引用本文
宋丽君, 陈春丽, 罗淑桂. HPV基因分型检测与宫颈病变的相关性研究. 2012, 27(3): 163-166
SONG Lijun, CHEN Chunli, LUO Shugui. The correlation investigation of the genotyping of human papillomavirus with cervical lesion. Labratory Medicine, 2012, 27(3): 163-166  
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HPV基因分型检测与宫颈病变的相关性研究
宋丽君, 陈春丽, 罗淑桂
广东医学院附属医院,广东 湛江 524001

作者简介：宋丽君,女,1975年生,硕士,副主任技师,主要从事临床检验工作。

基金:广东医学院附属医院青年基金资助项目（30101q010015）
摘要

目的 了解粤西地区妇女21 种人乳头瘤病毒(HPV)感染状况,探讨感染HPV不同亚型与不同程度宫颈病变的关系。方法 采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术 (HybriMax)对5 556例患者进行 HPV分型检测,677例经活检证实病变程度。结果 5 556例患者中,HPV阳性者901例(16.2%)。HPV亚型感染率前5位的是HPV52、16、58、53、11。各年龄段患者HPV检出率差异有统计学意义( P<0.05),≥51岁年龄段患者HPV检出率最高。41~50岁年龄段患者感染高危型HPV(HR-HPV)的构成比最高( P<0.05)。HPV感染率随宫颈病变严重程度增加而增加( P<0.05)。高度鳞状上皮内病变(HSIL)中HPV多型感染率最高( P<0.05)。HPV16、58、33型的检出率随宫颈病变的严重程度增加而增加( P<0.05),HSIL组与低度鳞状上皮内病变(LSIL)组相比,比值比( OR)分别为3.391(2.0385.643)、2.409(1.1884.888)、2.362(1.0815.161)。结论 本地区人群流行的HPV亚型为HPV52、16、58、53、11。HPV分型检测对宫颈病变的早期诊断与预后有重要意义。HPV16、58、33型致癌性较强,其中感染16亚型风险最大。

关键词: 人乳头瘤病毒; 宫颈病变; 基因亚型
中图分类号:R373.9 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2012)03-0163-04
The correlation investigation of the genotyping of human papillomavirus with cervical lesion
SONG Lijun, CHEN Chunli, LUO Shugui
Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Guangdong Zhanjiang 524001, China
Abstract

Objective To study the status of 21 genotypes of human papillomavirus (HPV) infection in women of western Guangdong and the relationship between HPV genotypes and different grade cervical lesion.Methods A total of 5 556 cases were detected for HPV DNA types by DNA flow through hybridization and gene chip (HybriMax), and cervical biopsies were used for pathological diagnosis in 677 cases.Results Among 5 556 cases, 901 cases were HPV positive (16.2%). The HPV subtype infection rate in top 5 were HPV 52, 16, 58,53 and 11 in turn.There were statistical significance among the HPV positive rates in different age groups( P<0.05).Old women (≥51 years old) showed the highest HPV infection rate. The constituent ratio of high risk HPV(HR-HPV) types was the highest in 41-50 years old group( P<0.05). The detection rate of HPV increased with the severity degree of cervical lesion( P<0.05).Multiple HPV type infection rate was the highest in high grade squamous intraepithelial lesion (HSIL)group( P<0.05). The detection rates of HPV16, 58 and 33 increased with the severity degree of cervical lesion( P<0.05). Compared with low grade squamous intraepithelial lesion (LSIL )group, the odds ratios( OR)of HSIL group were 3.391(2.038-5.643),2.409(1.188-4.888) and 2.362(1.081-5.161)respectively.Conclusions The popular HPV subtypes in western Guangdong are HPV 52, 16, 58,53 and 11. The detection of HPV genotypes is of great significance for early diagnosis and prognosis of cervical lesion. HPV 16, 58 and 33 are more oncogenic than other HPV types. HPV16 is the most oncogenic genotype.

Keyword: Human papillomavirus; Cervical lesion; Gene subtype
引言

分子生物学研究结果表明, 90%以上宫颈癌伴有人乳头瘤病毒(HPV)感染[1]。不同地区 HPV的人群感染率不同, 所携带的型别不同, 与宫颈癌及癌前病变相关的型别不尽相同[2, 3]。我们采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术 (HybriMax)对粤西地区患者进行 HPV分型检测, 异常者作病理学诊断, 以期了解该地区妇女21 种HPV感染状况, 探讨感染HPV不同亚型与宫颈病变的关系。

