引用本文
郑沁, 赵儒, 黄茜, 熊明, 粟军. 细菌或真菌对UF-1000i尿沉渣分析仪红细胞检测的影响. 2012, 27(8): 663-666
ZHENG Qin, ZHAO Ru, HUANG Qian, XIONG Ming, SU Jun.. Influence of different bacteria or fungi on the determination of urinary sediments by UF-1000i urinary sediment analyzer. Labratory Medicine, 2012, 27(8): 663-666  
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细菌或真菌对UF-1000i尿沉渣分析仪红细胞检测的影响
郑沁, 赵儒, 黄茜, 熊明, 粟军
四川大学华西医院实验医学科,四川 成都 610041

作者简介:郑 沁,女,1981年生,硕士,技师,主要从事临床基础检验及血液学检验工作。

通讯作者:粟 军,联系电话:028-85422372。

摘要
目的

探讨不同浓度不同种类细菌或真菌对UF-1000i尿沉渣分析仪(简称UF-1000i)红细胞(RBC)测定结果的影响,以对泌尿系统疾病诊断、评估提供更可靠的实验室依据。

方法

健康体检者尿液标本制作成混合尿基质,将不同浓度泌尿系统感染常见细菌和真菌菌液加入制备混合尿基质,用UF-1000i检测各种浓度菌尿RBC。收集各种RBC浓度梯度病理血尿标本,加入白念珠菌菌液,调整真菌终浓度后用UF-1000i检测各种浓度菌尿RBC。每份标本同时进行显微镜镜检。

结果

泌尿系统感染常见革兰阴性杆菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌)、革兰阳性球菌(金黄色葡萄球菌)和低浓度的白念珠菌(<106/mL)对UF-1000i RBC测定结果无明显影响。粪肠球菌制备菌尿中,细菌浓度为109/mL时UF-1000i检测结果显示尿RBC假阳性。白念珠菌制备菌尿中,真菌浓度从106/mL开始UF-1000i检测结果显示尿RBC假阳性。真菌浓度增至108/mL时,导致血尿标本RBC定量结果显著假性增高 ( P=0.006)。

结论

UF-1000i具有独立的双检测通道,在很大程度上减少了细菌对尿RBC检测的干扰。但并不能有效避免高浓度真菌对RBC检测结果的影响,易造成尿RBC检测假阳性结果而影响实验室检测质量,需进行显微镜镜检校正以保证检验结果的准确性。

关键词: UF-1000i尿沉渣分析仪; 菌尿; 红细胞计数; 血尿
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)08-0663-04
Influence of different bacteria or fungi on the determination of urinary sediments by UF-1000i urinary sediment analyzer
ZHENG Qin, ZHAO Ru, HUANG Qian, XIONG Ming, SU Jun.
Department of Clinical Laboratory, West China Hospital of Sichuan University, Sichuan Chengdu 610041,China
Abstract
Objective

To study the influence of different bacteria or fungi with different levels on the determination of urinary red blood cell(RBC) count by UF-1000i urinary sediment analyzer(UF-1000i), so as to provide more reliable laboratory evidence in the diagnosis and follow-up of urinary tract diseases.

Methods

The urine RBC counts were analyzed by UF-1000i from urine mixture specimens and hematuria specimens with Blastomyces albicans, in parallel with manual microscopy respectively.

Results

The Gram-negative bacilli( Escherichia coli, Klebsiella pneumonia and Pseudomonas aeruginosa) and Gram-positive cocci ( Staphylococcus aureus) isolated from urine specimens of urinary tract infection and low-concentration Blastomyces albicans (<106 mL) were not impact the urine RBC count detected by UF-1000i. High concentration bacteriuria specimens (=109/mL) of Enterococcus faecalis caused the false-positive RBC count. The urine RBC count determined by UF-1000i was caused false-positive by Candida albicans, when the concentration of fungi was more than 106/mL. The concentration of Candida albicans reached to 108/mL,and the hematuria specimen RBC count would falsely increased ( P=0.006).

Conclusions

UF-1000i has special bacterial examination channel, and it could prevent the interference with urine RBC count obviously. However, it is hard to prevent the interference of high concentration fungi, which would cause false-positive urine RBC count. It is recommended to correct the RBC count by manual microscopy in order to provide accurate laboratory results.

