引用本文
徐健, 周道银, 俞靖龙, 唐古生. 支气管肺泡灌洗液常规细胞形态学检查的临床应用价值评价. 2012, 27(3): 221-224
XU Jian, ZHOU Daoyin, YU Jinglong, TANG Gusheng. Clinical application value evaluation of routine cytomorphology examination in bronchoalveolar lavage fluid. Labratory Medicine, 2012, 27(3): 221-224  
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支气管肺泡灌洗液常规细胞形态学检查的临床应用价值评价
徐健, 周道银, 俞靖龙, 唐古生
第二军医大学附属长海医院实验诊断科,上海 200433

作者简介：徐健,男,1979年生,学士,技师,主要从事临床检验工作。

通讯作者：唐古生,联系电话：021-81873612-8609。

摘要

目的 通过对2005年1月~2010年12月长海医院860例支气管肺泡灌洗液常规细胞形态学检查结果回顾分析,评价其临床应用价值。方法 用10 mL塑料离心管留取支气管肺泡灌洗液5~10 mL,500 g,离心5 min,弃上清液吸取沉淀物制片,采用推片法制6张涂片,其中无尾厚片、有尾厚片、有尾薄片各2张。涂片染色采用瑞吉染色法,由经验丰富的细胞形态学检验人员在普通光学显微镜下进行单核/巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等分类以及细胞形态、异常成份观察,必要时涂片行过碘酸-雪夫(PAS)、含铁血黄素染色等。结果 (1)常规细胞分类计数,中性粒细胞比例>2%者764例,占总例数的88.8%,其中>20%者406例,占总例数的47.2%;淋巴细胞比例>12%者234例,占总例数的27.2%,其中>20%者135例,占总例数的15.7%;嗜酸性粒细胞比例>1%者64例,占总例数的7.4%,其中32例>10%,占总例数的3.2%;(2)860例标本中查见异常成份的117例,占总例数的13.6%。其中查见癌细胞16例、查见核异质细胞(异型细胞)或可疑癌细胞共43例、查见真菌14例、查见卡氏肺孢子虫3例、查见噬菌细胞2例、PAS染色阳性33例、含铁血黄素染色阳性6例;(3)860例标本中未见异常的(单核/巨噬细胞≥85%且未见其他异常成分)仅46份,占总例数5.3%。结论 本院送检支气管肺泡灌洗液常规检查标本,实验室异常检出率高,可以为临床多种疾病的诊断、治疗和预后分析提供有价值的参考信息。

关键词: 支气管肺泡灌洗液; 细胞形态学; 异常检出率
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)03-0221-04
Clinical application value evaluation of routine cytomorphology examination in bronchoalveolar lavage fluid
XU Jian, ZHOU Daoyin, YU Jinglong, TANG Gusheng
Department of Laboratory Diagnosis,Changhai Hospital, the Second Military Medical University, Shanghai 200433,China
Abstract

Objective To evaluate the clinical application value of routine cytomorphology examination in 860 bronchoalveolar lavage fluid samples collected from January 2005 to December 2010 in Changhai Hospital by retrospective analysis.Methods The 5-10 mL bronchoalveolar lavage fluid was collected in 10 mL plastic centrifuge tube and was centrifuged (500 g,5 min). The sediment was then loaded on microscopic slides, and ordinarily 6 smears were produced, including 2 thick slides without tails, 2 thick slides with tails and 2 thin slides with tails. Wright-Giemsa was performed, and the monocytes/macrophages, lymphocytes, neutrophils, eosinophils, et al, cytomorphology and abnormal constituents were further counted and differentiated by experienced technicians under light microscopy. Periodic acid-Schiff (PAS) stain and hemosiderin staining were also performed if necessary.Results Neutrophil ratio >2% or 20% accounted for 88.8% (764 cases) or 47.2 % (406 cases) of the total 860 patients, respectively. Lymphocyte ratio >12% or 20% accounted for 27.2% (234 cases) or 15.7% (135 cases), respectively. Eosinophil ratio>1% or 10% accounted for 7.4% (64 cases) or 3.2% (32 cases). A total of 117 cases accounted for 13.6% were found to have abnormal constituents, including cancer cells in 16 cases, heterogeneous nuclear or suspected cancer cells in 43 cases, fungus in 14 cases, Pneumocystis carinii in 3 cases and phagocytes in 2 cases. PAS stain positive had 33 cases, and hemosiderin staining positive had 6 cases. There were only 46 samples in which no abnormality was identified, accounting for 5.3% of total cases.Conclusions High detection rates of abnormality in bronchoalveolar lavage fluid are identified, the high detection rates can provid helpful clinical reference for the diagnosis, treatment and prognosis of various diseases.

