子痫前期是人类妊娠期特有的多脏器损伤综合征,是妊娠20周以后“妊娠高血压综合征”的特殊表现,包括水肿、高血压和蛋白尿,严重时可出现抽搐、昏迷,初产妇发病率高达3%~7%^{[ 1]},严重威胁着母婴健康。早期诊断和预测是该领域研究的重大课题。我们通过对子痫前期患者和正常孕妇血浆纤维蛋白原γ链浓度检测并比较分析,探讨血浆纤维蛋白原γ链浓度及其裂解产物在子痫前期的预测和辅助诊断中的价值。

一、对象

1.子痫前期组 2011年9月至2012年9月期间,全程追踪上海市第一人民医院宝山分院产科门诊中人绒毛膜促性腺激素(HCG)阳性孕妇,收集血浆及临床资料,直至分娩出院。完成全程跟踪孕产妇1 012例,其中子痫前期患者31例(轻度15例,重度16例)。子痫前期诊断及分类标准参照《妇产科学》(第6版)^{[ 2]},由产科医师依据临床和实验资料做出诊断。

2.对照组 在完成全程追踪的孕产妇中,以年龄、胎次、胎数匹配,随机选取无口服避孕药史,排除心、肝、肾、甲状腺疾患以及糖尿病、高血压等疾病史的健康孕产妇。

二、方法

1.试剂及器材 辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊多克隆纤维蛋白原抗体 (ab7539)购自Abcam公司,增强鲁米诺化学发光(ECL)试剂盒(32209)购自Thermo公司,标记物(0008806)购自Fermentas公司,蛋白电泳、转膜及成像系统(美国Bio-Rad公司)。

2.标本采集 正常孕妇血浆标本收集时间分别为妊娠20周、妊娠32周、分娩前。子痫前期患者血浆标本检查次数随病情变化相应增多。血浆标本均为空腹静脉采血,乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝,混匀后3 000× g离心10 min,-80 ℃低温冰箱保存。

3.检测方法 应用免疫印迹法检测各组孕妇血浆纤维蛋白原γ链浓度^{[ 3]}, 操作均按说明书进行,γ链的灰度值均由Quantity One软件分析得来。

三、统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。组间比较采用两样本 t检验。 P<0.05为差异有统计学意义。

一、正常妊娠过程中血浆纤维蛋白原γ链浓度变化

正常孕妇妊娠20周和32周血浆纤维蛋白原γ链免疫印迹法检测结果见图1。2个孕期间血浆纤维蛋白原γ链浓度差异无统计学意义( P>0.05)。提示在正常妊娠过程中,孕产妇血浆纤维蛋白原γ链合成和分解维持动态平衡。

图1

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	图1 同一正常孕妇妊娠20周与妊娠32周血浆纤维蛋白原γ链浓度比较

二、子痫前期组与相同孕周对照组血浆纤维蛋白原γ链的比较

妊娠20周时,子痫前期组血浆纤维蛋白原γ链浓度与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05),见图2。妊娠32周时,子痫前期组血浆纤维蛋白原γ链浓度明显高于对照组( P<0.01);31例子痫前期组中有1例子痫前期重度患者出现25 000、27 000及23 000特异片段。子痫前期组确诊时血浆纤维蛋白原γ链浓度明显高于相同孕周对照组( P<0.01);31例子痫前期患者中有5例(轻度1例,重度4例)出现25 000、27 000及23 000特异片段,见图2。

图2

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	图2 子痫前期组与相同孕周对照组血浆纤维蛋白原γ链浓度的比较

三、子痫前期患者血浆纤维蛋白原γ链浓度的变化

在妊娠过程中,子痫前期组确诊后血浆纤维蛋白原γ链浓度明显高于妊娠20周时( P<0.01)。31例子痫前期患者中有5例(轻度1例,重度4例)确诊后出现25 000、27 000及23 000特异片段,而对照组、子痫前期组孕20周时均未发现有特异片段。提示高浓度的纤维蛋白原γ链及裂解片段与子痫前期发病相关。

图3

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	图3 子痫前期组妊娠20周及确诊时血浆纤维蛋白原γ链浓度的变化

