PENTRA MS60全自动微量血液分析仪(简称PMS60)是新一代全血细胞分析系统。该仪器采用多通道加样技术(MDSS),运用细胞化学染色、双鞘流阻抗法(DHSS)和光学分析检测原理对全血细胞进行计数分类,可得到26个参数,而且对白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞压积(hematocrit,HCT)、血小板(platelet,PLT)可自动进行二次计数,从而保证最终检测结果的准确性。为了验证其可靠性,我们从本底计数、携带污染率(CR)、精密度、可比性、线性范围、准确度等方面对PMS60进行了评价。

一、材料

1.样本来源 选择2013年1月至2013年8月绵阳市中心医院血常规检测样本80例。其中健康体检者32名(均无感染及血液系统疾病)、门诊患者48例(血液系统疾病13例、感染性疾病11例、其他疾病24例),男38例,女42例,年龄27 d~80岁。

2.仪器与试剂 PMS60由法国HORIBA ABX公司生产,SYSMEX XS800i全自动血液分析仪(简称XS800i)由日本Sysmex公司生产。两台仪器均使用原装配套试剂、校准物和质控物。OLYMPUS CX21显微镜购自日本奥林巴斯公司。瑞氏染液按照《全国临床检验操作规程》(第3版)^{[ 1]}要求配制。

二、方法

1.人员培训 根据《全国临床检验操作规程》(第3版)^{[ 1]}和《白细胞分类计数参考方法》^{[ 2]}中制定的血液标本采集与处理、血涂片检测操作程序对有经验的采血人员和检验人员(取得检验师资格证)进行培训。由经HORIBA ABX公司培训部工程师培训合格的操作人员检测样本。

2.样本采集 末梢血采用BD公司提供的乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K₂)抗凝尖底采血管采集末梢血约0.5 mL后用混匀器充分混匀;静脉血采用BD公司提供的EDTA-K₂真空采血管采集静脉血3 mL,采血后迅速轻轻颠倒混匀6~8次。

3.仪器校准和质控 采用HORIBA ABX公司提供的ABX MINOCAL(LOT:2032002)全血校准物对PMS60进行校准。采用HORIBA ABX公司提供的ABX DIFFTROL全血质控物(包括L、N和H三个水平)进行室内质量控制,保证结果的稳定性和准确性。

4.显微镜分类计数(镜检法) 每份样本制作2张血涂片,编号并染色(均在2 h内完成)。为保证镜检法结果的可靠性,由2名看骨髓的检验人员(中级以上职称)采用双盲法分别分类200个白细胞,取其均值。

5.检测方法 严格按照本实验室根据厂商提供的仪器操作说明书制定的血液分析仪标准操作规程(SOP)进行操作。每日开机后先使用配套质控物进行室内质控,室内质控在控后测定样本。样本上机检测在2 h内完成。细菌污染、出现凝块、抗凝剂不符合要求的样本不能作测定。

三、PMS60性能评价

1.本底计数^{[ 3]} 用稀释液作为样本在分析仪上连续检测3次,3次检测结果最大值应在允许范围内。

2.CR^{[ 3]} (1)验证样本浓度要求见表1;(2)验证方法:分别针对不同检测项目(选取WBC、PLT各2例样本,RBC和Hb 2例样本),取1份高浓度的临床样本,混合均匀后连续测定3次(H1、H2、H3),再取1份低浓度的临床样本,混合均匀后连续测定3次(L1、L2、L3)。CR以百分比表示。CR(%)=∣(L1-L3)∣/(H3-L3)×100%。

表1

表1

表1 携带污染率验证样本浓度要求 项目 WBC(×109/L) RBC(×1012/L) Hb(g/L) PLT(×109/L) 高浓度值 >90.0 >6.20 >220 >900 低浓度值 >0~<3.0 >0~<1.50 >0~<50 >0~<30

