引用本文
骆婵珍, 万波, 吴瑕, 柳国胜. 正常妊娠妇女血清同型半胱氨酸水平调查. 检验医学,2014, 29(7): 723-726[LUO Chanzhen, WAN Bo, WU Xia, LIU Guosheng. The serum homocysteine concentrations among women with normal pregnancy. Labratory Medicine, 2014, 29(7): 723-726]  
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正常妊娠妇女血清同型半胱氨酸水平调查
骆婵珍1, 万波2, 吴瑕1, 柳国胜1
1.暨南大学附属第一医院儿科,广东 广州 510630
2.中山市博爱医院妇产科,广东 中山 528400
摘要
目的

观察正常妊娠妇女血清同型半胱氨酸(Hcy)水平,为确定妊娠妇女Hcy水平的参考区间提供临床依据。

方法

采用循环酶法测定942例正常妊娠妇女血清Hcy水平,并收集其产检资料,追踪其分娩结局。根据测定Hcy时妊娠妇女的妊娠周期分为早、中和晚孕3组,各组例数分别为98例、202例和642例。

结果

正常妊娠妇女血清Hcy水平为(7.25±2.90) μmol/L,95%参考区间为1.5712.93 μmol/L。早孕组Hcy水平为(6.87±2.78) μmol/L,第75百分位数(P75)为7.53 μmol/L;中孕组为(6.43±2.90)μmol/L,P75为7.21 μmol/L;晚孕组为(7.54±2.86) μmol/L,P75为8.32 μmol/L;3组之间差异有统计学意义(F=12.03,P=0.000)。两两比较显示早孕组与中孕组之间差异无统计学意义(t=0.99,P=0.321),中孕组与晚孕组之间差异有统计学意义(t=4.77,P=0.000)。晚孕组Hcy水平较中孕组平均升高(1.11±0.23)μmol/L[P=0.000;95%可信区间(CI)为0.65~1.56 μmol/L]。线性相关分析显示Hcy水平与妊娠妇女年龄、检测孕周呈正相关(r值分别为0.14、0.15,P=0.000);将早、中和晚孕3组分别进行线性相关分析,仅晚孕组Hcy水平与检测孕周呈正相关(r=0.10,P=0.009)。多因素分析显示年龄、服用叶酸和Hcy检测孕周是影响孕妇Hcy水平的因素(F=16.59,P=0.000)。

结论

正常妊娠妇女血清Hcy水平妊娠早期为6.87 μmol/L、中期为6.43 μmol/L、晚期为7.54 μmol/L;如妊娠早期Hcy水平>7.53 μmol/L(P75)、中期>7.21 μmol/L(P75)、晚期>8.32 μmol/L(P75)可能提示高Hcy血症。

关键词: 同型半胱氨酸; 正常妊娠妇女; 参考区间
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)07-0723-04
The serum homocysteine concentrations among women with normal pregnancy
LUO Chanzhen1, WAN Bo2, WU Xia1, LIU Guosheng1
1.Department of Pediatrics, the First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangdong Guangzhou 510630, China
2.Department of Gynaecology and Obstetrics, Boai Hospital of Zhongshan, Guangdong Zhongshan 528400, China
Abstract
Objective

To observe the maternal homocysteine (Hcy) concentrations during normal pregnancy, and to establish the reference interval of Hcy among women with normal pregnancy.

Methods

A total of 942 normal pregnant women were enrolled. The relative data were collected, and they were followed up until delivery. The Hcy was detected during the first(98 pregnant women), second (202 pregnant women)or third(642 pregnant women) trimesters of pregnancy by enzymatic cycling assay.

Results

The serum Hcy concentrations among women with normal pregnancy were (7.25±2.90) μmol/L (95% reference interval 1.57-12.93 μmol/L), including (6.87±2.78) μmol/L in the first trimester [the 75th percentile (P75) 7.53 μmol/L], (6.43±2.90) μmol/L in the second trimester (P75 7.21 μmol/L) and (7.54±2.86) μmol/L in the third trimester (P75 8.32 μmol/L). There was statistical significance among the 3 groups (F=12.03,P=0.000). There was statistical significance between the first trimester group with the second trimester group (t=0.99,P=0.321) and between the second trimester group with the third trimester group (t=4.77,P=0.000). The Hcy concentration in the third trimester increased as (1.11±0.23) μmol/L for that in the second trimester [P=0.000, 95% confidence interval (CI) (0.65-1.56) μmol/L]. Linearity correlation analysis showed that there was positive correlation of Hcy concentration with age and gestational weeks (r=0.14 and 0.15,P=0.000). There was positive correlation of Hcy concentration in the third trimester with gestational weeks (r=0.10,P=0.009). Multiple factor analysis showed that age, taking folic acid and gestational weeks were main factors for Hcy concentration (F=16.59,P=0.000).