Keyword: Bronchoalveolar lavage fluid; Cytomorphology; Abnormality detection rate
引言

近年来, 由于日益严重的环境污染以及吸烟等因素, 呼吸系统疾病的发病率不断上升。在纤维支气管镜应用基础上发展起来的支气管肺泡灌洗液(BALF)常规细胞形态学检查, 能够较为准确的反映肺部疾病的病理生理学变化及炎症进程, 其操作简单、创伤小, 作为评价肺部疾病的重要手段已广泛应用于临床, 然而其在肺部疾病诊断和鉴别诊断、指导治疗中的价值尚无大规模的数据总结。我们对2005年1月~2010年12月本院860例支气管肺泡灌洗液常规细胞形态学检查结果进行统计分析, 评价其临床应用价值。

材料和方法
一、材料

标本收集自2005年1月~2010年12月长海医院门诊和住院支气管肺泡灌洗液常规检查患者共860例, 男531例, 女329例, 年龄6~83岁, 平均年龄52.5岁。

二、方法

1. 标本采集

参考《支气管肺泡灌洗液细胞学检测技术规范(草案)》[1], 采集BALF, 将支气管镜前端嵌入病变段或亚段支气管开口处, 经支气管镜吸引孔注入生理盐水, 每次10~20 mL后随即负压吸引, BALF均在刷检及活检之前进行, 以避免血液的污染。标本充分混匀后, 用10 mL塑料离心管留取BALF 5~10 mL送检。

2. 制片

将留取的标本500 g离心5 min, 弃上清液吸取沉淀物制片, 采用改良的推片法[2]制6张涂片, 其中无尾厚片、有尾厚片、有尾薄片各2张。

3. 染色

常规细胞形态学检查采用改良的瑞吉染色方法[3]。由原来瑞特染色10~15 min缩短至40~60 s。其方法是涂片滴加瑞吉染液2~3滴, 覆盖涂片, 置10~20 s, 再加缓冲液3~4滴, 混匀, 置30~40 s, 流水冲洗, 晾干待检。

4. 细胞分类计数和异常成份观察

由经验丰富的细胞形态学检验人员在普通光学显微镜下进行单核/巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等分类以及细胞形态、异常成份观察, 必要时涂片行过碘酸-雪夫(PAS)、含铁血黄素染色等。

结果
一、常见细胞组分比例异常检出率高

常规细胞分类计数, 中性粒细胞比例> 2%者764例, 占总例数的88.8%, 其中> 20%者406例, 占总例数的47.2%, 多见于慢性支气管炎、致纤维化肺泡炎等; 淋巴细胞比例> 12%者234例, 占总例数的27.2%, 其中> 20%者135例, 占总例数的15.7%, 多见于过敏性肺炎、肺结节病等; 嗜酸性粒细胞比例> 1%者64例, 占总例数的7.4%, 其中32例> 10%, 占总例数的3.2%, 多见于支气管哮喘、嗜酸性粒细胞增高性肺疾病等。见图1。部分标本可见中性粒细胞和淋巴细胞同时明显升高, 多以中性粒细胞升高为主, 以肺部肿瘤和肺部炎症性疾病多见。

图1 860例临床送检BALF标本细胞组分比例升高分布情况(注:N:中性粒细胞; L:淋巴细胞; E:嗜酸性粒细胞; ■高于参考上限; □明显升高; 高于参考上限指N> 2%、L> 12%、E> 1%; 明显升高定义为N> 20%、L> 20%、E> 10%)

二、异常成分检出率高

860例标本中查见异常成份的有117例, 占总例数的13.6%。其中查见癌细胞16例、核异质细胞(异型细胞)40例、可疑癌细胞3例, 经随访40例查见核异质细胞患者中有9例最终诊断为恶性肿瘤, 查见可疑癌细胞的3例患者均被确诊恶性肿瘤; 查见真菌14例; 查见卡氏肺孢子虫3例; 查见噬菌细胞2例; PAS染色阳性标本33例; 含铁血黄素染色阳性标本6例。见图2。提示BALF查恶性肿瘤细胞、PAS染色等检出阳性标本数较多, 对临床相关肿瘤和肺泡蛋白沉积症等疾病的辅助诊断具有重要价值。

图2 117例查见异常成分BALF标本例数分布情况(注:柱形图上数字提示各组例数; A 癌细胞; B 核异质细胞; C 可疑癌细胞; D 噬菌细胞; E 真菌; F 卡氏肺孢子虫; G PAS阳性; H 含铁血黄素阳性)

三、860例标本中未见异常的(单核/巨噬细胞≥ 85%且未见其他异常成分)仅46份, 占总例数5.3%。
讨论

BALF标本通过肺段、亚肺段灌洗术取得, 它能收集到下呼吸道表面覆盖的细胞、蛋白质以及纤维支气管镜所不能探及的细胞学标本。正常人BALF细胞总数不同文献报道差别较大, 总的来说约在9~260× 106/mL, 其中单核/巨噬细胞> 85%、淋巴细胞< 12%、中性粒细胞< 2%、嗜酸性粒细胞< 1% [1, 4, 5]。病理情况下, BALF细胞组分会发生明显改变, 同时可能会出现其他异常成分, 如恶性肿瘤细胞、细菌和真菌、噬菌细胞等。因此, BALF能够为肺部病变性质、炎症过程及疾病活动性等提供重要的参考信息, 近年来在国内外已普遍应用于呼吸系统疾病的诊断、预后和疗效观察[6]。我们回顾了本院近5年的BALF常规检查结果, 分析本实验室利用常规细胞形态学对不同疾病的检出情况, 初步评价其对临床诊断、治疗的贡献。

