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马红霞, 曹伟娟, 张雪梅, 杨蔺. 罗氏E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂再利用结果分析. 2012, 27(3): 206-209
MA Hongxia, CAO Weijuan, ZHANG Xuemei, YANG Lin. Roche E170 automatic electrochemiluminescence immunoassay remaining reagent recycle used result analysis. Labratory Medicine, 2012, 27(3): 206-209  
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罗氏E170全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂再利用结果分析
马红霞1, 曹伟娟2, 张雪梅1, 杨蔺1
1. 同济大学附属东方医院,上海 200120
2. 河南省肿瘤医院,河南 郑州 450003

作者简介：马红霞,女,1975年生,硕士,主管技师,主要从事临床检验工作。

摘要

目的 探讨Roche E170 全自动电化学发光免疫分析仪剩余试剂合并再利用的可行性。方法 采用合并剩余试剂分别检测特定血清中5个肿瘤标记物[血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199、CA153、CA125)]的含量,并进行精密度、准确性及回收率分析;与新试剂分别检测同一组标本中5个项目低、中、高3个浓度的含量,并做均值比较及相关性分析。结果 合并剩余试剂检测AFP、CEA、CA199、CA153、CA125 5个项目低、高浓度血清批内、批间变异系数( CV)均符合相关标准。质控血清准确性在允许范围内,回收率均值在90%~110%之间。用合并剩余试剂与新试剂分别检测5个项目低、中、高3个浓度,各组均值比较差异无统计学意义( P>0.05)。结论 Roche E170免疫分析仪可以对剩余试剂合并再利用,能够保证检测质量,降低检测成本。

关键词: 剩余试剂再利用; 全自动电化学发光免疫分析仪; 结果分析
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)03-0206-04
Roche E170 automatic electrochemiluminescence immunoassay remaining reagent recycle used result analysis
MA Hongxia1, CAO Weijuan2, ZHANG Xuemei1, YANG Lin1
1. Shanghai East Hospital,Tongji University, Shanghai 200120, China
2.Henan Province Tumor Hospital, Henan Zhengzhou 450003, China
Abstract

Objective To investigate the feasibility of recycle of remaining reagent in Roche E170 automatic electrochemiluminescence immunoassay.Methods Alpha fetoprotein(AFP), carcino-embryonic antigen(CEA), carbohydrate antigen(CA)199, CA153 and CA125 in specific sera were detected by remaining reagents and original reagents. The precision, accuracy and recovery rate of remaining reagents were analyzed. The mean values and correlation of the 5 items in 3 different concentrations of sera (low, middle and high levels) were compared by 2 kinds of reagents.Results The within-run and between-run coefficients of variation ( CV) of the 5 items measured by remaining reagents in low and high levels of sera met the related standard. The accuracy was within the allowance range. The recovery rate was variable from 90% to 110%. Comparing the results of the original reagents with the remaining reagents, there was no statistical significance of 3 different levels of the 5 items ( P>0.5).Conclusions The remaining reagent can be recycled by Roche E170 automatic electrochemiluminescence immunoassay, which also can ensure the quality of measurement and the reduction of the cost.

Keyword: Remaining reagent recycle analysis; Automatic electrochemiluminescence immunoassay; Result analysis
引言

电化学发光免疫测定(electrochemilumines-cence immunoassay, ECLIA)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术。其具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染等优点, 是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者, 是免疫分析重要的发展方向[1, 2]。但试剂为原装进口小包装、固定人份数、条码自动记录、成本较高, 使瓶中剩余试剂不能再利用, 造成浪费。本研究意在探讨将剩余试剂按批号集中合并后手工输入新条码或在另一仪器模块上再进行检测, 并对其可行性进行评价。达到充分利用医学资源, 在保证检验质量的前提下降低检测成本的目的。

材料和方法
一、材料

1. 标本来源 同济大学附属东方医院及河南省肿瘤医院检验科收集的患者血清, 常规检测肿瘤标志物后, 分为低、中、高3个浓度的标本, 少量分装, -20 ℃冷冻保存。精密度测试用常规检测肿瘤标志物后患者新鲜混合血清。

2. 定标物和质控物 定标物为罗氏原装配套, 质控物为上海市临床检验中心提供, 小量分装放于-20 ℃冰箱保存。

3. 仪器 瑞士Roche公司E170全自动电化学发光免疫分析仪。

4. 试剂 (1)新试剂为E170原装配套试剂; (2)合并剩余试剂为同一项目、同一批号经仪器扫描为0测试, 将瓶中剩余量的试剂每34瓶合并为1瓶。轻轻充分混匀, 将气泡小心吸出。所有合并试剂保证在有效期内使用。

二、方法

1. 仪器质控检测

按设备使用要求, 对E170电化学发光免疫分析系统进行常规质控。用室内质控合格后的设备进行以下试验。

2. 合并试剂精密度测试

参考美国临床实验室标准化协会(CLSI) EP15-A2文件进行重复性试验, 取生产试剂商提供的血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199、CA153、CA125)精密度附近的高、低2个浓度的混合患者血清, 每天分3次测定标本, 各批实验至少间隔2 h, 每批测定高、低2个浓度标本, 每个标本重复测定3次, 连续测定5 d, 计算批内及批间均值、变异系数(CV)值。

3. 合并试剂准确性测试

合并剩余试剂分别检测AFP、CEA、CA199、CA153、CA125 高、低浓度质控物各20次, 检查分析结果是否在允许范围内, 并对结果进行比较及相关性分析。

