引用本文
丁柳美, 朱列君, 化范例. ITP患者大剂量地塞米松治疗前后外周血B-1a细胞的变化. 2011, 26(3): 160-162
DING Liumei, ZHU Liejun, HUA Fanli. The level change of peripheral blood B-1a cell in immune thrombocytopenia patients treated with high-dose dexamethasone. Labratory Medicine, 2011, 26(3): 160-162  
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ITP患者大剂量地塞米松治疗前后外周血B-1a细胞的变化
丁柳美1, 朱列君1, 化范例2
1.复旦大学附属金山医院检验科,上海 200540
2.复旦大学附属金山医院血液科, 上海 200540

作者简介:丁柳美,1969年生,女,主管技师,主要从事血液学免疫诊断。

通讯作者:化范例,联系电话:021-57949999。

摘要
目的

研究免疫性血小板减少症(ITP)患者大剂量地塞米松治疗前后外周血B-1a细胞水平的动态变化。

方法

用流式细胞仪和CD5CD19双标抗体检测20名正常对照,31例ITP患者大剂量地塞米松治疗前后外周血B细胞和B-1a细胞占淋巴细胞的比例和绝对值,并比较地塞米松治疗有效和无效患者之间B-1a细胞变化的差别。

结果

ITP患者治疗前外周血B-1a细胞占淋巴细胞比例为(4.01±3.32)%,绝对值为(74.8±26.6)×106/L,均较正常对照组明显升高( P<0.01),地塞米松治疗结束后ITP患者外周血B-1a细胞水平下降至(31.9±14.5)×106/L,其中地塞米松有效和无效患者治疗前B-1a细胞分别为(91.8±44.3)×106/L和(48.9±25.8)×106/L( P<0.05),治疗结束后有效和无效患者外周血B-1a细胞分别为(22.5±12.3)×106/L和(43.9±13.2)×106/L。

结论

ITP患者外周血B-1a细胞水平升高,接受大剂量地塞米松治疗后,B-1a细胞绝对值明显下降,治疗前B-1a细胞水平较低者提示对大剂量地塞米松治疗反应较差。

关键词: B-1a细胞; 免疫性血小板减少症; 流式细胞术
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)03-0160-03
The level change of peripheral blood B-1a cell in immune thrombocytopenia patients treated with high-dose dexamethasone
DING Liumei1, ZHU Liejun1, HUA Fanli2
1.Department of Laboratory Medicine, Jinshan Hospital,Fudan University,Shanghai 200540, China
2.Department of Haematology,Jinshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200540,China
Abstract
Objective

To investigate the dynamic changing level of peripheral blood B-1a cell in immune thrombocytopenia (ITP) patients treated with high-dose dexamethasone.

Methods

Flow cytometry and CD5 CD19 antibody were used to detect the absolute counts of peripheral blood B cell and B-1a cell and their proportion in lymphocyte in 20 healthy controls and 31 patients with ITP treated with high-dose dexamethasone.The changes of B-1a cell level after treatment were analyzed between response group and non-response group.

Results

Before the treatment, the peripheral blood B-1a cell proportion was (4.01±3.32)% of lymphocyte in ITP patients, and the absolute count was (74.8±26.6)×106/L,which were significantly higher than those in controls( P<0.01).After the treatment, B-1a cell level decreased to (31.9±14.5)×106/L. Before the treatment,B-1a cell levels in response group and non-response group were (91.8±44.3)×106/L and (48.9±25.8)×106/L respectively( P<0.05).The count decreased to (22.5±12.3)×106/L and(43.9±13.2)×106/L after the treatment.

Conclusions

The level of peripheral blood B-1a cell increases in patients with ITP and decreases significantly after high-dose dexamethasone treatment.In those patients who have a relative lower B-1a cell count, the high-dose dexamethasone treatment trends to show worse efficacy.

Keyword: B-1a cell; Immune thrombocytopenia; Flow cytometry
引言

免疫性血小板减少症(immunol thrombocy-topenia , ITP), 又称为特发性血小板减少性紫癜, 是一种常见的血液系统疾病, 虽然其确切的发病机制尚不明确, 但80%90%的患者血清或血小板表面存在抗血小板抗体, 针对自身血小板膜糖蛋白(GP)Ⅱ b/Ⅲ a和GPⅠ b/Ⅸ 等, 通过Fab段与血小板膜上的靶抗原结合, 迅速被单核-巨噬细胞系统通过巨噬细胞的Fc受体从血液循环中清除, 使血小板寿命缩短和功能改变, 临床上有紫癜、鼻衄等出血表现。可见在ITP的发病机制中, 自身抗体的作用至关重要。生理状态下B-1a细胞可以产生低亲和力自身抗体, 参与体内衰老成分的清除。近年来发现B-1a细胞在多种自身免疫性疾病中有所升高, 因此其与ITP患者致病性自身抗体的关系值得关注。我们收集了近期一些确诊的ITP病例, 研究大剂量地塞米松治疗前后患者外周血中B细胞以及B-1a细胞的变化, 探讨B-1a细胞在ITP发病和预后判断中的作用。

材料和方法
一、血液标本

外周血标本来自于2007年7月至2009年12月上海金山医院门诊和住院确诊ITP患者31例, 其中男12例, 女19例, 年龄19~95岁, 平均年龄为48.43岁。31例患者确诊均接受大剂量地塞米松冲击治疗(40mg· d-1× 4 d), 其中21例治疗有效患者, 10例患者治疗无效。治疗前及治疗后第4天、10天、30天接受血液采样。另设正常对照20名, 男9名, 女11名, 年龄18~46岁, 平均年龄33.8岁。诊断与疗效标准参照文献[1]。

