引用本文
王芳, 乐军, 彭荣. 胸水中脂阿拉伯甘露聚糖抗原检测对结核性胸膜炎的诊断价值. 2012, 27(3): 199-201
WANG Fang, YUE Jun, PENG Rong. Diagnostic significance of lipoarabinomannan antigen in pleural fluid for tuberculous pleurisy. Labratory Medicine, 2012, 27(3): 199-201  
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胸水中脂阿拉伯甘露聚糖抗原检测对结核性胸膜炎的诊断价值
王芳, 乐军, 彭荣
同济大学附属上海市肺科医院检验科,上海 200433

作者简介：王芳,女,1976年生,主管技师,主要从事临床检验工作。

摘要

目的 探讨胸水中的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)抗原对结核性胸膜炎的诊断价值,以获取一种诊断结核性胸膜炎的辅助指标。方法 收集胸水标本共96例,其中结核性胸膜炎46例,非结核性胸膜炎50例,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胸水中的LAM抗原。结果 结核性胸膜炎胸水中LAM抗原阳性率为54%,非结核性胸膜炎胸水中LAM抗原阳性率为22%,二者差异有统计学意义( P<0.05)。结论 胸水中LAM抗原检测可作为结核性胸膜炎诊断的一项新指标。

关键词: 脂阿拉伯甘露聚糖; 胸水; 结核性胸膜炎
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)03-0199-03
Diagnostic significance of lipoarabinomannan antigen in pleural fluid for tuberculous pleurisy
WANG Fang, YUE Jun, PENG Rong
Department of Clinical Laboratory, Shanghai Pulmonary Hospital, Tongji University, Shanghai 200433, China
Abstract

Objective To investigate whether the determination of lipoarabinomannan (LAM) antigen in pleural fluid may be used as an indicator for the diagnosis of tuberculous pleurisy.Methods Double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was performed to detect LAM antigen in 96 pleural fluid samples (46 patients with tuberculous pleurisy and 50 patients with non-tuberculous pleurisy).Results The positive rate of LAM antigen in pleural fluid with tuberculous pleurisy group was 54%, and the positive rate in pleural fluid with non-tuberculous pleurisy was 22%. There was a statistical difference between them( P<0.05).Conclusions LAM antigen could be used as a new indicator for the diagnosis of tuberculous pleurisy.

Keyword: Lipoarabinomannan; Pleural fluid; Tuberculous pleurisy
引言

每年全球有50万的胸腔积液新发病例[1], 在中国结核性胸膜炎是引起胸腔积液最常见的原因。胸水病原学检查包括胸水涂片找抗酸杆菌和胸水结核分枝杆菌培养, 一般阳性报告率仅为5%, 不能满足临床需要。胸膜活检虽达到80%的检出率[2], 但有创伤性, 受到胸水量的影响。比较理想的生化指标包括γ -干扰素(IFN-γ )和腺苷酸脱氨酶(ADA), IFN-γ 费用高[3], 而ADA在结核高发区特异性不高[4]。脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan, LAM)是结核分枝杆菌细胞壁的重要组成部分, 血清中LAM抗体的检测对肺结核的诊断价值早就被公认[5, 6, 7]。近年来, 有国外学者探寻用酶联免疫吸附试验(ELISA)在尿液[8]、痰液[9]、脑脊液[10]中检测LAM抗原诊断结核病, 但目前国内未见这方面的报道。本研究采用美国Clearview TB ELISA试剂盒(货号:M913)检测了96例胸水中的LAM抗原, 评价其对结核性胸膜炎的诊断价值。

材料和方法
一、研究对象

1. 标本来源

所有标本来自上海市肺科医院2010年1至6月收集的胸水。

2. 一般资料

结核性胸膜炎患者46例, 其中男33例、女13例, 年龄35~68岁, 平均(49± 6)岁; 非结核性胸膜炎患者50例, 包括肺癌36例、脓胸6例、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)5例、间质性肺炎3例, 其中男32例、女18例, 年龄42~75岁, 平均(52± 7)岁。

3. 诊断标准

(1)有发热等结核中毒症状; (2)胸水以淋巴细胞为主的渗出液; (3)肺部有结核病灶; (4)抗结核治疗症状好转, 胸水吸收快; (5)胸水涂片或结核分枝杆菌培养阳性可确诊。具备(1)~(4)或(5)者进入观察组, 否则进入对照组。

二、方法

1. 分组方法

患者按双盲法(经治医生和患者)进行LAM 抗原的检测。每位患者于治疗结束后依诊断标准决定其进入观察组或对照组。

2. 标本采集

临床医生严格按照无菌操作规程, 胸腔穿刺采集胸水, 置入肝素真空采血管, 及时送至检验科。待测胸水经2 000× g(湘仪L550)离心 15 min后, 取上清置-20 ℃冻存备用。

