引用本文
张则嵘, 赵俊岭, 顾丹今, 刘军, 杨磊. Survivin及c-myc基因在肾癌组织中的表达及其相关性研究 . 检验医学,2014, 29(7): 760-763[ZHANG Zerong, ZHAO Junling, GU Danjin, LIU Jun, YANG Lei. The expression and relation studies ofSurvivin andc-myc in renal cell carcinoma tissue . Labratory Medicine, 2014, 29(7): 760-763]  
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Survivin及c-myc基因在肾癌组织中的表达及其相关性研究
张则嵘1, 赵俊岭2, 顾丹今3, 刘军4, 杨磊5
1.新疆库尔勒市人民医院肾病科,新疆 库尔勒 841000
2.新疆医科大学研究生院,新疆 乌鲁木齐 830011
3.新疆医科大学基础医学院形态中心,新疆 乌鲁木齐 830011
4.新疆医科大学第五附属医院泌尿外科,新疆 乌鲁木齐 830011
5.新疆维吾尔自治区中医院泌尿外科,新疆 乌鲁木齐 830011
摘要
目的

探讨肾癌组织中Survivin、c-myc基因的表达及临床意义。

方法

采用逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)、免疫印迹法检测34例肾癌标本中Survivin、c-myc的表达,分析这2个基因与临床病理特征的关系。

结果

肾癌组织中Survivin、c-myc基因的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01)。Survivin基因的表达与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05),c-myc基因的表达与分化程度有关(P<0.05)。Survivin、c-myc之间的表达呈正相关(r=0.446,P<0.01)。

结论

肾癌组织中Survivin、c-myc基因表达上调,可能参与了肾癌的发生、发展。

关键词: Survivin基因; c-myc基因; 肾癌
中图分类号:Q503 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)07-0760-04
The expression and relation studies ofSurvivin andc-myc in renal cell carcinoma tissue
ZHANG Zerong1, ZHAO Junling2, GU Danjin3, LIU Jun4, YANG Lei5
1. Department of Nephrology, Kuerle People's Hospital, Xinjiang Kuerle 841000, China
2. Graduate School, Xinjiang Medical University, Xinjiang Urumqi 830011, China
3. Morphological Center, Xinjiang Medical University Basic Medical School, Xinjiang Urumqi 830011, China
4. Department of Urinary Surgery, the Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Xinjiang Urumqi 830011, China
5. Department of Urinary Surgery, Xinjiang Uygur Autonomous Region Traditional Chinese Medicine Hospital, Xinjiang Urumqi 830011 , China
Abstract
Objective

To study the expressions ofSurvivin andc-myc in renal cell carcinoma tissue and their clinical significance.

Methods

By reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western-blot, the expressions ofSurvivin andc-myc were determined in 34 renal cell carcinoma specimens. The relationship of the 2 genes and clinical pathological characteristics were analyzed.

Results

The expressions ofSurvivin andc-myc in renal cell carcinoma tissue were higher than those in normal tissues with statistical significance (P<0.01). The expression ofSurvivin was significantly related to the clinical stage and lymphonode metastasis(P<0.05). The expression ofc-myc was significantly related to the degrees of pathological differentiation (P<0.05).The expression ofSurvivin in renal cell carcinoma tissue was positively related to the expression ofc-myc(r=0.446,P<0.01).

Conclusions

The overexpression ofSurvivin andc-myc could have important roles in the carcinogenesis and development of renal cell carcinoma.

Keyword: Survivin; c-myc; Renal cell carcinoma
引言

肾癌又称肾细胞癌,发病率占恶性肿瘤的3%,仅次于膀胱癌,居泌尿系肿瘤的第二位[ 1, 2],是常见的泌尿系统实质恶性肿瘤之一。临床上30%40%的肾透明细胞癌患者就诊时已发生远处转移,且死亡人数呈逐年上升趋势。Survivin是一种与细胞凋亡和增殖密切相关的凋亡抑制因子。 c-myc基因是一种癌基因,调节细胞增殖。这二者在多种恶性肿瘤中均有异常表达,但与肾癌的相关性的报道还比较少。我们探讨了 Survivin和 c-myc基因与肾癌病理类型、分级、临床分期等生物学行为的关系,为临床制定治疗方案提供依据。

材料和方法
一、临床资料

选取新疆维吾尔自治区中医院2009年1月至2011年12月手术切除并经病理证实的肾癌标本34例,其中男24例,女10例。所有病例均经病理确诊为肾细胞癌。病理组织学分型: 透明细胞癌21例,乳头状癌9例,嫌色细胞癌4例。病理分级按世界卫生组织(WHO)分级标准:G1(高分化)14例,G2(中分化)8例,G3(低分化)12例。Robson分期:Ⅰ~Ⅱ期9例,Ⅲ~Ⅳ期25例。取远离肿瘤边缘5 cm以上的癌旁组织(即远端无癌组织)10例,经病理证实均为正常组织,以此作为阴性对照。

