌及球状杆菌染成深蓝色。总体来说阴道分泌物涂片革兰染色四步法与革兰染色二步法相比基本无差异。

女性生殖道感染的早期诊断和治疗对于控制疾病的发展、传播是非常重要的。阴道分泌物涂片的革兰染色为疾病的早期诊断和治疗提供依据。阴道分泌物涂片的革兰染色法更有以下优点:一份标本可进行多个项目的检查, 一张涂片中即能观察到病原体和正常菌群的分布情况; 设备和技术条件要求不高, 成本低, 易普及, 适用于快节奏, 患者流动特频繁的门诊实验室和基层无条件开展细菌培养的实验室。查滴虫时不受季节、温度的影响; 标本染色后病原体基本被杀灭, 降低了环境污染; 染色标本可较长时间保存以便复查及作为质量监督^[1]。传统革兰染色为四步法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤, 本实验通过多次反复试验证明, 传统革兰染色四步法效果不够理想。G^-菌往往由于脱色时间不够, 复染时染液浓度过稀且复染时间过短, 复染时不被着色而造成假阳性.传统的革兰染色四步法的1液中有结晶紫和草酸胺, 两者放置长久时会出现结晶沉淀, 所以市面上的革兰染色四步法染液放置的时间一般不能超过半年, 革兰染色四步法媒染步骤中加入了碘液, 而碘极容易升华, 从而改变溶液浓度, 影响染色结果。其次在脱色中, 3液用到了乙醇。实验中发现, 乙醇对结晶紫并没有明显的脱色作用。所以传统革兰染色四步法的染色原理值得人们进一步的考究^[2]。而革兰染色二步法一改传统革兰染色四步法的初染、媒染、脱色、复染等四个步骤, 染液中未添加草酸胺, 碘, 改变了乙醇脱色的方法, 在保留了经典的优势后使得染色过程更简便、染液性状更稳定、染色结果更确定。而且通过本实验结果可以看出, 革兰染色二步法与革兰染色四步法在阴道分泌物涂片中真菌, 线索细胞等检出率无明显差异。所以革兰染色二步法可以替代革兰染色四步法, 值得临床推广应用。