3. 试剂盒

试验采用美国Clearview TB ELISA试剂盒(货号:M913)。

4. 双抗体夹心ELISA

分别设空白孔、待测标本孔。在酶标包被板上待测标本孔中加入标本50 μ L, 加在酶标板孔的底部, 不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37 ℃温育30 min。洗涤:小心揭掉封板膜, 弃去液体, 甩干, 每孔加满洗涤液, 静置30 s后弃去, 如此重复5 次, 拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50 μ L, 空白孔除外, 再温育洗涤1次。显色:每孔先加入显色剂A液50 μ L, 再加入显色剂B液50 μ L, 轻轻震荡混匀, 37 ℃避光显色15 min。终止:每孔加终止液50 μ L, 终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:空白孔作为对照调零, 450 nm 波长依序测量各孔的吸光度(A)值。测定应在加终止液后15 min 内进行。

三、统计学方法

采用SPSS 10.0统计软件包中的t检验和χ 2检验进行统计分析, P< 0.05为差异有统计学意义。

结果

结核性胸膜炎组A值为0.8± 0.2, 高于非结核性胸膜炎组(0.3± 0.2, P< 0.01)。将非结核性胸膜炎组的平均A值的0.8± 2s作为阳性判断界值, 结核性胸膜炎组LAM阳性25例, 阳性率为54%; 非结核性胸膜炎组LAM阳性11例, 阳性率为22%, 两者差异有统计学意义(P< 0.05)。用此方法检测胸水中LAM抗原对结核性胸膜炎诊断的敏感性为54%(25/46), 特异性为78%(39/50)。

讨论

胸腔积液是临床常见体征, 感染性疾病、结缔组织病、变态反应性疾病及恶性肿瘤均可出现胸腔积液, 而常规的实验室方法用于鉴别诊断胸腔积液时存在各种缺陷, 不能满足要求, 因此筛选新的、效果好的、且能够方便应用于临床的鉴别诊断胸腔积液性质的指标, 具有较大的实用意义。检测结核分枝杆菌特异性抗原更有可能发展成为结核病早期、快速、敏感、特异, 并且适宜在发展中国家推广应用的新型诊断指标, 因而也越来越受到人们的重视。

近十几年来人们关注到一类细菌胞壁糖脂抗原— — LAM。LAM是结核分枝杆菌细胞壁的主要成分, 在结核分枝杆菌与宿主的相互作用中起着关键作用并影响细胞、体液免疫的发生与发展。目前为止, 至少有2类LAM 即manLAM 和araLAM。前者来自结核分枝杆菌H37Rv Erdman株, 而后者来自结核分枝杆菌H37Ra, 前者较后者多了甘露糖帽化结构。LAM的生物合成过程是:甘露糖基连接到磷脂酰肌醇形成2~6个甘露糖基以及20个甘露糖基和2~3个阿拉伯糖基, 甘露糖基和阿拉伯糖基进一步阿拉伯糖基化形成LAM。此过程虽然很明确, 但机制尚不清楚。LAM可通过对巨噬细胞、树突状细胞、T细胞的相互作用介导细胞免疫, LAM引起的体液免疫则是由于LAM有9个单克隆抗体结合表位, 故其为强免疫原, 且其特异性强, 能有效刺激机体产生IgG型的抗LAM抗体。

国内外均有学者以LAM 作抗原用ELISA检测活动性结核病患者血清的抗LAM抗体, 并取得了较为满意的效果。关于检测血清和胸水中LAM IgG来诊断结核病和结核性胸膜炎的报道, 国内外都很多, 血清标本检测LAM IgG的特异性为89%~95%, 敏感性为55.5%~87.2%[11], 胸水标本检测诊断结核性胸水的特异性为93.8%, 敏感性为91.8%[12], 但LAM抗原检测的临床应用国内未见有报道。通过本研究, 我们认为LAM抗原检测方法敏感性高、特异性强、操作简便, 可作为结核性胸膜炎诊断的一项辅助指标, 适用于基层结核病实验室应用。

LAM是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分, 是属特异性抗原, 具有较强的免疫原性, 因LAM抗原的检测, 对不同的分枝杆菌特异性不同, 病情不同, 其结果差异较大, 是一项有用的辅助诊断手段, 对活动性肺结核, 尤其对结核性胸膜炎诊断有较好的价值, 可作为结核性胸膜炎诊断的一项新指标。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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