引用本文
尧荣凤, 赵旭鸿, 李智, 薛龙, 许国祥. 不同年龄段女性人乳头瘤病毒感染状况分析. 检验医学,2014, 29(7): 708-711[YAO Rongfeng, ZHAO Xuhong, LI Zhi, XUE Long, XU Guoxiang. Analysis on the infection status of human papilloma virus in women with different ages. Labratory Medicine, 2014, 29(7): 708-711]  
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不同年龄段女性人乳头瘤病毒感染状况分析
尧荣凤1, 赵旭鸿1, 李智1, 薛龙1, 许国祥2
1.上海市杨浦区中心医院检验科,上海 200090
2.上海市第七人民医院,上海 200137
摘要
目的

了解不同年龄段女性人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,为宫颈癌防治提供理论依据。

方法

对临床3 426例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪检测8种高危型HPV DNA亚型(HPV16、 18、45、31、33、 52、58、67),分析不同年龄段受检者HPV感染状况。

结果

3 426例标本中共检出HPV 阳性583例,阳性率为17.02%。HPV 感染人群分布以1940岁组为主,以1930 岁人群中感染率最高,达到20.37%,明显高于其余的年龄组(P<0.05)。在检出类型中有单一亚型感染,也有多亚型的多重感染,其中比例最高的亚型是HPV33/52/58/67 (59.01%),明显高于其它HPV亚型(P<0.05);居第2位和第3位的分别为HPV16(14.92%)、HPV18/45(9.43%)。

结论

1930岁是女性感染HPV的高峰期,HPV感染有年轻化趋势,但中老年女性群体中HPV感染率依然居高不下。常见的HPV感染基因型为33/52/58/67、16和18/45,提示有一定人群特点。

关键词: 人乳头瘤病毒; 宫颈癌; 亚型; 年龄
中图分类号:R373.9 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)07-0708-04
Analysis on the infection status of human papilloma virus in women with different ages
YAO Rongfeng1, ZHAO Xuhong1, LI Zhi1, XUE Long1, XU Guoxiang2
1.Department of Clinical Laboratory, Yangpu District Central Hospital, Shanghai 200090, China
2.Shanghai Seventh People' s Hospital, Shanghai 200137, China
Abstract
Objective

To investigate the infection status of human papilloma virus (HPV) in women with different ages, and to provide the theory reference for preventing and treating cervical cancer.

Methods

Totally 3 426 samples of cervical secretions were determined for HPV DNA subtypes by multi-channel real-time fluorescence quantitation polymerase chain reaction (PCR). HPV DNA subtypes included 8 high risk types(HPV16, 18, 45, 31, 33, 52, 58 and 67). The infection status of HPV in women with different ages was analyzed.

Results

The 583 samples among the 3 426 cases were HPV positive, and the positive rate was 17.02%. HPV infection mainly distributed among women with 19-40 years old. In women with 19-30 years old, the HPV positive rate was 20.37%, which was higher than those with other ages (P<0.05). There were subtype infection and multi-subtype infection. The most common subtypes were HPV33/52/58/67(59.01%), HPV16 (14.92%) and HPV18/45 (9.43%).

Conclusions

The 19-30 years old is the peak period of HPV infection, but the HPV infection rate in middle aged and elder women is still high, and there is an increasing trend in young women. The most common HPV infection genotypes were HPV33/52/58/67, HPV16 and HPV18/45 with the population distribution characteristic of HPV genotype among women.

Keyword: Human papilloma virus; Cervical cancer; Subtype; Age
引言

宫颈癌是全球女性的第二大常见恶性肿瘤,发病率仅次于乳腺癌。现已证实,导致女性宫颈癌发病的关键因素是高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的持续感染[ 1],HPV感染的早期诊断和早期干预,对于预防宫颈癌的发生与发展十分必要。目前已发现HPV基因型有200余种,其中约40个型别涉及生殖道感染[ 2]。为了探索了解本地区不同年龄段女性宫颈HPV感染状况,我们采用多通道实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对3 426例临床宫颈分泌物标本进行了HPV定量检测及分型。

材料和方法
一、标本来源

收集2008年8月至2012年8月间来上海市杨浦区中心医院门诊及住院部就诊患者、健康体检者共计3 426例女性的宫颈分泌物标本,年龄19~90岁间,平均年龄46岁。按不同年龄段将受检者分为19~30岁、31~40岁、41~50岁、51~60岁、>60岁5组。所有标本均采用棉拭收集。临床医师将消毒棉拭置于宫颈口内23 cm处逆时针转3圈,停留10 s,然后置于生理盐水中,将多余的刷柄折断,旋紧管盖,注明编号,立即送检。

二、仪器与试剂

ABI 7300荧光定量PCR扩增仪(美国ABI公司);荧光定量试剂、标准品及引物均购自意大利AB ANALITICA公司。

三、方法

1.DNA的提取

所有的宫颈分泌物棉拭标本都采用DNA快速提取液进行DNA的提取:待测标本于振荡器上轻微振荡,混匀后,取1 mL到另一离心管中,12 000× g离心10 min,弃去上清,加入50 μL DNA提取液并振荡混匀,100 ℃ 干浴10 min后,再以12 000× g离心10 min,取上清液扩增。

