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田峰, 易梦璐, 齐素文, 王林纤. 联合检测HE4、CA125和CYFRA21-1在卵巢癌诊断中的应用. 检验医学,2014, 29(7): 697-700[TIAN Feng, YI Menglu, QI Suwen, WANG Linxian. Clinical application of the HE4, CA125 and CYFRA21-1 combined detection in the diagnosis of malignant ovarian tumor. Labratory Medicine, 2014, 29(7): 697-700]  
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联合检测HE4、CA125和CYFRA21-1在卵巢癌诊断中的应用
田峰1, 易梦璐2, 齐素文2, 王林纤3
1.广东省深圳市光明新区人民医院检验科,广东 深圳 518110
2.深圳大学医学院生物医学工程系,广东 深圳 518060
3. 湖南省肿瘤医院检验科,湖南 长沙 410006
摘要
目的

探讨血清人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)联合检测对卵巢癌诊断的临床价值。

方法

选择卵巢癌患者85例、卵巢良性肿瘤患者85例和健康妇女(正常对照组)85名,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HE4水平,采用化学发光法检测血清CA125、CYFRA21-l水平,比较各组3项指标的检测结果并计算阳性率及联合检测的阳性率。

结果

卵巢癌组血清HE4、CA125和CYFRA21-1水平明显高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组(P<0.01)。卵巢癌组HE4、CA125和CYFRA21-1的阳性率分别为88.24%、74.12%和77.65%,三者联合检测的阳性率为98.82%。

结论

HE4、CA125和CYFRA21-1联合检测对卵巢癌具有良好的辅助诊断价值。

关键词: 人附睾蛋白4; 糖类抗原125; 细胞角蛋白19片段; 卵巢癌
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2014)07-0697-04
Clinical application of the HE4, CA125 and CYFRA21-1 combined detection in the diagnosis of malignant ovarian tumor
TIAN Feng1, YI Menglu2, QI Suwen2, WANG Linxian
1.Department of Clinical Laboratory, Guangming District People's Hospital, Guangdong Shenzhen 518110, China
2. Department of Biomedical Engineering, School of Medicine, Shenzhen University, Guangdong Shenzhen 518060, China
3. Department of Clinical Laboratory, Hunan Tumor Hospital, Hunan Changsha 410006, China
Abstract
Objective

To investigate the clinical significance of human epididymis 4 (HE4), carbohydrate antigen 125 (CA125) and cytokeratin-19-fragment (CYFRA21-1) combined detection in the diagnosis of malignant ovarian tumor.

Methods

The sera of 85 patients with malignant ovarian tumor, 85 patients with benign ovarian tumor and 85 healthy women (healthy control group) were collected. The serum levels of HE4 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The serum levels of CA125 and CYFRA21-1 were determined by chemiluminescence assay. The results of the 3 biomarkers were analyzed comparatively in different groups, and the positive rates of the 3 individual detections and the combined detection were analyzed.

Results

Serum HE4, CA125 and CYFRA21-1 levels in malignant ovarian tumor group were significantly higher than those in benign ovarian tumor group and healthy control group (P<0.01). The positive rates of HE4, CA125, CYFRA21-1 and the combined detection of the 3 biomarkers were 88.24%, 74.12%, 77.65% and 98.82%, respectively.

Conclusions

The combined detection of HE4, CA125 and CYFRA21-1 shows the good auxiliary diagnosis significance for malignant ovarian tumor.

Keyword: Human epididymis 4; Carbohydrate antigen 125; Cytokeratin-19-fragment; Malignant ovarian tumor
引言

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,死亡率较高,主要原因是早期难以发现、容易扩散转移和复发。92%的卵巢癌早期患者能达到5年生存率,但是由于缺乏敏感、有效的检测方法,仅有不足20%的卵巢癌在扩散前被确诊[ 1]。血清肿瘤标志物检测操作简单,无需特殊设备,给患者带来的痛苦小,已经成为肿瘤早期诊断的重要手段。我们通过检测卵巢癌患者血清人附睾蛋白4(human epididymis protein 4, HE4)、糖类抗原125(carbohydrate antigen 125, CA125)和细胞角蛋白19片段(cytokeratin-19-fragment, CYFRA21-1)水平,探讨3个肿瘤标志物联合检测用于诊断卵巢癌的临床价值。