表1 携带污染率验证样本浓度要求

3.批内精密度 (1)验证样本浓度要求:①正常浓度水平样本^{[ 3]}(1例体检者样本)的WBC为(4.0~10.0)×10⁹/L、RBC为(3.5~5.5)×10¹²/L、Hb为110~160 g/L、HCT为35%~55%、PLT为(100~300)×10⁹/L、红细胞平均体积(MCV)为80~100 fL、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)为27~34 pg、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)为320~360 g/L;②医学决定水平样本^{[ 4]} (3例患者样本)的Hb为60~100 g/L、PLT为(0~50)×10⁹/L、WBC为(0~2)×10⁹/L;(2)验证方法^{[ 3]}:取1份符合上述浓度要求的临床样本,按常规方法在仪器上连续检测11次,计算后10次的均值(x-)和标准差( s),计算变异系数( CV)。

4.日间精密度^{[ 3]} 取低(ABX DIFFTROL-L,LOT:PX053-L)、中(ABX DIFFTROL-N,LOT:PX053-N)和高值(ABX DIFFTROL-H,LOT:PX053-H)全血质控物在仪器上每日至少检测1次,连续检测30 d,剔除失控数据(失控结果已得到纠正)后计算在控数据的 CV。

5.线性范围^{[ 4]} 选取1份接近预期上限的高值全血样本(WBC、PLT各1例样本,RBC和Hb 1例样本),用同源乏血小板血浆按100%、80%、60%、40%、20%比例依次稀释,进行4~6个浓度水平的样本测定(WBC、PLT、RBC和Hb分别进行6、6、5和5个浓度水平测定),每个样本重复测定3次。将实测值与理论值作比较(偏差应<10%),验证线性范围,计算 Y= aX+b。

6.准确度 (1)全血细胞计数(complete blood count,CBC)^{[ 3]}:准确度验证以总误差为评价指标,用相对偏差表示,验证方法为使用5份配套质控物(LOT:PX013-N、PX033-N、PX053-L、PX053-N、PX053-H)分别进行单次检测,计算每份样本检测结果与靶值相对偏差;(2)白细胞分类^{[ 6]} (20例样本):仪器法(PMS60)每份样本检测2次,参考方法(镜检法)每份样本由2人各分类200个WBC分别取其平均值。按照99%可信区间( CI)计算方法,得到参考方法结果的可信范围,将仪器法测量结果平均值与可信范围比较。

7.可比性^{[ 3]} 以相对偏差为评价指标。(1)比对样本浓度要求见表2;(2)验证方法:以XS800i为参考仪器。检测仪器和参考仪器分别检测新鲜正常样本、高值样本和低值样本共40例(满足各指标要求共选择了47例样本)。所有样本均在2 h内完成检测并计算相对偏差。相对偏差计算公式如下:偏倚=(测定值-靶值)/靶值×100%(测定值为PMS60的测定结果,靶值为XS800i的测定结果)。

表2

表2

表2 比对样本浓度要求 项目 浓度范围 样本数量 所占比例(%) WBC(×109/L) <2.00 10 2.00~5.00 10 5.00~11.00 45 11.10~50.00 25 >50.10 10 PLT(×109/L) <40.00 10 40.00~125.00 20 126.00~300.00 40 301.00~500.00 20 501.00~600.00 5 >601.00 5 RBC(×1012/L) <3.00 5 3.00~4.00 15 4.01~5.00 55 5.01~6.00 20 >6.01 5 Hb(g/L) <100.00 10 100.00~120.00 15 121.00~160.00 60 161.00~180.00 10 >181.00 5

表2 比对样本浓度要求

四、统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。相关性采用Pearson相关分析。 P<0.05为差异有统计学意义。

一、本底计数

PMS60测定WBC、RBC、Hb和PLT的本底计数结果均为“0”,符合卫生行业标准WS/T406-2012。见表3。

表3

表3

表3 PMS60本底计数结果 项目 本底计数 卫生行业标准[ 3] 判断 第1次 第2次 第3次 WBC(×109/L) 0 0 0 ≤0.5 通过 RBC(×1012/L) 0 0 0 ≤0.05 通过 Hb(g/L) 0 0 0 ≤2 通过 PLT(×109/L) 0 0 0 ≤10 通过