子痫前期发生机制尚未完全阐明,目前认为与多种因素有关,其中血管内皮细胞损伤是导致子痫前期多系统损伤的病理基础^{[ 4, 5]}。子痫前期时患者出现的凝血和出血机制异常是其重要的临床表现^{[ 6]}。本研究结果显示,与正常妊娠孕妇相比,子痫前期患者孕20周时血浆纤维蛋白原γ链浓度无明显变化;但在孕32周,特别是在子痫前期发生期,血浆纤维蛋白原γ链浓度异常升高,且部分患者出现血浆纤维蛋白原γ链裂解片段,与Blumenstein等^{[ 3]}报道一致。他们应用二维电泳、GE Healthcare软件测定和配对斑点,荧光差异分析软件(DeCyder)生物信息学分析和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)等技术,发现准确度>90%的斑点2个,经免疫印迹法分析,证实其中之一是纤维蛋白原γ链。提示在正常情况下,妊娠期孕妇血浆纤维蛋白原的合成与裂解保持动态平衡,维持出凝血机制正常运行,而子痫前期患者妊娠后期,特别是子痫前期发生时,这种平衡被打破,血浆纤维蛋白原γ链合成或降解出现异常。

纤维蛋白原是由肝细胞合成、分泌的一种糖蛋白,由α链(66 500)、β链(52 000)和γ链(46 500) 通过二硫键连接组成的六聚体,是血浆中含量最高的凝血因子^{[ 3]}。在纤溶酶作用下, 纤维蛋白原和纤维蛋白可被分解为许多可溶性小肽,纤溶酶降解纤维蛋白原产生X片段(250 000)、Y片段(150 000)、D片段(100 000)和E片段(50 000)。降解纤维蛋白则产生X'、Y'、D二聚体(D-D)和E'片段^{[ 7]}。因此,在正常个体的血浆中,除成熟的纤维蛋白原分子外,还存在α、β和γ单链,αγ和βγ二聚体,半分子及其降解产物X片段、Y片段、D片段和E片段,X'、Y'、D-D和E'片段等。因此,某些病理情况下孕妇血浆中纤维蛋白原γ链降解出现后25 000及27 000片段。

正常孕妇妊娠20周、32周相比,血浆纤维蛋白原γ链浓度变化不明显。表明血浆纤维蛋白原合成与降解变化与妊娠周数相关性不高。子痫前期患者妊娠20周(约确诊前3个月)与相同孕周正常孕妇相比,血浆纤维蛋白原γ链浓度变化不明显;子痫前期患者妊娠32周(确诊前2~7周)时与相同孕周正常孕妇相比,血浆纤维蛋白原γ链增高。表明子痫前期患者确诊前2~47周,血浆纤维蛋白原合成与降解发生紊乱,γ链浓度增加,可能具有一定的预测价值。子痫前期患者确诊时与相同孕周的正常孕妇相比,血浆纤维蛋白原γ链明显增高。表明子痫前期患者确诊时,血浆纤维蛋白原合成与降解进一步紊乱,γ链浓度增高,可能具有一定的辅助诊断价值。子痫前期患者确诊后与确诊前相比,血浆纤维蛋白原γ链明显增高。表明子痫前期患者确诊后血浆纤维蛋白原合成与降解发生紊乱,γ链浓度增加。

在16例子痫前期重度患者血浆中,1例患者在确诊前2周、3例患者在确诊时出现了23 000、25 000、27 000特异片段;15例轻度患者中仅1例出现了特异片段;31例正常孕妇中未见相关特异片段。本研究中5例患者23 000、25 000、27 000片段均同时出现,且它们的出现均伴随有纤维蛋白原γ链的明显升高。提示子痫前期患者血浆纤维蛋白原γ链合成与裂解同步增强。

综上所述,子痫前期的发生机制非常复杂,纤维蛋白原合成、降解紊乱可能是其重要机制之一。新近发现的纤维蛋白原γ链及23 000、25 000和27 000片段在子痫前期孕妇血浆中特异升高,可能为预测、诊断子痫前期的发生提供了新的线索,值得进一步探讨。