材料和方法
一、材料

收集2008年12月至2010年6月到广东医学院附属医院妇产科进行宫颈病变筛查的病例。5 556例妇女自愿接受HPV分型检测, 年龄17~79岁, 平均(37.88± 8.39)岁。其中因临床检查异常或细胞学异常或HPV分型检测异常进行了阴道镜下活检并资料完整的病例有677例。根据细胞病理学标准诊断有无宫颈病变及病变程度, 并进行分组:(1)高度鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)[包括宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅱ 、Ⅲ 及宫颈原位癌]145例; (2)低度鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)(CINⅠ )307例; (3)宫颈炎组225例。

二、方法

1. 仪器与试剂

梯度聚合酶链反应(PCR)仪(eppendorf 公司, 德国), HybriMax 医用核酸分子快速杂交仪(凯普生物化学有限公司, 香港)。DNA提取试剂、HPV核酸扩增分型检测试剂、HPV分型基因芯片薄膜(凯普生物化学有限公司, 香港)。

2. HPV分型检测方法

用特制毛刷深入宫颈口内2~3 cm, 顺时针旋转2~3周, 获足够宫颈脱落细胞, 采用HybriMax检测21种HPV亚型。检测步骤包括:(1)样本DNA提取。采用分离法; (2)基因扩增。加入已提取DNA样本1 μ L, 反应总体系25 μ L, 设置阴、阳性对照组后进行基因扩增, 95 ℃ 9 min后进入循环, 95 ℃ 20 s, 55 ℃ 30 s, 72 ℃ 30 s, 共40个循环, 最后72 ℃ 5 min; (3)杂交。将产物95 ℃ 5 min变性, 冰浴2 min以上, 使样本分子导流穿过固定有DNA探针的低密度基因芯片薄膜后进行快速杂交。显色后观察结果。

3. 诊断标准

薄膜上质控点Biotin和IC点显色, 提示检测过程正常。根据芯片薄膜HPV亚型分布的相应着色点判断。高危型HPV(HR-HPV)包括HPV16、18、52、58、31、33、35、39、45、51、53、56、59、66、68亚型; 低危型HPV(LR-HPV)包括6、11、42、43、44、CP8304亚型。

三、统计学方法

应用SPSS 11.5统计软件进行统计分析, HPV检出率, HR-HPV、LR-HPV的构成比, HPV单亚型、多亚型的构成比差异采用χ 2检验。HPV亚型感染与HSIL、LSIL的关系用Logistic 回归分析。P< 0.05为差异有统计学意义。

结果
一 、一般检测情况

1.HPV的基因型分布

受检5 556例样本中, HPV阳性者901例, HPV感染率16.2%。HPV阳性者中, 单亚型感染694例, 占12.5%; 多亚型感染207例, 占3.7%。将多亚型拆分至相应亚型, HR-HPV阳性者831例, 占15.0%, LR-HPV阳性者168例, 占3.0%。受检样本中, 21种HPV亚型均被检出, 感染率居前5位的是HPV52(4.1%, 226例)、16(3.8%, 213例)、58(1.8%, 97例)、53(1.3%, 73例)、11(1.1%, 60例), 其他亚型按感染率从高到低依次为CP8304、18、68、33、39、31、6、44、66、59、42、51、45、35、56、43亚型。

2.不同年龄段患者感染HPV情况

将患者根据不同年龄分组, 分为≤ 30岁、31岁~、41岁~、≥ 51岁4个年龄段。各年龄段HPV检出率分别是17.3%、15.0%、15.8%、24.7%。各年龄段患者HPV检出率相比较, 差异有统计学意义(χ 2=19.7, P< 0.05), ≥ 51岁年龄段患者HPV检出率最高。对混合感染进行了重复计数, 4个年龄段患者感染HR-HPV、LR-HPV的构成比差异有统计学意义(χ 2=9.8, P< 0.05)。41~50岁年龄段患者感染HR-HPV的构成比最高(6.7%, 263例)。4个年龄段患者感染HPV单亚型、多亚型的构成比差异无统计学意义(χ 2=7.3, P> 0.05)。各年龄段患者HPV、HR-HPV、 LR-HPV感染情况及多亚型HPV感染情况见表1。

表1 各年龄组患者HPV感染情况
二、HPV感染与宫颈病变程度的相关情况

1. 不同程度宫颈病变HPV亚型感染情况

677例宫颈病变中, 有490例感染HPV, 感染率为72.4%(490/677)。在宫颈炎组为60%(135/225), LSIL组为72%(221/307), HSIL组为92.5%(134/145), 不同宫颈病变组HPV检出率不同(χ 2=46.4, P< 0.05), HPV感染率随宫颈病变严重程度增加而增加。490例HPV感染患者中, 415例单亚型感染, 75例多亚型感染, HPV多亚型感染在宫颈炎、LSIL、HSIL组的检出率分别是8.9%(12/135)、14.0%(31/221)、23.9%(32/134), 差异有统计学意义(χ 2=6.6, P< 0.05)。HSIL中HPV多亚型感染率最高。见表2。