Keyword: UF-1000i urinary sediment analyzer; Bacteriuria; Red blood cell count; Hematuria

血尿(hematuria)是多种泌尿系统疾病的重要临床表现之一, 如泌尿道感染、尿结石、良性前列腺增生以及泌尿道肿瘤等[1], 因此尿红细胞(RBC)检测结果对临床诊断及鉴别诊断有重要的意义。UF-1000i是目前较先进的尿沉渣分析仪, 操作简便快捷, 但其对尿RBC检测结果的准确性是否会受到泌尿系统感染常见细菌或真菌的干扰, 目前国内外相关报道较少。泌尿系统感染常见病原菌包括革兰阴性杆菌中的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌, 革兰阳性球菌中的粪肠球菌、金黄色葡萄球菌以及真菌中的白念珠菌[2, 3, 4]。本研究通过评价不同浓度泌尿系统感染常见细菌或真菌对UF-1000i尿沉渣分析仪(简称UF-1000i)RBC检测的影响, 以对泌尿系统疾病诊断、评估提供更可靠的实验室依据。

材料和方法
一、 标本来源

1. 混合尿基质 收集100份健康体检者新鲜尿标本, 排除标准:白细胞(WBC)≥ 5/HPF, RBC≥ 3/HPF, 上皮细胞≥ 10/HPF, 细菌+/HPF。混合均匀待用。

2. 血尿标本 收集24份住院患者新鲜尿液标本, 其尿RBC浓度分别为: 25~50、50~100、100~200、200~300、300~400, > 400/μ L, 患者男12例, 女12例, 平均年龄43岁。

3. 细菌和真菌 大肠埃希菌(ATCC 25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)、粪肠球菌(ATCC 29212)、金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、白念珠菌(ATCC 90029), 肉汤培养24 h后, 取对数生长期细菌试验。

二、仪器和试剂

1. 仪器 UF-1000i(日本Sysmex公司); 显微镜(美国DiaSys, Motic)。

2. 试剂 UF-1000i配套试剂(日本Sysmex公司)。

3. 质控品 check10590803、check10600802(日本Sysmex公司)。

三、方法

1. 不同浓度不同细菌对正常尿基质中RBC检测的影响 (1) 标本制备:将100份健康体检者尿液标本充分混匀, 制作混合尿基质。将不同浓度大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌和白念珠菌菌液加入上述制备的混合尿基质, 充分混匀, 使各种细菌和真菌在混合尿基质中的终浓度分别为0、1、10、102、103、104、105、106、107、108、109/mL, 每份标本最终体积为5 mL, 平行2管; (2)标本检测:UF-1000i质控在控的条件下, 由低浓度到高浓度依次对各种浓度菌尿进行分析, 每个浓度平行测定2份, 以RBC定量∕ 定性结果均值报告。每份标本同时进行显微镜RBC镜检。所有检测在2 h内完成; (3) 报告方式:以UF-1000i检测的RBC定量∕ 定性结果结合显微镜镜检结果报告, 以尿RBC≥ 3/HPF为尿RBC检测阳性标准[5]。

2. 不同浓度不同细菌对血尿标本中RBC检测的影响 (1) 标本制备:根据尿RBC浓度将血尿标本分为6组, 其尿RBC浓度为25~50、50~100、100~200、200~300、300~400、> 400 /μ L。将上述正常尿基质RBC检测结果中对RBC检测有影响的白念珠菌菌液加入上述浓度梯度血尿标本中, 使其真菌终浓度为106、107、108、109 /mL, 每份标本最终体积为5 mL, 平行2管; (2)标本检测:同上述正常尿基质RBC检测。

三、统计学方法

应用 SPSS 17.0统计软件。数据先行方差齐性检验, 使用方差分析中的Dunnett t检验, P< 0.05表示差异有统计学意义。

结 果

不同浓度不同细菌菌尿加入正常混合尿基质中, UF-1000i检测其RBC定量/定性结果见表1和表2。各种浓度的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌菌尿UF-1000i检测结果显示尿RBC阴性。粪肠球菌制备的菌尿中, 109/mL浓度时UF-1000i检测结果显示尿RBC假阳性。白念珠菌制备的菌尿中, 从106/mL浓度开始UF-1000i检测结果显示尿RBC假阳性, 且随菌液浓度增高, RBC定量/定性结果明显增高。