表3 PMS60本底计数结果

二、携带污染率

WBC、RBC、Hb和PLT的CR分别为0.09%、0.33%、0.54%和0.10%,均符合卫生行业标准WS/T406-2012。见表4。

表4

表4

表4 PMS60的CR结果 项目 检测结果 CR(%) 卫生行业标准(%)[ 3] 判断 第1次 第2次 第3次 WBC(×109/L) 106.80 110.50 108.90 0.09 ≤3.0 通过 2.70 2.60 2.60 RBC(×1012/L) 6.89 6.84 6.94 0.33 ≤2.0 通过 0.97 0.97 0.95 Hb(g/L) 206.00 203.00 207.00 0.54 ≤2.0 通过 24.00 24.00 23.00 PLT(×109/L) 1 029.00 1 075.00 1 019.00 0.10 ≤4.0 通过 10.00 10.00 11.00

表4 PMS60的CR结果

三、精密度

1.批内 CV 正常浓度水平样本各检测项目的批内精密度均在允许范围内,符合卫生行业标准WS/T406-2012,见表5。医学决定水平样本各检测项目的批内精密度也均符合美国临床试验室标准化协会(CLSI)H26-A2文件要求,见表6。

表5

表5

表5 检测正常浓度水平样本的批内精密度结果 项目 x- s CV(%) 卫生行业 标准(%)[ 3] 判断 WBC(×109/L) 9.88 0.08 0.81 ≤4.0 通过 RBC(×1012/L) 4.94 0.05 1.01 ≤2.0 通过 Hb(g/L) 157.90 1.29 0.82 ≤1.5 通过 HCT(%) 42.54 0.45 1.06 ≤3.0 通过 MCV(fL) 86.15 0.25 0.29 ≤2.0 通过 MCH(pg) 31.99 0.18 0.56 ≤2.0 通过 MCHC(g/L) 371.40 2.32 0.62 ≤2.5 通过 PLT(×109/L) 156.40 5.85 3.74 ≤5.0 通过

表5 检测正常浓度水平样本的批内精密度结果

表6

表6

表6 检测医学决定水平样本的批内精密度结果 项目 x- s CV(%) 卫生行业 标准(%)[ 4] 判断 WBC(×109/L) 0.45 0.02 4.44 ≤6.0 通过 RBC(×1012/L) 1.90 0.02 1.05 ≤2.5 通过 HCT(%) 16.66 0.17 1.03 ≤3.0 通过 MCV(fL) 87.73 0.27 0.31 ≤2.5 通过 Hb(g/L) 61.30 0.48 0.79 ≤2.0 通过 PLT(×109/L) 41.10 3.06 7.44 ≤8.0 通过

表6 检测医学决定水平样本的批内精密度结果

2.日间 CV 检测低、中和高值质控物,各项目的日间精密度均符合卫生行业标准WS/T406-2012。见表7。

表7

表7

表7 检测质控物的日间精密度结果 项目 CV(%) 卫生行业 标准(%)[ 3] 判断 低值 中值 高值 WBC(×109/L) 3.47 2.99 2.49 ≤6.0 通过 RBC(×1012/L) 1.59 1.29 1.17 ≤2.5 通过 Hb(g/L) 1.43 1.13 1.22 ≤2.0 通过 HCT(%) 1.56 1.40 1.32 ≤4.0 通过 MCV(fL) 1.21 0.99 1.15 ≤2.5 通过 MCH(pg) 1.12 1.08 1.40 ≤2.5 通过 MCHC(g/L) 1.25 1.48 1.58 ≤3.0 通过 PLT(×109/L) 5.28 4.00 3.20 ≤8.0 通过

