放置时间及保存温度对幼儿末梢全血细胞计数的影响

引用本文

孙秋瑾, 王宇. 放置时间及保存温度对幼儿末梢全血细胞计数的影响. 2011, 26(5): 334-337
SUNQiujin, WANGYu. Theinfluenceofstoragetimeandpreservingtemperatureoninfantchildren'speripheralbloodcellcount. Labratory Medicine, 2011, 26(5): 334-337 复制到剪切板

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《检验医学》编辑部

放置时间及保存温度对幼儿末梢全血细胞计数的影响

孙秋瑾, 王宇

北京市朝阳区妇儿医院检验科,北京 100021

作者简介：孙秋瑾,女,1976年生,学士,主管技师,主要从事临床妇幼检验工作。

摘要

目的

探讨放置时间、保存温度对2~6岁幼儿末梢全血细胞计数结果的影响,以指导体检工作流程的合理安排。

方法

取40名幼儿末梢全血用乙二胺四乙酸三钾(EDTA-K₃)抗凝,分组标记后保存于不同温度中。应用ABX-Micros 60全自动血液分析仪,将分装标本分别在0.5、4、8和10 h测定。

结果

保存于室温和4 ℃冰箱冷藏环境下,随着放置时间的延长,白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞百分率(LY)均有逐渐上升的趋势;血小板(PLT)计数、中性粒细胞百分率(GRA)均有下降的趋势。标本于室温8 h 及4 ℃冷藏10 h以后检测结果与对照组比较,大多数指标差异均有统计学意义(P<0.05)。10 h时室温与4 ℃冷藏放置2组数据比较,大多数指标差异有统计学意义(P<0.05)。

结论

标本放置时间及保存温度对幼儿末梢全血细胞计数结果中的一些参数有明显影响,在4 h之内检测,室温与4 ℃冷藏2种环境对检测结果无明显影响;末梢血标本放置在4 ℃冷藏条件下10 h内完成检测还是可行的。

关键词: 末梢全血细胞计数; 放置时间; 保存温度; 幼儿

中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)05-0334-04

Theinfluenceofstoragetimeandpreservingtemperatureoninfantchildren'speripheralbloodcellcount

SUNQiujin, WANGYu

DepartmentofClinicalLaboratory,BeijingChaoyangMaternalandChildHospital,Beijing 100021,China

Abstract

Objective

To investigate the influence of storage time and preserving temperature on 2-6 years old infant children's peripheral blood cell count, and improve the process of health examination.

Methods

40 cases of infant children's peripheral blood specimens were anticoagulated by ethylenediamine tetraacetic acid-K₃(EDTA-K₃). The blood specimens were classified and stored in different temperatures after being labeled. The blood specimens were determined by ABX-Micros 60 at 0.5, 4,8 and 10 h respectively.

Results

The levels of white blood cell (WBC), red blood cell (RBC), mean platelet volume (MPV), platelet distribution width (PDW), lymphocyte% (LY) were increased, and platelet (PLT) and nentrophilicgranulocyte % (GRA) were decreased with prolonging storage time in room temperature and refrigerator 4 ℃. After 8 h in room temperature and 10 h in 4 ℃, most of the results had significant differences compared with the control group (P<0.05). There were significant differences between the results of 10 h in room temperature and in 4 ℃ with most of the results (P<0.05).

Conclusions

Storage time and preserving temperature have significant influence on the part results of infant children's peripheral blood cell count. The results are not different significantly between within 4 h in room temperature or 4 ℃ in refrigerator. The results would be acceptable, if the specimens are stored in refrigerator 4 ℃ within 10 h.