我们统计发现, 860例BALF标本中仅5.3%常规细胞形态学检查未见异常, 表明临床支气管镜检查和肺泡灌洗病例选择标准严格, 本实验室异常检出率较高, 能够为临床多种疾病的诊断、治疗和预后分析提供有价值的参考信息。(1)常见细胞组分比例异常的检出比例最高, 占送检标本的主要部分。BALF常见细胞组分包括中性粒细胞、淋巴细胞、单核/巨噬细胞和嗜酸性粒细胞。细胞总数和各组分比例改变可提示多种肺部疾病:巨噬细胞百分比在致纤维化肺泡炎、过敏性肺泡炎和结节病中与健康对照组相比均明显偏低; 淋巴细胞在结节病和过敏性肺泡炎、肺部肿瘤中比例升高; 中性粒细胞百分比在肺部炎症、囊性纤维化中明显升高[5, 7]。而BALF查见嗜酸性粒细胞显著升高则可以为临床嗜酸性粒细胞相关肺部疾病提供可靠的诊断和鉴别诊断依据, 并能够为部分少见疾病的治疗提供指导, 减少临床误诊和误治, 具有重要的临床意义[8]; (2)BALF检出异常成分可提示诊断, 甚至成为最早的诊断依据。860例标本中, 查见癌细胞和查见核异质细胞(异型细胞)、可疑癌细胞后经随访证实为恶性肿瘤的标本共28例, 占总例数的3.3%, 远高于其他研究者报道的0.86%[5], 表明本实验室BALF恶性细胞检出能力较强。当然这个比例仅为本院送检标本的恶性细胞检出率, 并不能提示实际的疾病发病率。由于支气管肺泡灌洗可获得纤维支气管镜所不能探及的细胞学标本, 其对超出支气管镜可视范围的周边型肺癌具有重要的诊断价值, 可以辅助提高肺癌检出阳性率。有文献表明, BALF细胞学检查对于不同组织类型肺癌的诊断优于痰检和刷检[9]; BALF细胞学检查对周围型肺癌, 尤其对X线胸片表现为弥散型肺癌具有较好的诊断价值, 值得推广应用[10]。标本中其他异常成份的检出也可以为某些特殊疾病提供重要的诊断依据, 如检出细菌、真菌、噬菌细胞以及卡氏肺孢子虫、肺吸虫等可直接诊断相应微生物或寄生虫感染[11]。涂片特殊染色对于某些少见疾病的临床诊断及治疗监测也有非常重要的价值, 是一种简便有效的方法, 如查见含铁血黄素可辅助诊断特发性肺含铁血黄素沉积病、PAS阳性可辅助诊断肺泡蛋白沉积症等, 应引起临床医生和检验人员的高度重视。

因此, BALF常规细胞形态学检查, 临床应用价值较大, 值得深入开展, 医院检验科室应着力提高标本的异常检出率, 我们的体会是要重点把握:(1)优化标本的采集、制片及染色方法。标本必须新鲜, 采集后30min内送检; 在细胞形态学检查的制片过程中, 我们将涂抹法改为推片法, 对于有核细胞计数低于200× 106/L的标本采用二步离心法[12]浓集细胞; 涂片染色采用改良的瑞吉染色方法, 该方法简便、快速, 细胞着色均匀, 结构清晰, 容易辨认鉴定细胞性质, 为检验人员所熟悉; (2)注重检验人员细胞形态学能力培养, 要求必须采用二步法观察涂片:先用低倍镜扫描全片, 观察是否存在可疑细胞, 每例标本需观察2~3份涂片。低倍镜扫描全片后, 再用油镜作细胞分类和鉴定细胞性质。此外, 有条件的情况下, 在BALF常规细胞形态学检查的同时, 也应进行淋巴细胞亚群以及其他免疫学、分子生物学相关指标检测[13], 以尽可能获取全面的疾病信息, 辅助临床诊断、治疗和预后分析。值得注意的是, 在分析BALF细胞组分比例变化时应充分考虑吸烟因素的干扰, 因为吸烟者由于存在肺气肿等因素导致灌洗液回收不良, 其灌洗液细胞组分比例与不吸烟者相比差异较大[5]。另外, 对于不同疾病, BALF成分变化与疾病临床特征、其他辅助诊断措施之间的确切关联仍然需要进一步的深入探讨。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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