Conclusions

The serum Hcy concentrations among women with normal pregnancy are 6.87 μmol/L in the first trimester, 6.43 μmol/L in the second trimester and 7.54 μmol/L in the third trimester. When the serum Hcy concentration >7.53 μmol/L in the first trimester (P75), ≥7.21 μmol/L in the second trimester(P75) and 8.32 μmol/L in the third trimester (P75), the pregnant women may have hyperhomocysteinemia.

Keyword: Homocysteine; Normal pregnant woman; Reference interval
引言

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)即2-甲基4-巯基丁酸,源于饮食中的蛋氨酸,为甲硫氨酸代谢的中间产物,本身并不参与蛋白质的合成。Hcy是由甲硫氨酸分子的S亚基与三磷酸腺苷(ATP)作用生成S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM),后者在甲基转氨酶的作用下,将甲基转移给甲基受体,生成S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl homocysteine,SAH),再进一步脱去腺苷而生成。在血中,70%~80%的Hcy以二价形式与血浆蛋白结合,主要为白蛋白;20%~30%与其它硫醇化合物结合成异二聚体或自身结合成二聚物Hcy;还有1%~2%以游离型Hcy的形式存在。

研究表明,正常妊娠母亲Hcy水平低于孕前,孕期母亲Hcy水平升高与妊娠期高血压疾病、妊娠期糖尿病、胎儿生长发育、先天畸形、流产、死胎、宫内生长受限有关[ 1, 2, 3]。然而,目前关于妊娠期Hcy水平的Hcy血症(hyperhomocysteine,HHcy)的诊断界值尚无统一标准,HHcy导致妊娠期高血压疾病、胎儿畸形、流产、死胎、胎儿宫内生长受限、早产的机制尚未清楚,有赖于进一步的临床及动物实验研究。

材料和方法
一、研究对象

选择2011年3月1日至6月30日在中山市博爱医院进行产检(门诊或住院)的妊娠妇女942例,均符合以下标准:(1)健康育龄妇女;(2)年龄20~40岁;(3)无吸烟、饮酒、吸毒等不良嗜好;(4)无糖尿病、心脑血管疾病、肾病及原发性高血压等疾病;(5)孕期无妊娠期糖尿病、妊娠期高血压疾病等妊娠并发症;(6)分娩正常足月新生儿(胎龄37~<42周,出生体重2 500~4 000 g,无畸形和疾病)。将942例正常妊娠妇女根据其测定Hcy时的孕周分为早孕组(妊娠13周末,98例)、中孕组(妊娠第14周~第27周末,202例)及晚孕组(妊娠第28周至分娩前,642例)。

二、仪器与试剂

同型半胱氨酸检测试剂盒(循环酶法)由北京九强生物技术有限公司提供(货号GS181Z2)。HITACHI 7060全自动生化分析仪。每次检测前对仪器进行校正,并做室内质控,严格按照试剂盒说明说进行参数设定及操作,以保证结果的准确性。

三、方法

清晨避光抽取妊娠妇女空腹肘静脉血3 mL,注入非抗凝试管,2 000× g离心15 min分离血清,注入EP管中密封,置于-80 ℃冰箱保存。所有保存的标本在1个月内完成检测。

四、统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计分析。计量资料用 ±s表示,采用两样本 t检验、完全随机设计资料的方差分析。相关性分析采用直线相关与回归分析。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、正常妊娠妇女的一般情况分析

942例妊娠妇女的一般情况见表1:

表1 正常妊娠母亲的一般情况分析
二、942例正常妊娠妇女的Hcy水平分析

正常妊娠妇女的血清Hcy水平见表2。早、中、晚孕3组之间Hcy水平的差异有统计学意义( F=12.03, P=0.000);进一步两两比较显示,早孕组与中孕组之间差异无统计学意义( t=0.99, P=0.321),中孕组与晚孕组之间差异有统计学意义( t=4.77, P=0.000),早孕组与晚孕组之间差异无统计学意义( t=1.64; P=0.101)。晚孕组Hcy水平较中孕组升高(1.11±0.23)μmol/L[95%可信区间( CI)为0.65~1.56 μmol/L]。

