近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)在世界各地感染率和分离率不断升高,已成为目前医院内感染的主要病原菌之一。由于MRSA对所有的β-内酰胺类抗菌药物耐药,所致感染呈散发或爆发流行,治疗困难,病死率高,成为临床治疗的一大难题^{[ 1]}。因此,快速和准确地检测MRSA,对于控制医院内感染的流行,指导临床治疗有着非常重要的意义。本研究将MRSA ID产色培养基法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林最低抑菌浓度(MIC)法、青霉素结合蛋白(PBP2a)乳胶凝集法与荧光聚合酶链反应(PCR)检测 mecA基因进行比较,旨在找出准确、快速、简便的适用于临床微生物实验室检测MRSA的方法。

金黄色葡萄球菌对甲氧西林耐药,其机制主要是由于携带 mecA基因,也可能因为产生高水平的β-内酰胺酶和获得性PBP2a以外的其他PBP修饰^{[ 3]}。目前用于检测MRSA的方法有多种,检测 mecA基因或 mecA表达的PBP2a是预报苯唑西林耐药最准确的方法^{[ 2]}。但这2项技术试验条件要求高且价格昂贵,不适合临床实验室作为常规方法^{[ 4]}。

本研究用5种方法检测了181株葡萄球菌,其中 mecA阳性MRSA 119株,4种方法与PCR检测法比较均有较好的一致性。本研究显示,头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性最高,均为100.0%,与PCR检测 mecA基因的 Kappa值为1.000,说明完全一致,可见头孢西丁可作为检测 mecA介导的苯唑西林耐药的替代品,与Gupta等^{[ 5]}的研究结果一致。头孢西丁纸片扩散法简便易行,也是CLSI推荐的临床常规检测MRSA的方法,但从临床标本中检测MRSA需48 h。MRSA ID产色培养基法敏感性为100.0%,高于苯唑西林MIC法(97.5%)和PBP2a乳胶凝集法(98.3%),特异性为91.9%,低于其他方法。鉴定假阳性的5株菌株为PCR mecA基因阳性其他葡萄球菌,可见凝固酶阴性高耐药的葡萄球菌对显色可能有一定的干扰,而39株MSSA完全没有干扰。近年来,国内、外各种产色培养基被应用于鉴定MRSA^{[ 6, 7]},也被直接应用于血培养瓶、伤口脓液、脓肿的标本检测,18~24 h就能检测出MRSA^{[ 8, 9]},缩短了检测时间,并显示出了高敏感性和特异性。本研究有1株金黄色葡萄球菌苯唑西林耐药而 mecA基因阴性,分析原因可能与菌株产生高水平的β-内酰胺酶或存在PBP2a以外的低亲和力PBP有关,还需进一步证实。在 mecA基因阳性的菌株中,表现为苯唑西林敏感的3株金黄色葡萄球菌,可能是因为位于 mecA启动子上游的转录调节基因 mecⅠ的作用特别强大而诱导剂的作用较弱时, mecA基因处于抑制状态,表达PBP2a的量很少^{[ 10]},或是辅助基因 fem的失活致高耐菌株变为低耐菌株^{[ 11]},这3株金黄色葡萄球菌头孢西丁纸片扩散法结果与 mecA基因检测一致,进一步证实了头孢西丁纸片扩散法的优越性。有研究结果显示,头孢西丁纸片扩散法可用于检测各种表型的MRSA,尤其对低水平、异质性耐药的MRSA,其敏感性高于其他筛选试验^{[ 12]}。

MRSA往往表现为多重耐药,早期检测不仅是感染控制的关键,也是临床上决定是否使用糖肽类和恶唑烷酮类抗菌药物的关键。综上所述,头孢西丁纸片扩散法是临床实验室检测MRSA的常规方法,为了避免 mecA基因阴性的MRSA漏检,建议同时做苯唑西林纸片扩散法。而应用产色培养基法进行MRSA快速检测,将为MRSA院内感染爆发的监测、感染的预防控制以及临床上抗菌药物的使用提供快速、可靠的依据。