二、引物与试剂

RNA提取试剂Trizol(Invitrogen公司);逆转录试剂盒(Promega公司);兔抗人 Survivin、 c-myc抗体、羊抗兔IgG抗体(武汉博士德公司);聚合酶链反应(PCR)扩增引物由上海生物工程有限公司合成,引物序列、片段大小见表1:

表1 引物序列及片段大小
三、方法

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR):采用Trizol试剂一步法提取总RNA,紫外分光光度计测定其纯度。以提取的总RNA为模板,按逆转录试剂盒说明书进行逆转录,以得到的cDNA为模板进行PCR扩增。PCR扩增反应体积为20 μL,反应条件:94 ℃ 5 min预变性;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,35个循环;72 ℃ 5 min,扩增反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳,凝胶成像仪成像、软件自动读取条带灰度值(目的基因灰度值-内参灰度值)。

四、统计学方法

采用SPSS 16.0软件进行统计分析。数据采用中位数(范围)表示,癌组织和正常组织中基因表达量的比较采用非参数检验;各基因与肾癌临床病理因素关系的比较采用 χ2检验,采用Spearsman分析 Survivin和 c-myc基因之间的相关性。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、Survivin、c-myc基因mRNA的表达

Survivin、 c-myc在34例癌组织中表达的阳性率分别为85%(29/34)、56%(19/34),在10例远端无癌组织(阴性对照)中表达的阳性率为50%(5/10)、10%(1/10)。 Survivin、 c-myc mRNA在癌组织中的表达明显增高,与远端非癌组织比较差异有统计学意义( P<0.01)。Spearman相关分析显示在肾癌组织中 Survivin与 c-myc的表达具有相关性( r=0.446, P<0.01),见图1、2和表2:

图1 34例肾癌组织中 Survivin、 c-myc mRNA基因的表达

表2 Survivin、 c-myc mRNA的表达

图2 Survivin、 c-myc在肾癌及远端无癌组织中的阳性表达率

二、肾癌组织中 Survivin、 c-myc表达与病理因素的关系

Survivin mRNA的表达与临床分期、转移相关( P<0.05),与年龄、性别、分化程度、组织类型均无相关性( P>0.05), c-myc mRNA的表达与分化程度相关( P<0.05)。见表3:

表3 肾癌组织中 Survivin、 c-myc的表达与临床病理特征的关系
讨论

肾癌是我国泌尿系统肿瘤中发病率仅次于膀胱癌的最常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年升高的趋势。由于肾癌生物学行为多变,并且其发生、发展的分子机制尚不清楚。因此,寻找肾癌的相关基因将为了解发病机制和临床诊断及治疗提供理论依据。

细胞凋亡和增殖异常在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用。Survivin具有抑制细胞凋亡与调节细胞增殖、促进细胞转化、参与血管生成的多种作用,同时也是迄今发现的人类凋亡抑制蛋白(IAP)家族中相对分子质量最小、凋亡抑制作用最强的凋亡抑制因子[ 3, 4],在分化成熟的组织中 Survivin不表达或低表达,在胚胎组织和几乎所有的恶性肿瘤组织中高表达[ 5, 6]。本研究证实在正常肾组织中 Survivin表达水平较低,而在肾癌组织中表达明显升高。曾剑等[ 7]证实 Survivin表达与肿瘤浸润程度及淋巴结转移具有相关性, Survivin表达阳性的食管癌更易发生淋巴结转移,恶性程度更高。结合本研究结果(在Ⅲ~Ⅳ期和转移的肿瘤组织中 Survivin阳性表达率显著升高),说明 Survivin表达与临床分期、转移相关,提示 Survivin高表达在肾癌的恶性进展过程中发挥着重要作用,与肾癌的浸润及病程演进关系密切,可以作为评估肾癌恶性程度及转移的生物学指标。

c-myc是最早发现的与肿瘤细胞增殖活性相关的原癌基因产物之一,既参与细胞的增殖、转化,又诱导细胞的凋亡。 c-myc可激活与细胞周期、细胞生长密切相关的基因表达,启动细胞周期的G0/G1 向S期演变。姜艳芳等[ 8]采用PCR检测肾癌和正常组织中 c-myc的表达,发现肾癌中 c-myc表达明显高于正常组织。本研究发现肾癌组织 c-myc mRNA表达明显高于远端无癌组织,提示在肾癌发生过程中 c-myc表达失调,c-myc表达与肿瘤分化程度相关,在中低分化的肾肿瘤中 c-myc阳性表达率显著高于高分化肿瘤组织。 c-myc高表达更有利于细胞快速分裂增殖。全晖等[ 9]报道在乳腺癌患者外周血中 c-myc的表达增强,且其表达与乳腺癌临床分期、组织学分级相关,证实 c-myc表达增强,意味肿瘤细胞增殖能力增强,肿瘤生长加快。提示 c-myc可能参与了肾癌发生、发展的过程。

综上所述, 在肾癌的恶性进展过程中, Survivin高表达与肾癌的浸润及病程演进关系密切, c-myc高表达与肿瘤细胞的快速增殖有关。这2个基因可能参与了肾癌的发生、发展。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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