三、影响妊娠妇女Hcy水平的因素

1.影响妊娠妇女Hcy水平的单因素分析 两变量线性相关分析,Hcy水平与妊娠妇女年龄( r=0.14, P=0.000)、检测孕周( r=0.15, P=0.000)呈正相关,与基础体重指数无相关关系( r=0.05, P=0.181)。分别将3组的Hcy水平进行线性相关分析,早孕组与中孕组Hcy水平与检测孕周无相关关系(早孕: r=0.02, P=0.897;中孕: r=-0.06, P=0.407),而晚孕组Hcy水平与检测孕周呈正相关( r=0.10, P=0.009)。One-Way ANOVA分析显示, Hcy水平与妊娠妇女文化程度( F=1.07, P=0.343)及产次( F=2.39, P=0.068)无关。经两样本 t检验,服用叶酸的妊娠妇女Hcy水平较不服用叶酸的低(0.86±0.22)μmol/L( t=3.88, P=0.000);妊娠妇女怀孕<4次与≥4次比较其Hcy水平差异无统计学意义( t=1.66, P=0.102);孕期Hcy水平与妊娠妇女常住地(农村或城镇)( t=0.21, P=0.837)、胎儿性别( t=0.06, P=0.951)及有无不良妊娠史( t=1.85, P=0.073)无明显联系。

2.影响妊娠妇女Hcy水平的多因素分析 以Hcy为应变量,年龄、是否服用叶酸和Hcy检测孕周为自变量,经多元线性回归分析(逐步引入与剔除法),年龄、服用叶酸和Hcy检测孕周是影响孕期母亲Hcy水平的因素( F=16.59, P=0.000)。年龄越大( b=0.09, t=3.85, P=0.000)、检测孕周越大( b=0.04, t=4.15, P=0.000),Hcy水平越高;而服用叶酸者( b=-0.78, t=-3.57, P=0.000)Hcy水平较低。

表2 正常妊娠妇女的血清Hcy水平
讨论

人体正常血浆Hcy水平为5~15 μmol/L,血清标本测定的Hcy水平较血浆标本高。有研究发现,正常妊娠妇女孕期Hcy水平低于孕前,Hcy在妊娠早期开始下降,孕20~32周降至孕前的50%~60%,然后保持相对稳定水平至分娩[ 4]。本研究只检测了孕期的Hcy水平,并未检测孕前Hcy水平,因此无法比较孕期与孕前Hcy水平的变化。本研究发现,正常妊娠妇女Hcy平均水平为7.25 μmol/L(平均检测孕周:32.0±9.9周),高于国内外一些研究报道[ 5, 6, 7]的Hcy水平。张英等[ 7]检测了35例正常妊娠妇女[年龄(25.3±2.2)岁,孕周(35.7±2.4)周]的血浆 Hcy水平, 结果为(6.25±1.96)μmol/L。该研究检测Hcy的平均孕周为晚孕,但其结果低于本研究。原因可能为该研究采用的检测方法为荧光标记免疫测定法,而本研究为循环酶法;标本为血浆,而本研究为血清;妊娠妇女年龄为(25±2)岁,而本研究为(28±4)岁;样本量为35例,而本研究为942例。这些因素都可以影响Hcy水平。有研究发现日本妊娠妇女妊娠早期的血浆Hcy平均水平为5.1 μmol/L,妊娠晚期为5.9 μmol/L[ 6],比本研究的检测结果更低,其原因除了标本因素外,种族因素、饮食习惯等也许对Hcy水平的影响也起着重要作用。为了保证检测结果的准确性,我们对妊娠妇女的采血状态做了严格的统一,均在清晨收集空腹标本,标本严格按标准保存,1个月内完成检测。然而血Hcy水平还受很多因素的影响,例如饮食习惯、服用维生素B及叶酸等,由于这方面的资料在短期研究中收集较困难,所以未能对这些影响进行校正,有可能对检测结果造成一定的影响。本研究表明95%的正常妊娠妇女Hcy水平为1.57~12.93 μmol/L,而根据目前国内外研究发现,Hcy水平高于正常值的 P75以上,孕妇发生妊娠并发症及胎儿先天畸形等不良结局的危险性增加。所以本研究提出早孕Hcy水平>7.53 μmol/L( P75),中孕>7.21 μmol/L( P75),晚孕>8.32 μmol/L( P75)可能提示HHcy,其中晚孕组的Hcy值与Hobbs[ 8]提出的晚孕Hcy>8.59 μmol/L将增加胎儿先天畸形发生风险的研究值相接近。