4. 标本测定

按E170标准操作规程, 分别用新试剂和合并试剂对低、中、高3个浓度的标本各20例进行AFP、CEA、CA199、CA153、CA125测定。

5. 回收试验

分别在500 μ L正常血清内加入AFP、CEA、CA199、CA153、CA125低值、高值质控液50 μ L, 制成2个待测标本进行回收试验, 每个实验重复检测3次, 取平均值。

三、统计学方法

采用SPSS 15.0统计学软件处理数据, 数据资料以 x-± s表示, 两标本均数的比较用t检验, P< 0.05表示差异有统计学意义; 新试剂和合并试剂平行结果间的比较做相关性分析。

结果
一、合并剩余试剂精密度检测结果

合并试剂检测混合患者血清AFP、CEA、CA199、CA153、CA125批内、批间CV见表1。

表1 合并试剂检测混合患者血清AFP、CEA、CA199、CA153、CA125批内、批间CV(%)
二、 合并剩余试剂准确性检测结果

合并试剂测得AFP、CEA、CA199、CA153、CA125 低、高浓度质控物各20次结果与靶值结果比较。AFP、CEA、CA199、CA125 20次结果均在质控允许范围内, CA153有19次结果在质控允许范围内, 有一次失控。经失控原因分析, 仪器重新定标并换新质控品用合并试剂重新测定, 结果在质控允许范围内。

三、新试剂与合并剩余试剂检测标本结果比较

AFP、CEA、CA199、CA153、CA125低、中、高3个浓度标本各20例, 结果见表2。

表2 20例标本新试剂与合并剩余试剂检测血清AFP、CEA、CA199、CA153、CA125结果比较( x-± s)
四、回收试验

分别在500 μ L正常血清内加入AFP、CEA、CA199、CA153、CA125低值、高值质控液50 μ L, 制成2个待测标本进行回收试验, 每个实验重复检测3次, 取平均值, 见表3。

表3 回收试验结果(%)
讨论

E170试剂包装量小, 每瓶试剂条码记录为100测试, 当检测了100个标本后, 既使试剂瓶还有剩余量, 仪器也不会再进行检测, 实践观察每瓶试剂剩余量> 25 %弃之不用, 造成较大浪费。

E170免疫分析仪检测系统克服了放射免疫分析试剂有效期短和辐射污染、酶联免疫吸附试验易受温度、酸碱度变化的影响及其前带和倒钩现象, 以及化学发光免疫分析检测稳定性欠佳的缺点和问题。国外有文献[3]对其综合性能进行了分析后给予了较好评价。

E170免疫分析仪检测系统是采用ECLIA的原理, 是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应, 包括了电化学和化学发光2个部分。在电化学免疫分析系统中, 磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原), 用三联吡啶钌标记抗体(抗原), 在反应体系内待测标本与相应的抗体发生免疫反应, 形成磁性微粒包被抗体— 待测抗原— 三联吡啶钌标记抗体复合物, 这时将上述复合物引入流动室, 同时引入TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时, 被安装在电极下面的电磁铁吸引住, 而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压, 启动电化学发光反应, 使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移, 产生电化学发光。光信号由安装在流动室上方的光信号检测器检测, 光的强度与待测抗原的浓度呈正比[4]。因此, 残量混合试剂适当保存, 包被抗原抗体性质未发生改变回收利用是可行的。

本研究结果显示, 回收的剩余试剂检测血清AFP、CEA、CA199、CA125、CA153等肿瘤标志物重复性、准确性、回收率等实验性能指标均符合相关实验要求, 说明回收试剂性能稳定, 质量可靠。因此, 只要注意保存条件, 加以回收利用完全可行。但是, 同一条码不能在同一模块仪器上重复使用。因此, 手工输入另一条码号或把合并试剂放在另一通用试剂模块中使用即可。

在工作中应注意每瓶试剂未开封可稳定到标明的保质期。开封后2~8 ℃可稳定12 周, 放在E170免疫分析仪上4 周, 如置20~25 ℃约为20 h。因此, 检测完毕后, 试剂尽量尽快放入4 ℃冰箱保存, 以防止瓶中试剂包被的单克隆抗体活性降低捕捉抗原能力下降。试剂瓶应盖紧, 防止试剂水分蒸发, 造成变质。因此, 剩余试剂在规定时间内应尽快回收利用, 不能超过4 周, 若混匀后的试剂发现有问题则不能用。试剂残量回收再利用操作过程中应设置标本质控进行严密监控, 如发现质控失控等情况, 应查明原因直至质控通过后方可进行标本检测。实践证明E170试剂残量回收再利用操作简便、检测结果可靠, 可有效降低检测成本, 提高经济效益。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 谭浩. 电化学发光免疫分析系统E170的应用评价[J]. 实用预防医学, 2011, 18(3): 527-528. [本文引用:1]
[2] 张忠英, 林永志, 叶辉铭, 等. 电化学发光免疫分析技术检测尿CK19片段的临床应用及其评价[J]. 中华检验医学杂志, 2005, 28(1): 50-53. [本文引用:1]
[3] Bieglmayer C, Chan DW, Sokoll L, et al. Multicentre performance evaluation of the E170 module for modular analytics[J]. Clin Chem Lab Med, 2004, 42(10): 1186-202. [本文引用:1]
[4] 王兰兰, 吴健民. 临床免疫学与检验[M]. 第4版. 北京: 人民卫生出版社, 2008: 117. [本文引用:1]