表7 检测质控物的日间精密度结果

四、线性范围

WBC、RBC、Hb和PLT线性范围见表8, a均≤1±0.05、 r均≥0.975,均符合CLSI H26-A2文件要求。

表8

表8

表8 4项目仪器的线性范围评价结果 项目 线性范围 回归方程 r值 P值 卫生行业标准[ 4] 判断 WBC(×109/L) 0.74~118.73 Y=1 .016 X+0.358 1.000 <0.01 通过 RBC(×1012/L) 0.40~7.89 Y=1 .002 X-0.009 1.000 <0.01 a≤1.00±0.05 通过 Hb(g/L) 6.00~236.00 Y=1 .006 X-0.357 1.000 <0.01 r≥0.975 通过 PLT(×109/L) 9.00~1 776.00 Y=1 .013 X-0.483 0.999 <0.01 通过

表8 4项目仪器的线性范围评价结果

五、准确度

1.CBC的准确度 3个水平5个批号质控物WBC、RBC、Hb、HCT、MCV、MCH、MCHC和PLT的相对偏差均符合卫生行业标准WS/T406-2012,见表9。说明PMS60的CBC结果是准确可靠的。

表9

表9

表9 对质控物进行CBC检测的准确度结果 项目 测定值 靶值 相对偏 差(%) 卫生行业 标准(%)[ 3] 判断 项目 测定值 靶值 相对偏 差(%) 卫生行业 标准(%)[ 3] 判断 WBC(×109/L) 7.22 7.30 -1.10 ≤15.0 通过 HCT(%) 37.70 36.70 2.72 ≤9.0 通过 7.34 7.40 -0.81 38.50 37.50 2.67 2.34 2.50 -6.40 19.60 19.50 0.51 7.93 7.50 5.73 37.20 37.00 0.54 17.00 17.20 -1.16 43.70 42.80 2.10 RBC(×1012/L) 4.73 4.70 0.64 ≤6.0 通过 MCV(fL) 79.60 78.00 2.05 ≤7.0 通过 4.79 4.63 3.46 80.30 81.00 -0.86 2.46 2.47 -0.40 80.30 79.00 1.65 4.60 4.57 0.66 80.80 81.00 -0.25 5.13 5.04 1.79 85.20 85.00 0.24 Hb(g/L) 139.00 138.00 0.72 ≤6.0 通过 MCH(pg) 29.40 29.40 0.00 ≤7.0 通过 140.00 137.00 2.19 29.60 29.60 0.00 70.00 69.00 1.45 27.50 27.90 -1.43 140.00 138.00 1.45 30.30 30.20 0.33 162.00 160.00 1.25 31.60 31.70 -0.32 PLT(×109/L) 265.00 265.00 0.00 ≤20.0 通过 MCHC(g/L) 369.00 376.00 -1.86 ≤8.0 通过 260.00 260.00 0.00 365.00 365.00 0.00 70.00 68.00 2.94 354.00 354.00 0.00 236.00 260.00 -9.23 362.00 373.00 -2.95 512.00 520.00 -1.54 371.00 373.00 -0.54

表9 对质控物进行CBC检测的准确度结果

2.WBC分类的准确性(正常样本20例) PMS60和镜检法WBC分类计数结果见表10。以镜检法为“金标准”,PMS60的WBC分类比值与镜检法比较,中性粒细胞(neutrophiles,Neu)、淋巴细胞(lymphocytes,Lym)、嗜酸性粒细胞(eosinophiles,Eos)、单核细胞(monocytes,Mon)和嗜碱性粒细胞(basophiles,Bas)的准确率分别为95%、95%、85%、80%和75%。PMS60与镜检法Neu、Lym、Mon、Eos的 r值分别为0.959、0.961、0.422、0.563, P均<0.01。Neu和Lym项目PMS60和镜检法的相关性较好,Mon和Eos项目的相关性较差。PMS60的Bas项目与镜检法无相关性( r=0.167, P>0.05)。