本研究采用循环酶法检测Hcy水平,其检测结果与高效液相色谱法的结果一致性良好[ 9],而且可利用现有的仪器设备,其试剂相对也较便宜,是一种适合在临床推广的检测方法。实验证明本研究使用的循环酶法Hcy检测试剂盒在测定精密度、线性范围、抗干扰等方面的性能可以满足临床检测的需要[ 10, 11]。本研究样本量相对较大,但研究对象均来自一个市内的某家医院某个时段进行产检和分娩的孕产妇,所以研究结果中正常妊娠妇女的Hcy水平参考区间只能为本院临床提供依据,并不能完全代表我国全部正常妊娠妇女的总体情况,要确定一个全国范围内的参考区间标准,需要进行国内大规模、多中心的研究。

本研究还根据妊娠妇女检测Hcy的孕周分为早、中、晚孕3组,发现Hcy水平在孕期有先下降后又逐渐升高的变化趋势,但尚缺乏有意义的统计学证据,这可能与3组样本量相差较大有关。本研究收集的是2011年3月1日至6月30日在中山市博爱医院进行产检(门诊或住院)的妊娠妇女的标本,而且符合纳入标准的妊娠妇女才参与本研究。由于早孕进行产检的妊娠妇女人数本来就少,而且早孕组随访时间长,失访率相对较高,所以研究中早孕组样本量也明显少于其它两组。研究中并没有测定同一名妊娠妇女早、中、晚孕3期的Hcy水平,所以尚不能探明孕期Hcy水平的变化规律。有学者提出,正常妊娠妇女Hcy水平的变化也许是一种生理现象。妊娠期Hcy水平降低与雌激素水平升高有显著联系[ 12]。据报道,正常月经周期中,黄体期的Hcy水平明显低于卵泡期。所以妊娠早期,类似黄体期的延续,Hcy水平也会生理性下降。妊娠中期,随着血容量的增加使血液稀释,胎儿对必需氨基酸的需要量增加使Hcy过度甲基化,胎儿对Hcy的利用增加,妊娠妇女肾小球率过滤增加,母体雌激素水平进一步升高,Hcy水平也进一步降低。在体外实验中,Hcy可增强子宫肌层的自发性收缩[ 13]。假如Hcy对子宫的这种作用在人体内也存在,那么正常妊娠晚期Hcy水平逐渐升高,也许是在为分娩做准备。Hcy在正常分娩过程中也许发挥着重要地生理作用,然而这个推断目前尚缺乏临床证据。

体内Hcy水平受遗传、年龄、性别、饮食习惯等因素影响。妊娠妇女Hcy水平降低与雌激素水平升高有关[ 12]。既往有不良妊娠史的妊娠妇女,Hcy水平也会升高[ 14]。本研究通过多元线性回归分析也发现,正常妊娠妇女Hcy水平与年龄、服用叶酸有关。年龄越大,Hcy水平越高;孕期服用叶酸可降低Hcy水平。本研究并未记录妊娠妇女饮食情况,也没有检测孕期叶酸、维生素B6、维生素B12、雌激素水平及Hcy代谢酶相关基因,所以尚不能分析妊娠期间其与Hcy水平的关系。

正常妊娠过程中Hcy水平降低,有助于维持母体血管内皮细胞的完整性,维持冠状动脉的弹性,在调节母体血管对妊娠适应能力方面意义重大。近年来许多研究表明,Hcy水平升高可影响妊娠妇女健康及胎儿生长发育,导致妊娠期高血压疾病、胎儿先天畸形、生长受限、早产、流产、死胎等。因此孕期监测Hcy水平,对HHcy进行早期干预、早期治疗,可以降低妊娠期并发症及胎儿不良结局的发生率。

The authors have declared that no competing interests exist.

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