表2 不同宫颈病变组HPV亚型感染情况

3.不同程度宫颈病变感染HPV亚型情况

宫颈病变分级不同, 感染HPV亚型有所不同, HSIL组感染HPV亚型居前5位的依次为16、52、58、33、18亚型; LSIL组感染HPV亚型居前5位的依次为52、16、58、33、18/68亚型; 宫颈炎组为52、16、53、18、68/39亚型, 见表3。HPV16、58、33型在HSIL组中的检出率分别为37.3%、14.9%、11.9%, 高于LSIL组与宫颈炎组。HPV16、58、33型的检出率随宫颈病变的严重程度增加而增加, 差异有统计学意义(χ 2=30.0、9.7、9.6, P=0.000、0.008、0.008), 与宫颈高度病变相关。其他亚型的检出率差异无统计学意义。用Logistic回归分析感染HPV16、58、33型与高度病变的相关程度(HSIL组与LSIL组相比), 回归系数分别为1.221、0.879、0.859; 比值比(OR)分别为3.391、2.409、2.362; 95%可信区间分别为2.0385.643、1.1884.888、1.0815.161(P=0.000、0.015、0.031)。HPV16、58、33型致癌性较强, 其中感染16型风险最大。

表3 不同宫颈病变组感染HPV主要亚型的分布
讨论

HPV基因型分布有地区差异, 与宫颈癌相关的型别也不尽相同。在我国, 北京地区主要以16、68、58亚型为主, 合肥地区以16、52、33亚型为主, 粤东地区、武汉地区和新疆南部维吾尔族女性主要以16和18亚型为主。一些沿海地区如台湾、香港、广东潮州地区 HPV感染主要基因型分布为52和 58, 山西地区、山东地区和浙江绍兴市区以 16、52、58亚型为主[2, 3, 4]。本研究结果显示, 受检5 556例样本中, 感染率居前5位的是HPV52、16、58、53、11亚型, 与国内报道的大部分区域基本相同[4]。HPV53、CP8304亚型是中国人特有的型别, 本研究中HPV53、CP8304亚型感染率分别居第4位、第6位, 阳性率较高。HPV52亚型感染比例高于16亚型, 这可能是粤西地区HPV感染的特点。目前正在开发的HPV 疫苗针对16和18亚型, 若要达到较好的预防效果, 需要针对不同地区的优势基因型, 并加以区别对待[5]。

本研究显示, 各年龄段患者HPV检出率分别是17.3%、15.0%、15.8%、24.7%, ≥ 51岁年龄段患者HPV检出率最高(P< 0.05), 提示应重视绝经后女性的 HPV筛查。本研究发现 HPV阳性率在其他育龄组差异不大, 但不同基因型在不同年龄组中的阳性率有所不同, > 40 岁女性, HR-HPV感染逐渐增多, 本研究中41~50岁年龄段患者感染HR-HPV的构成比最高(P< 0.05), 40岁以后HR-HPV的持续感染是宫颈癌的直接病因。本结果提示, 在研究人群中可能存在上述宫颈癌发生的高危因素, 应积极开展宫颈癌筛查项目, 包括HPV 分型检测及宫颈脱落细胞检查[6]。

HPV感染率随宫颈病变严重程度增加而增加, 随宫颈病变程度加重, HPV多亚型混合感染增加。HPV多亚型感染率在宫颈炎、LSIL、HSIL组的检出率分别为8.9%、14.0%、23.9%, 差异有统计学意义(P< 0.05)。由于HPV属于性传播疾病, 患者性伴侣越多, 多重感染的基因型就越多。本研究中HSIL HPV多亚型感染率最高, 说明多重感染可能促进宫颈癌的发生, 对多重感染HPV亚型的妇女更应加强宫颈癌的预防和监测。

宫颈病变分级不同, 感染HPV亚型有所不同, 在HSIL组感染HPV亚型居前5位的依次为16、52、58、33、18亚型; LSIL组感染HPV亚型居前5位的依次为52、16、58、33、18/68亚型; 宫颈炎组为52、16、53、18、68/39亚型。HPV16亚型在HSIL组占了较大比例, 超过52亚型比例。HPV16、58、33亚型的检出率随宫颈病变的严重程度增加而增加, 差异有统计学意义, 其他亚型的检出率差异无统计学意义。不同亚型HPV引起宫颈癌的危险性不同, 用Logistic回归分析感染HPV16、58、33亚型与高度病变的相关程度(HSIL组与LSIL组相比), OR值分别为3.391、2.409、2.362; HPV16、58、33亚型致癌性较强, 其中感染HPV16亚型是患HSIL风险最高的亚型。其他亚型的临床特征与预后, 还需扩大样本量, 继续随访、观察与分析。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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