表10

表10

表10 PMS60与镜检法WBC分类计数准确度结果 序号 PMS60均值(%) 镜检法均值(%) 结果判断 Lym Mon Neu Eos Bas Lym Mon Neu Eos Bas Lym Mon Neu Eos Bas 1 53.1 8.0 34.8 3.9 0.2 55.0 4.3 38.0 1.3 1.5 合格 合格 合格 不合格 合格 2 29.0 12.1 57.6 1.1 0.4 37.0 5.8 54.5 2.5 0.3 合格 不合格 合格 合格 合格 3 27.1 4.2 66.8 1.8 0.2 22.5 3.3 72.3 1.8 0.3 合格 合格 合格 合格 合格 4 23.8 5.8 68.6 1.6 0.2 24.5 4.3 68.5 2.5 0.3 合格 合格 合格 合格 合格 5 29.3 12.3 55.6 2.5 0.4 35.0 4.8 56.3 4.0 0.0 合格 不合格 合格 合格 不合格 6 22.9 5.5 68.7 2.7 0.3 27.8 5.5 64.3 2.3 0.3 合格 合格 合格 合格 合格 7 28.9 8.7 60.3 1.4 0.7 26.5 5.8 66.3 1.3 0.3 合格 合格 合格 合格 合格 8 21.5 9.4 66.6 2.1 0.5 30.0 3.8 62.5 3.3 0.5 不合格 不合格 合格 合格 合格 9 36.0 6.9 55.5 1.6 0.2 35.0 4.3 59.8 1.0 0.0 合格 合格 合格 合格 不合格 10 24.2 8.8 63.3 3.8 0.1 22.5 5.8 70.5 1.3 0.0 合格 合格 合格 不合格 不合格 11 34.0 7.2 55.8 3.0 0.2 32.0 5.8 56.8 4.8 0.8 合格 合格 合格 合格 合格 12 14.1 7.7 75.2 2.8 0.3 12.5 6.5 77.5 3.0 0.5 合格 合格 合格 合格 合格 13 20.4 6.1 70.9 2.3 0.4 18.8 5.8 73.8 1.5 0.3 合格 合格 合格 合格 合格 14 34.2 4.8 58.9 2.1 0.2 31.5 4.0 64.0 1.0 0.0 合格 合格 合格 合格 不合格 15 30.1 4.3 64.3 1.2 0.2 34.8 5.3 57.5 2.0 0.5 合格 合格 合格 合格 合格 16 34.2 6.2 57.4 2.1 0.2 35.5 2.5 61.0 1.0 0.0 合格 不合格 合格 合格 不合格 17 20.4 6.2 71.2 2.0 0.3 22.0 4.5 70.8 1.8 1.0 合格 合格 合格 合格 合格 18 33.6 7.5 55.2 2.9 0.9 31.0 4.5 62.0 1.5 1.0 合格 合格 合格 合格 合格 19 28.7 8.5 58.5 4.0 0.4 22.8 6.0 67.5 2.3 1.5 合格 合格 不合格 不合格 合格 20 41.3 4.8 50.7 2.8 0.5 39.8 4.0 53.5 1.0 1.8 合格 合格 合格 合格 合格

表10 PMS60与镜检法WBC分类计数准确度结果

六、可比性

卫生行业标准WS/T406-2012要求每个检测项目的相对偏差符合率≥80%^{[ 3]}。CLSI H26-A2文件要求 r>0.975、 a≤1.00±0.05^{[ 4]}。40例样本中CBC各项目的偏倚符合率均≥80%; r除MCV、MCHC为0.940和0.800外,均>0.975, a除PLT和MCHC为1.082和0.701外,均在0.95~1.05范围内, P均<0.01。见表11。