材料和方法
一、研究对象

选择2011年7月至2012年10月在湖南省肿瘤医院妇科病房收治的卵巢癌患者85例,按国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)2000年修订的手术病理分期标准,IⅣ期分别为12、23、25、25例,年龄(42±12)岁;卵巢良性肿瘤患者85例,均经病理学诊断证实(巧克力囊肿35例、浆液性囊腺瘤16例、畸胎瘤34例),年龄(39±13)岁;正常对照组85名,年龄 (35±12)岁,均为深圳市光明新区人民医院体检中心经健康体检合格的妇女,无心、肝、肺、肾等重要脏器疾病,肝、肾功能正常,家属中无肿瘤史,妇科检查无异常发现。

二、方法

空腹抽取所有研究对象的外周静脉血3 mL,室温静置30 min,以900× g离心10 min,分离血清。HE4测定采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),试剂盒由瑞典康乃格公司提供,MR-96A型酶标仪为深圳迈瑞生物医疗仪器有限公司产品。CA125和CYFRA21-1检测采用化学发光法,检测系统为德国西门子公司化学发光全自动免疫分析仪(ADVIA Centaur XP)及其配套试剂。所有试验严格按试剂盒和仪器说明书进行操作。

三、结果判断分析

根据试剂盒说明书设定各个肿瘤标志物的阳性判断标准。HE4为绝经前70 pmol/L、绝经后150 pmol/L,CA125为35 U/mL,CYFRA21-1为3.3 ng/mL,超过此值即为阳性。联合检测时有一项指标超过判断标准即定为阳性结果。CA125和HE4 2个指标的联合应用基于Moore 等[ 2]建立的卵巢癌风险预测模型(risk of ovarian malignancy algorithm, ROMA),结合患者绝经与否来评估妇女患卵巢癌的风险性, 方法如下:

绝经前预测指数(PI)=-12.0+ 2.38×ln(HE4)+0.0626×ln(CA125)

绝经后预测指数(PI)=-8.09+1.04×ln(HE4)+0.732×ln(CA125)

风险预测概率(PP)=Exp(PI )/[1+Exp(PI)]

根据每个待测对象绝经与否,将CA125和HE4测定值代入对应的公式,计算PP值,然后根据受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线推算特异性为75%时的PP值,以此作为判断卵巢癌高危和低危的阈值。

四、统计学方法

应用SPSS 13.0软件和Excel 2003软件进行统计分析。服从正态分布的数据用 ±s表示,样本均数的比较采用单因素方差分析,非正态分布的数据以中位数和范围表示,采用秩和检验进行统计分析,计数资料采用 χ2检验, P<0.05为差异有统计学意义。

结果
一、 卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组及正常对照组血清HE4、CA125和CYFRA21-1结果比较

卵巢癌组血清HE4、CA125和CYFRA21-1的水平均明显高于正常对照组( P<0.01)和卵巢良性肿瘤组( P<0.05)。卵巢良性肿瘤组HE4和CA125水平高于正常对照组( P<0.05);CYFRA21-1水平稍高于正常对照组,但差异无统计学意义( P>0.05)。与卵巢良性肿瘤组相比,HE4水平在卵巢癌ⅠⅡ期即显著升高,CA125和CYFRA21-1水平分别在卵巢癌进展到Ⅲ、Ⅳ期才开始显著升高。见表1:

表1 卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组及正常对照组血清HE4、CA125和CYFRA21-1水平
二、ROMA 模型判断良、恶性卵巢肿瘤的结果

根据CA125和HE4的检测结果建立ROMA,结合检测值和检测对象的绝经与否来评估患卵巢癌的风险性。通过ROC 曲线推算得到特异性为75%条件下绝经前患者的PP 阈值为14.6%,绝经后患者的PP阈值为29.7%,高于此阈值即判断为卵巢癌高危。据此将所有患者归类统计, ROMA预测早期卵巢癌(ⅠⅡ期)的敏感性为85.71(30/35),预测中晚期卵巢癌(Ⅲ~Ⅳ期)的敏感性为74.00%(37/50)。

三、血清HE4、CA125和 CYFRA21-1阳性率比较

卵巢癌组HE4、CA125和CYFRA21-1单项指标、两两联合检测的阳性率和3项指标联合检测的阳性率均明显高于卵巢良性肿瘤组和对照组( P<0.05),卵巢良性肿瘤组与正常对照组相比,血清HE4、CYFRA21-1和CA125阳性率差异无统计学意义( P>0.05)。见表2:

表2 卵巢癌组、卵巢良性肿瘤组及正常对照组血清HE4、CA125和CYFRA21-1的阳性率比较(%)
四、 血清HE4、CA125和 CYFRA21-1单项指标及3项指标联合检测对卵巢癌的诊断价值比较