2.引物设计与合成

引物设计见表1。将β-Globin作为内标,以其含量来评定提取的DNA是否适用于扩增反应。

表1 引物与探针序列

3.多通道实时荧光定量PCR[ 3] 反应体系:DNA 模板2 μL,上游引物0.4 μL,下游引物0.4 μL,探针0.8 μL,AB Mix 10 μL,最后加ddH2O至总体积为20 μL。循环条件为50 ℃ 2 min,95 ℃ 3 min,1个循环;94 ℃ 15 s,57 ℃ 40 s,39个循环。同时每个反应都与标本同步扩增了标准品,得出了相应的标准曲线,除此之外也对阴、阳性对照品进行扩增[ 3]。观察DNA的结果采用绝对定量法,所有指标原始结果均以Ct值表示,然后通过标准曲线读出标本HPV DNA的相对拷贝数,以β-Globin作为校正基因,计算出标本HPV DNA绝对拷贝数,以检测结果≥100拷贝为阳性。

四、统计学方法

采用SPSS 11.5软件进行统计分析。多重感染者各亚型的阳性率不重复计算。计数资料采用 χ2检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、各年龄组HPV感染分布

3 426例标本中共检出HPV阳性583例,阳性率为17.02%。HPV感染人群分布以1940岁为主,1930 岁组感染率最高,为20.37%,明显高于其余年龄组( P<0.05),30岁以后随着年龄的增长,HPV检出率呈下降趋势。见表2:

表2 各年龄组HPV的检出情况
二、各年龄组女性HPV感染基因型分布

各年龄组女性HPV感染基因型分析结果显示,感染比例最高的亚型为HPV33/52/58/67 (59.01%),明显高于其它HPV亚型( P<0.05);居第2位和第3位的分别为HPV16、HPV18/45。在所有感染者中,HPV单一亚型感染率为21.61% (126 例),HPV多亚型感染率为9.95%(58例), 还有399例不能区分出为HPV单一亚型还是HPV 多亚型,因为HPV18/45和HPV33/52/58/67为通用引物。见表3:

表3 各年龄组女性HPV阳性亚型分布情况[例(%)]
讨论

HPV是一类特异性感染人皮肤和黏膜的双链闭合环状DNA病毒。HPV感染是一种常见的性传播疾病。大量研究已证实HPV的持续感染是宫颈病变以及宫颈癌发病的重要的因素,尤其是高危型HPV感染与子宫颈癌和癌前病变的发生密切相关[ 4, 5]。本研究对3 426例女性的宫颈分泌物标本HPV的检测结果进行了分析,结果发现HPV感染人群分布以1940岁为主,以1930 岁人群的感染率最高,这可能与现今青年人过早涉及性生活、有多名性伴侣及卫生防护意识有关[ 6]。女性年龄在25岁前由于宫颈上皮修复的功能尚未成熟,当女性性生活频繁时,其感染的概率相对增加;而30~40岁女性的感染率相对较低,其原因可能在此年龄段的患者中已经获得了一定的免疫应答能力,HPV感染处在抑制状态中[ 7]。因此,普及两性性知识教育、加强女性卫生保健意识、定期进行妇科体检等防治工作十分必要,做到针对性预防干预,有效降低感染率[ 8]。

国外研究指出,宫颈癌99%以上是由以下8种高危HPV亚型引起:16、18、45、31、33、52、58、67。另外,HPV的感染率和基因型的分布还具有显著的地区差异。在中国主要以 HPV16 型为主,居第1位,HPV18 居第 2位,HPV58 和 HPV52 分别居第 3 和第 4 位。中国南方地区 52、58 亚型的感染率较北方高。因此,我们还分析了各年龄组女性HPV 感染类型以及各型别的分布情况,为 HPV 流行状况的分析、HPV 感染的防治以及相关疫苗的研制提供实验依据。结果显示感染比例最高的亚型是HPV33/52/58/67,居第2位和第3位的分别为HPV16、HPV18/45,有单一亚型的感染,也有多亚型的感染。加拿大有关HPV的研究指出,1318岁女性注射HPV疫苗,对于预防HPV的感染意义重大,可以从根本上降低宫颈癌的发病率[ 9]。对于本地1930岁人群感染率最高的现状,在本地区1318岁女性注射HPV疫苗同样具有重要的意义。但此地女性HPV感染的主要基因型与目前现有的HPV 四价疫苗不尽相同[ 10],提示需要研制与本地区主要基因型高度相关的多价疫苗来预防宫颈癌的发生。

综上所述,HPV感染呈年轻化趋势,这与女性过早地进行性生活和性解放等社会风气有关;此外中老年女性人乳头瘤病毒感染也居高不下。因此,目前我们应该努力开展普及性教育,提倡安全性行为;同时,加快对相应疫苗研制及医疗体制应进一步完善,让更多的人看得起病,以更好地控制宫颈癌的发生。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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