表11

表11

表11 PMS60与XS800i的可比性统计 项目 浓度 范围 例数 最大 偏倚(%) 最小 偏倚(%) 卫生行业 标准(%)[ 3] 符合率 (%) 判断 r值 P值 回归方程 WBC(×109/L) <2.00 4 4.32 0.00 ≤10.0 100.0 通过 1.000 <0.01 Y=0 .992 X+0.174 2.00~5.00 4 4.71 0.66 ≤7.5 5.10~11.00 18 5.30 0.59 11.10~50.00 10 6.43 0.19 >50.10 4 2.41 0.35 RBC(×1012/L) <3.00 2 5.39 0.35 ≤3.0 92.5 通过 0.997 <0.01 Y=0 .965 X+0.126 3.00~4.00 6 3.64 0.32 4.01~5.0 22 2.43 0.00 5.01~6.0 8 3.69 0.19 >6.01 2 2.06 2.03 Hb(g/L) <100 4 2.35 0.00 ≤3.5 97.5 通过 0.998 <0.01 Y=1 .002 X-0.733 100~120 6 3.33 0.00 121~160 24 3.60 0.00 161~180 4 1.78 1.18 >181 2 1.76 0.00 PLT(×109/L) <40 4 13.16 0.00 ≤15.0 97.5 通过 0.998 <0.01 Y=1 .082 X-10.034 40~125 8 7.27 0.00 ≤12.5 126~300 16 12.31 0.36 301~500 8 16.12 0.66 501~600 2 10.25 8.39 >601 2 9.59 6.35 HCT 40 6.09 0.00 ≤3.5 87.5 通过 0.994 <0.01 Y=0 .999 X-0.004 MCV 40 5.91 0.00 ≤3.5 85.0 通过 0.940 <0.01 Y=1 .011 X-1.515 MCH 40 4.29 0.00 ≤3.5 95.0 通过 0.982 <0.01 Y=0 .966 X+1.06 MCHC 40 4.73 0.30 ≤3.5 90.0 通过 0.800 <0.01 Y=0 .701 X+99.227

表11 PMS60与XS800i的可比性统计

本研究对PMS60进行性能测试,本底计数均为“0”,携带污染率<0.61%,各浓度水平精密度均在国家卫生行业标准规定范围内,线性范围内WBC、RBC、Hb、PLT测定值与理论值相关系数均>0.999。

与镜检法比较,PMS60 WBC分类结果中Lym、Neu的符合率最高,其次为Eos、Mon,Bas最差。出现这种情况主要是5种WBC出现的比例不同(Eos参考区间为0.5%~5.0%,Mon为3%~10%,Bas为0%~1%)^{[ 1]},其次镜检法细胞计数量远低于仪器计数量,而且仪器计数时还会出现单核细胞与中性杆状核粒细胞相混淆现象。彭明婷等^{[ 6]}认为到目前为止,尚未有任何一种血液分析仪可取代人工染色镜检,只能作为一种过筛工具。另外,PMS60具有两大独特参数,即巨大未成熟细胞(LIC)和不典型淋巴细胞(ALY)。但LIC是一类细胞群体,包括大单核细胞、高嗜碱性单核细胞、巨大中性粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、原始细胞等^{[ 7]};而ALY是散点图位于淋巴、单核细胞之间的一群细胞,包括小原始细胞、大淋巴细胞、反应性淋巴样细胞、刺激性淋巴细胞和浆细胞等^{[ 7]}。这2个参数结果并没有归到WBC总数和分类计数中,仅对检验者在审核报告时能快速决定是否作手工分类提供依据。据报道,与手工分类相比,当LIC比例>6%(或绝对值>0.5×10⁹/L)时,LIC报警敏感度为91.5%,假阴性率为2%^{[ 8]};ALY比例>2.5%(或绝对值>0.25×10⁹/L)时,ALY报警敏感度为96.3%,假阴性率为1.5%^{[ 9]}。因此,建议检验人员审核报告时即使是正常样本也必须看仪器的散点图和提示信息,再根据情况决定是否手工分类。

通过与XS800i比对分析,两台仪器MCV结果的 r值为0.94(<0.975),可能是因PMS60检测MCV的原理是由红细胞直方图计算而得,而XS800i由HCT和RBC计算得出。而MCHC两台仪器的 r值为0.800,回归方程斜率为0.701(<0.950)。可能是因为两台仪器均通过Hb和HCT计算得出,而MCHC这项指标具有放大作用。PLT结果回归方程斜率为1.082(>1.050),主要是因仪器间抗血小板干扰因素不同所致。总的来说,两台仪器各项目偏倚符合率>85%,符合卫生行业标准。因此,两台仪器间结果相关性好,具有良好可比性。

总之,PMS60携带污染率、精密度、准确度、线性、可比性均较好,能满足临床实验室日常工作需要。

(收稿日期:2014-01-02)

(本文编辑:龚晓霖)