与单项标志物检测卵巢癌相比,HE4、CA125和 CYFRA21-1两两组合之后诊断卵巢癌的阳性率升高,HE4和CA125检测结果建立的ROMA对卵巢癌的诊断阳性率达到了90.59%。3项肿瘤标志物联合检测的阳性率最高,达到98.82%,有效提高了卵巢癌诊断的敏感性,而特异性无明显下降。见表3:

表3 HE4、CA125和CYFRA21-1以及不同组合诊断卵巢癌的价值(%)
讨论

卵巢癌是目前全世界死亡率最高的一种妇科恶性肿瘤。因为卵巢癌多中心起源的可能性和影像学分辨率的局限性,使得卵巢癌的早期诊断率很低。目前临床常用腹腔镜对早期卵巢癌进行诊断,但会给患者身体带来较大创伤,从而限制了它的广泛应用。联合检测患者血清中的肿瘤标志物HE4、CA125和CYFRA21-1可为卵巢癌的早期诊断提供一种高敏感、快速且无创伤的方法。

HE4是诊断卵巢癌的一种新型血清标志物。Moore等[ 2]研究发现,HE4诊断卵巢癌的敏感性为72.9%。李青等[ 3]检测38例卵巢癌患者血清中HE4水平,其诊断的敏感性和特异性分别为78.95%和93.33%。近几年,国外很多学者也在探讨HE4用于诊断卵巢癌的价值。Manolov等[ 4]对50例卵巢癌患者的血清HE4水平进行检测,结果显示有40例患者的HE4水平升高;Yang等[ 5]对6 269例卵巢癌患者的HE4水平进行分析,发现HE4诊断卵巢癌的敏感性和特异性分别为73%和89%。本研究中HE4诊断卵巢癌的敏感性为88.24%,与国内外研究结果接近,在卵巢癌早期(ⅠⅡ期)表达即开始升高,能显著区分卵巢癌和良性肿瘤,其表达水平明显高于其它2个肿瘤标志物。

CYFRA21-1是一种新的上皮来源性质的肿瘤标志物,近几年来逐步应用于肿瘤的早期诊断和病情监测。李仙丽等[ 6]报道CYFRA21-1诊断恶性肿瘤的敏感性和特异性分别为60.1%和98.5%。本研究中CYFRA21-1的敏感性和特异性分别为77.65%和88.82%,Ⅰ期卵巢癌患者血清CYFRA21-1水平无明显改变,Ⅲ期、Ⅴ期其水平明显升高。另外,上皮起源的肿瘤都可以引起CYFRA21-1水平升高,因此会造成一定程度的假阳性。本研究中CYFRA21-1的假阳性率为11.18%。

CA125是最早用于卵巢癌的肿瘤标志物,研究显示卵巢癌患者中CA125的敏感性均>80%,对浆液性癌最为敏感[ 7]。本研究结果显示,CA125用于诊断卵巢癌的敏感性和特异性分别为74.12%和84.71%,但是CA125在一些妇科良性疾病中也存在较高阳性率,单独将CA125作为卵巢恶性肿瘤的判断标准不够全面,需结合临床综合分析[ 8]。

单个肿瘤标志物检测用于肿瘤的诊断很容易导致误判或漏诊,联合检测有助于提高卵巢癌的检出率[ 9]。根据HE4和CA125测定结果,利用ROMA模型对卵巢癌早期诊断以及鉴别诊断具有重要价值。Steffensen等[ 10]和Pitta Dda等[ 11]采用ROMA模型对卵巢癌患者进行分析,发现HE4和CA125联合检测的阳性预测值明显高于单个指标。另外,有学者对基于LR2模型的超声检测和基于ROMA模型的肿瘤标志物水平检测的2种方法进行比较,发现超声诊断卵巢癌的敏感性和特异性略高于后者[ 12]。

本研究ROMA的检测结果优于其它另外2对组合。为了充分利用肿瘤标志物的血清学诊断效率,提高卵巢癌的诊断水平,本研究对HE4、CA125和CYFRA21-1 3个肿瘤标志物进行了组合分析,结果显示HE4、CA125和CYFRA21-1联合检测的敏感性、特异性和准确性分别为98.82%、82.35%和87.84%;与单个指标检测相比,联合检测的敏感性明显升高,特异性无明显改变。综上所述,HE4、CA125和CYFRA21-1联合检测可为卵巢癌筛查、早期诊断提供一种有效的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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