表1 不同浓度不同细菌或真菌菌尿UF-1000i检测RBC定量结果
表2 不同浓度不同细菌或真菌菌尿UF-1000i检测RBC定性结果

不同浓度白念珠菌加入不同RBC浓度梯度的血尿中, UF-1000i检测RBC定量结果见表3。尿RBC浓度为25~50、50~100、100~200、200~300、300~400/μ L的血尿中, UF-1000i RBC定量结果随尿真菌浓度的增大而增高。真菌浓度增至108/mL时, 导致血尿标本RBC定量结果显著假性增高 (P=0.006), 而尿RBC定量> 400/μ L的血尿标本随尿细菌浓度的增大, UF-1000i RBC定量结果反而降低。

表3 不同浓度白念珠菌加入不同浓度梯度的血尿中UF-1000i RBC定量结果
讨 论

UF-1000i是目前用于测定尿液有形成分最先进的仪器之一, 该仪器采用红色半导体激光(λ =635 nm ) 照射经过染色后在鞘流贯流分析池中形成的鞘流标本, 并将各种粒子产生的前向散射光、侧向散射光以及侧向荧光信号转换成光电信号进行分析, 从而对各种有形成分进行分类和计数, 并采用DNA/RNA细胞染色分析技术对尿中有形成分进行高精度分析, UF-1000i具有独立的双检测通道(沉渣通道和细菌通道), 染液也独立分开为沉渣用染液和细菌用染液, 这与之前的UF-50、UF-100相比, 在很大程度上减少了细菌对尿RBC检测的干扰[6]。

RBC平均直径约7.2 μ m[5], 无细胞核, 染料仅对细胞膜着色, 细菌体积大小不一, 球菌直径0.8~1.2 μ m, 杆菌长宽比例差别较大, 常见的大肠埃希菌宽1.1~1.5 μ m, 长2.0~6.0 μ m[7], 较RBC小得多。细菌虽然有细胞核, 但细菌细胞膜对染料的通透性低, 所以染色后荧光强度和前向散射光强度也较低[8]。有关细菌对尿沉渣仪UF-100 RBC检测影响的文献报道[9, 10]显示, 当尿液中有大量球菌和杆菌存在时, 细菌在代谢时产生一些有毒物质(如内毒素)可改变细胞膜的通透性以及影响膜的变形性, 使得细菌在尿液中成双、成堆出现, 菌团大小与RBC相似, 有可能被误认为RBC而产生一定程度的干扰, 造成尿RBC检测假阳性结果。而本试验结果显示, 泌尿系统感染常见革兰阴性杆菌(大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌)、革兰阳性球菌(金黄色葡萄球菌、< 109/mL的粪肠球菌)对UF-1000i RBC测定无明显影响, 仅在较高浓度(109/mL)的粪肠球菌菌尿中显示假阳性结果。

本研究显示, 低浓度的白念珠菌(< 106/mL)对UF-1000i RBC检测结果无明显影响, 但高浓度的白念珠菌(≥ 106/mL)会使尿RBC检测结果显示假阳性, 且在血尿标本的验证试验中, RBC定量结果的假性增高随着真菌浓度的增大越加明显。这可能是因为白念珠菌呈圆形或卵圆形, 直径3~6 μ m[8], 与RBC体积较相近, 且荧光染料对酵母菌的亲和力比对RBC的亲和力强[9]。有报道显示真菌对UF-100 RBC检测有影响[9], 可见与UF-100相比, UF-1000i虽然在排除细菌对RBC检测的干扰性能上有一定的改进和提高, 仍然不能克服高浓度真菌对尿RBC检测的干扰。

UF-1000i具有独立的双检测通道, 相对于UF-50、UF-100而言, 在很大程度上减少了细菌对尿RBC检测的干扰。但并不能有效避免高浓度真菌对RBC检测结果的影响, 易造成尿RBC检测假阳性结果而影响实验室检测质量, 需进行显微镜镜检校正以保证检验结果的准确性。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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