Reflotron-Hemoglobin干式血红蛋白(hemoglobin,Hb)检测系统是罗氏诊断有限公司研发的用来对人类血液中Hb进行定量检测的一款最新的仪器。我们对Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统进行临床验证,从精密性、准确度、线性范围、参考区间及与已上市产品是否具有良好的相关性等方面验证Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统的性能是否满足临床应用需求。

一、材料

Hb结果正常及异常标本均来自瑞金医院门诊新鲜血液标本。Hb质控品及校准品均由罗氏公司提供。参考范围验证使用体检中心送检的新鲜血液标本。均排除器质性疾病,B超、胸片及血液检查(血糖、血脂、肝肾功能)均正常,女性不在经期内。男、女各20份。

二、方法

1.样品采集 所有样品均用美国BD公司乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K₂)抗凝管采集,并在采集后4 h内检测完成。

2.仪器和试剂 Reflotron-Hemoglobin干式Hb分析仪及原装配套试条,BECKMAN COULTER LH750全自动血液分析仪(简称LH750)及原装配套试剂。

3.批内精密度 按照中华人民共和国医药行业血液分析仪标准(YY/T0653-2008)进行精密度测试。选择1名正常新鲜血样本和1例异常新鲜血样本(Hb<110 g/L),样本每次充分混匀后检测,每例样本连续测量10次,计算Hb结果的变异系数( CV)。

4.批间精密度 使用Hb质控品配制正常值(120 g/L)和异常值(60 g/L)标本。每天检测4次,上、下午各检测2次,连续检测5 d。将测定的各参数结果进行统计学处理,计算各参数的批间精密度。

5.线性范围 说明书显示该仪器的检测范围为50~200 g/L。根据美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP6文件,选取患者标本配置接近理论值的最高浓度Hb悬液(H)和最低浓度悬液(L),实际标本高值为191 g/L,低值为52 g/L,按H、4H+L、3H+2L、2H+3L、H+4L、L的比例进行稀释,在仪器上每个稀释浓度样本重复测定2次,取均值作为测量结果,将测定值和预期值作比较,计算 Y= bX+a,验证线性范围。

6.与LH750检测结果的相关性 按照YY/T0653-2008标准,选取120例临床新鲜抗凝静脉血,分别用Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统及LH750进行检测,其中正常值标本60例、低值(Hb<120 g/L)标本50例、高值(Hb>160 g/L)标本10例,做 Y= bX+a回归方程验证相关性。

7.参考区间验证 依据CLSI C28-A3文件,选取表面健康的男、女标本各20名,用Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统进行检测,看是否落在参考区间内。

一、批内精密度

正常标本(均值为127 g/L)和异常低值标本(均值为85 g/L)测定的标准差分别为3.23和2.41, CV分别为2.54%和2.84%,符合厂商的要求(<3.5%)。

二、批间精密度

正常标本(均值为120.95 g/L)和异常低值标本(均值为59.61 g/L)测定的标准差分别为0.82和2.02, CV分别为0.68%和3.38%,符合厂商的要求(<3.5%)。

三、线性范围

检测结果线性回归方程为 Y=1 .000 8 X-0 .186 4, R² =0 .999 1,见图1。符合说明书所提供检测范围的要求。

图1

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	图1 线性范围

四、与LH750的相关性比较

比对结果见图2。相关方程为 Y=1.031 6 X-2.796 9, R²=0.957。有9例样本比对值偏差>7%,但92.5%的标本比对结果符合要求,符合率>80%,说明两者检测结果具有相关性。

图2

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	图2 Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统与LH 750结果的比对

五、参考区间验证

40名健康人检测结果均落在参考区间内,验证通过。见图3。

图3

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	图3 Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统参考区间验证

Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测试纸配合Reflotron干化学分析仪联合使用,其检测原理为氰化高铁Hb法。为加速反应过程,使用皂角苷溶解红细胞。在567 nm波长和37 ℃下测定,120 s后显示Hb定量检测结果,以g/dL、g/L或mmol/L表示。本研究参考相关文献对该Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统性能做了评价。结果显示,该检测系统批内精密度为2.54%~2.84%,批间精密度为0.68%~3.88%,均符合要求。因批间精密度研究用标本使用厂家的Hb粉剂,需加入稀释液复融,可能存在基质效应,造成批内精密度>批间精密度的现象。该检测系统线性良好,线性范围为52~191 g/L;与LH750相关性良好,在Hb检测方面两者基本性能相似。参考区间验证符合率为100%,目前使用的参考区间适用于该检测系统。

总之,Reflotron-Hemoglobin干式Hb检测系统操作简单,样本检测速度较快,是一款较为理想的干式Hb分析仪。

(收稿日期:2014-01-10)

(本文编辑:范基农)