Keyword: Peripheral blood cell count; Storage time; Preserving temperature; Infant child

Show Figures

当幼儿需要做全血细胞计数检测时,由于抽取静脉血存在一定的难度,不易被幼儿家属接受,所以采用末梢血的方式来检测。为探讨放置时间及保存温度对幼儿末梢全血细胞计数各指标分析的影响,我们运用了ABX-Micros 60全自动血液分析仪,对此进行了试验观察。

材料和方法

一、对象

2~6岁健康幼儿40名(男22名,女18名)。

二、仪器与试剂

ABX-Micros 60全自动血液分析仪(每次检测所需标本量为10 μL)。原装配套ABX-Micros 60各种试剂;原装配套ABX-Micros 60校准品;原装配套ABX-Micros 60高、中、低值质控品;末梢血容器为国产乙二胺四乙酸三钾(EDTA-K₃)干粉0.75 mg抗凝的0.5 mL尖底离心管;4 ℃冷藏条件由HYC-260海尔温控冰箱提供。

三、标本采集

常规手指末梢无菌消毒后,按照末梢采血技术规范要求采取120 μL左右(考虑了检测探针挂壁浪费的血样量)末梢血,加入EDTA-K₃干粉抗凝的0.5 mL尖底离心管中立即混匀(使抗凝剂与血液充分接触以免凝固)。

四、方法

取40名幼儿末梢全血用EDTA-K₃抗凝,分装成80个标本(每人分装2个标本)区分标记后保存于不同温度中。应用ABX-Micros 60全自动血液分析仪,将分装标本1于室温(实验室25~28 ℃)0.5、4、8和10 h各测定40例,以室温0.5 h结果为对照组;分装标本2于4 ℃冷藏0.5、4、10和24 h各测定40例(每次检测均应将标本恢复室温,充分混匀后再检测),以室温0.5 h结果为对照组。

五、统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件包对数据进行统计分析,数据以 $\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}$ ±s表示,进行单样本的 t检验,组间进行配对 t检验。 P< 0.05认为差异具有统计学意义。

结果

一、室温条件下随放置时间延长的全血细胞计数结果变化

幼儿末梢血标本在实验室室温(25~28 ℃)环境中,随着放置时间的延长,白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、淋巴细胞百分率(LY)有逐渐上升的趋势;血小板(PLT)计数、中性粒细胞百分率(GRA)有下降的趋势。以采血后室温放置0.5 h结果为对照组,4 h时MPV、PDW、GRA与对照组比较,差异有统计学意义( P< 0.05);8 h与对照组比较,差异有统计学意义的指标逐渐增多,有WBC、PLT、MPV、PDW、LY、GRA;10 h时差异有统计学意义的指标有WBC、RBC、PLT、MPV、PDW、LY、GRA,且差异加大。见表1。

表1 室温放置0.5、4、8和10 h后全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

项目	例数	室温0.5 h		室温4 h		室温8 h		室温10 h
WBC(×10⁹/L)	40	7.12	±2.78	7.35	±3.07	7.45	±2.94^*	7.70	±2.87^*
RBC(×10¹²/L)	40	3.61	±0.31	3.64	±0.32	3.64	±0.30	3.67	±0.31^*
Hb(g/L)	40	109.8	±17.3	109.1	±17.5	109.0	±16.5	111.1	±16.5
HCT(%)	40	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.35	±0.05
RDW(%)	40	10.58	±1.05	10.28	±0.97	10.55	±1.08	10.4	±0.89
PLT(×10⁹/L)	40	257	±71	253	±62	240	±76^*	237	±76^*
MPV(%)	40	7.78	±0.73	8.23	±0.73^*	8.43	±0.69^*	8.50	±0.68^*
PDW(%)	40	11.10	±1.82	11.81	±2.20^*	12.80	±2.06^*	12.58	±1.99^*
LY(%)	40	59.7	±14.1	61.4	±14.6	62.8	±13.9^*	62.7	±14.5^*
MON(%)	40	8.10	±1.70	8.20	±1.37	8.52	±1.40	8.83	±1.83
GRA(%)	40	32.1	±12.1	30.3	±13.2^*	28.6	±12.9^*	28.5	±13.6^*

注:Hb为血红蛋白;RDW为红细胞分布宽度;与室温0.5 h比较,* P<0.05

表1 室温放置0.5、4、8和10 h后全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

二、4 ℃冷藏条件下随放置时间延长的全血细胞计数结果变化

幼儿末梢血于4 ℃冷藏环境时,随着放置时间的延长,WBC、RBC、红细胞压积(HCT)、MPV、PDW、LY有逐渐上升的趋势;PLT计数、GRA有下降的趋势。以采血后室温放置0.5 h结果为对照组,4 ℃冷藏放置0.5 h各项指标与对照组比较,差异均无统计学意义( P>0.05);4 ℃冷藏放置4 h,仅MPV、PDW差异有统计学意义( P<0.05);4 ℃冷藏放置10 h时 WBC、MPV、PDW、GRA差异有统计学意义( P< 0.05); 4 ℃冷藏24 h后大多指标差异均有统计学意义,且差异加大。见表2。

表2 4 ℃冰箱冷藏放置0.5、4、10和24 h全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

项目	例数	室温0.5 h		4 ℃ 0.5 h		4 ℃ 4 h		4 ℃ 10 h		4 ℃ 24 h
WBC(×10⁹/L)	40	7.12	±2.78	7.38	±3.00	7.30	±2.83	7.48	±3.03^*	7.73	±2.49^*
RBC(×10¹²/L)	40	3.61	±0.31	3.64	±0.29	3.63	±0.32	3.64	±0.35	3.74	±0.36^*
Hb(g/L)	40	109.8	±17.3	110	±10.3	112	±18.7	111	±16.3	112	±17.7
HCT(%)	40	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.37	±0.05^*
RDW(%)	40	10.58	±1.05	10.45	±0.99	10.33	±0.87	10.52	±1.22	10.80	±1.03
PLT(×10⁹/L)	40	257	±71	262	±74	257	±79	252	±79	236	±78^*
MPV(%)	40	7.78	±0.73	7.85	±0.73	8.27	±0.87^*	8.85	±0.79^*	10.24	±0.78^*
PDW(%)	40	11.10	±1.82	11.20	±2.31	12.55	±2.61^*	14.55	±2.81^*	18.80	±2.18^*
LY(%)	40	59.7	±14.1	59.5	±14.3	60.1	±14.3	61.1	±14.2	62.5	±14.0^*
MON(%)	40	8.10	±1.70	8.20	±1.40	8.61	±1.20	8.59	±1.50	12.02	±1.30^*
GRA(%)	40	32.1	±12.1	32.2	±12.7	31.2	±13.6	30.3	±13.1^*	25.5	±12.5^*

注:与室温0.5 h比较,* P<0.05

表2 4 ℃冰箱冷藏放置0.5、4、10和24 h全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

三、放置不同的时间室温与4 ℃冷藏2组全血细胞计数结果比较

0.5和4 h时室温与4 ℃冷藏2组全血细胞计数比较,各项差异均无统计学意义( P>0.05)。10 h时室温与4 ℃冷藏2组数据比较,WBC、PLT、MPV、PDW、单核细胞百分率(MON)、GRA差异有统计学意义( P<0.05)。见表3。

表3 放置0.5、4和10 h时室温与4 ℃冷藏放置2组全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

项目	0.5 h				4 h				4 h
项目	室温		4 ℃		室温		4 ℃		室温		4 ℃
WBC(×10⁹/L)	7.12	±2.78	7.38	±3.00	7.35	±3.07	7.30	±2.83	7.70	±2.87	7.48	±3.03^*
RBC(×10¹²/L)	3.61	±0.31	3.64	±0.29	3.64	±0.32	3.63	±0.32	3.67	±0.31	3.64	±0.35
Hb(g/L)	109.8	±17.3	110	±10.3	109.1	±17.5	112.0	±18.7	111.1	±16.5	111.0	±16.3
HCT(%)	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.36	±0.05	0.35	±0.05	0.36	±0.05
RDW(%)	10.58	±1.05	10.45	±0.99	10.28	±0.97	10.33	±0.87	10.4	±0.89	10.52	±1.22
PLT(×10⁹/L)	257	±71	262	±74	253	±62	257	±79	237	±76	252	±79^*
MPV(%)	7.78	±0.73	7.85	±0.73	8.23	±0.73	8.27	±0.87	8.50	±0.68	8.85	±0.79^*
PDW(%)	11.10	±1.820	11.20	±2.31	11.81	±2.20	12.55	±2.61	12.58	±1.99	14.55	±2.81^*
LY(%)	59.7	±14.1	59.5	±14.3	61.4	±14.6	60.1	±14.3	62.7	±14.5	61.1	±14.2
MON(%)	8.10	±1.70	8.20	±1.40	8.20	±1.37	8.61	±1.20	8.83	±1.83	8.59	±1.50^*
GRA(%)	32.1	±12.1	32.2	±12.7	30.3	±13.2	31.2	±13.6	28.5	±13.6	30.3	±13.1^*

注:与放置相同时间的室温数据比较,* P<0.05

表3 放置0.5、4和10 h时室温与4 ℃冷藏放置2组全血细胞计数结果比较(

\begin{matrix} \bar{x} \end{matrix}

±s)

讨论

在手指末梢采血过程中,由于操作缓慢、穿刺不顺、组织液混入、混匀不及时等原因会对血细胞计数及分类产生影响。为此,根据文献介绍和大量试验证明,使用末梢血在血液分析仪上进行检测,影响因素较多,其重复性及稳定性都不及静脉血标本^{[ 1]}。为保障检验结果的准确,我们已将全血细胞计数的标本常规改为抽取EDTA-K₃抗凝的静脉血。但是对于我们承担着每年全区下属幼儿园几千名幼儿全血细胞计数体检工作而言,全部采静脉血事实上是无法被接受的,采集末梢血成为主要的方式。那么成批量的体检工作需要考虑到放置时间及标本保存温度对检验结果的影响,这些因素将指导着体检工作流程的合理安排,有重要的意义。

经EDTA-K₃抗凝的全血标本,采集后PLT发生聚集(分为可逆聚集和不可逆聚集),如果立即检测,可逆聚集的PLT还没有解聚,会造成PLT不同程度的假性降低;同时形成的PLT可逆聚集体由于其体积和淋巴细胞大小相似,又不能被溶血剂溶解,在使用阻抗法做血细胞分析时就会造成LY不同程度假性升高。因此经EDTA-K₃抗凝的全血标本,在采血0.5 h后进行血细胞分析,准确性高^{[ 2]}。故我们选择采血后室温放置0.5 h的结果为对照组。

从我们研究的结果可以看出,在室温条件(实验室25~28 ℃)保存标本,随着标本放置时间的延长,WBC、RBC、 MPV、PDW、LY呈增高趋势, PLT、GRA呈下降趋势,与国内彭涛等^{[ 3]}报道一致。标本放置4 h测定结果MPV、PDW、GRA与对照组比较,差异有统计学意义,其他指标虽有变化,但差异不显著,8和10 h测定结果差异有统计学意义的指标逐渐增多,且上述大多数指标与对照组比较差异加大。其中,随着放置时间的不断延长,WBC分类中有明显变化趋势,这是因为随着室温(实验室25~28 ℃)保存时间的延长,大多数中性粒细胞肿胀破裂,细胞核被暴露,由于细胞核体积和淋巴细胞大小相似,计数时被当成淋巴细胞,故造成LY假性升高,GRA假性降低。故与国外标本采取后放置时间、温度及上机前标本混匀、振荡时间、力度等均可影响血细胞分析仪对WBC分类的准确识别报道一致^{[ 4]}。因此,在4 h内完成检测,可提高结果的准确性。

在4 ℃冰箱冷藏条件下保存标本,放置10 h测定各项指标与对照组比较,WBC、MPV、PDW、GRA差异有统计学意义。24 h后由于部分细胞已发生肿胀或破碎等结构改变,对分类结果造成影响,血样已不适合测定。需要强调的是,在4 ℃冰箱冷藏条件下保存标本,待检测时要注意血样应恢复实验室室温(25~28 ℃),并充分混匀后再检测。否则低温状态下血细胞易聚集、黏连,影响检测结果^{[ 4]}。

通过对放置不同的时间,室温(25~28 ℃)与4 ℃冷藏2组全血细胞计数结果比较,我们发现4 h之内检测,2组温度环境(25~28 ℃与4 ℃)对检测结果无明显影响;10 h检测2组温度环境(25~28 ℃与4 ℃)对检测结果有明显影响。故在大批量的体检工作中,选用4 ℃冷藏条件下10 h之内完成检测的工作流程还是可行的。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献

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