二、主要试剂及仪器

藻红蛋白(PE)标记的鼠抗人CD5-异硫氰酸荧光素(FITC)标记的鼠抗人CD19单克隆抗体(美国贝克曼生物试剂公司)。流式细胞仪为美国BECKMAN COULTER公司产品。XE-2100五分类血液分析仪以及Sysmex配套供应溶血素、染色液、稀释液、清洗液, 该仪器为日本Sysmex公司产品。

三、研究方法

采集外周血2 mL, 乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝, 取20 μ L血液样本, 加入10 μ L (PE)CD5-(FITC)CD19双标抗体, 室温下反应20 min, 加入500 μ L红细胞裂解液, 室温下反应10 min, 加入流式细胞缓冲液500 μ L, 室温下反应10 min, 上流式细胞仪检测。利用Analysis32软件进行采集和分析, 激发光波长488nm, 发射光波长FITC 525nm, PE 575 nm以侧向散射角和CD45设门, 每份标本检测10 000个细胞, 记录外周血B细胞(CD19阳性)和B-1a细胞(CD5CD19双阳性)占外周血淋巴细胞的比例。将充分混匀好的标本置于自动进样器上, 进行血常规检测分析, 记录白细胞总数、淋巴细胞绝对值计数、血小板计数。

四、统计学方法

应用STATA7.0软件进行统计分析。2组间比较运用t检验, P< 0.05为差异有统计学意义。

结果
一、治疗前外周血B细胞和B1-a细胞水平

ITP患者接受大剂量地塞米松治疗之前与正常对照相比, 外周血B细胞(CD19阳性细胞)占总的淋巴细胞比例及绝对值升高, 差异有统计学意义(P< 0.05)。但外周血B-1a细胞(CD5CD19双阳性细胞)占总的淋巴细胞比例及绝对值升高则更为明显(P< 0.01)。见表1。

二、治疗后外周血B细胞和B1-a细胞水平

地塞米松疗程结束后的ITP患者外周血B细胞和B-1a细胞均较前明显下降(P< 0.01)。见表1。

表1 ITP患者治疗前后外周血B细胞及B-1a细胞水平
三、B1-a细胞水平与地塞米松疗效的关系

地塞米松治疗有效患者各时间点外周血B-1a细胞较治疗前明显下降(P均< 0.01), 但治疗后各时间点之间则差异无统计学意义(P> 0.05)。治疗无效患者外周血B-1a细胞虽较治疗前有所下降, 但差异无统计学意义(P> 0.05)。见表2。

表2 B1-a细胞水平与地塞米松疗效的关系
讨论

ITP是血液系统中最常见的自身免疫性疾病, 是一种以体液免疫异常亢进为特征的疾病。我们曾在血液系统的另外一种以自身抗体为特征的疾病— — 自身免疫性溶血性贫血患者中发现其外周血B-1a细胞比例明显增高[2], 我们的实验则进一步论证了B-1a细胞在ITP患者中有同样的变化, 并且经过大剂量地塞米松治疗后, B-1a细胞的水平有一定的变化。

B-1a细胞的分子表面标志为(CD1lb+CD5+IgM+)[3], 其在体内的分布和特性与CD5- B细胞有显著的区别[4]。B细胞中只有 B-1a细胞表达CD5分子, 外周血中CD19是B细胞的标记, 因此在流式细胞术检测中, 以CD5CD19双标可以代表B-1a细胞。初诊的ITP患者B-1a细胞显著升高, 治疗后水平则明显下降, 提示B-1a细胞与ITP发病相关。无效患者在地塞米松治疗前的B-1a细胞较低, 提示地塞米松作用机制可能是通过B-1a细胞减少了抗血小板自身抗体产生, 达到治疗的效果。

ITP的传统治疗为肾上腺糖皮质激素, 既往选用长程泼尼松治疗, 疗程长达半年以上。自从Cheng等[5]开始应用大剂量地塞米松短程冲击治疗之后, 这种疗法已经渐渐取代了长程激素治疗。但是短程冲击治疗的一个缺点是:疗程仅4 d, 治疗结束时相当部分患者血小板计数尚未上升, 而在这部分患者中却有一些在停止地塞米松治疗后血小板计数恢复。因此如何预测疗效, 从而决定有无后续治疗如免疫抑制剂和脾切除等是临床上必须要面对的问题。我们在本次研究中发现, 无效患者在治疗前的B-1a细胞较低, 而有效的患者在疗程结束时无论此时血小板计数是否已经恢复, 其B-1a细胞比例和绝对值计数已经显著下降, 无疑为临床判断地塞米松短程冲击治疗的有效性提供了参考依据。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Rodeghiero F, Stasi R, Gernsheimer T, et al. Stand ardization of terminology, definitions and outcome criteria in immune thrombocytopenic purpura of adults and children: report from an international working group[J]. Blood, 2009, 113(11): 2386-2393. [本文引用:1] [JCR: 9.06]
[2] 化范例, 谢彦晖. 自身免疫性溶血性贫血患者外周血B-1a细胞的研究[J]. 中国临床医学, 2009, 16(3): 401-402. [本文引用:1]
[3] BerlR, Wortis HH. Origins and functions of B-1 cells with notes on the role of CD5[J]. Annu Rev Immunol, 2002, 20(1): 253-300. [本文引用:1] [JCR: 36.556]
[4] 化范例, 谢彦晖. Babl/C小鼠腹腔B-1a细胞对抗原刺激的增殖和凋亡反应[J]. 复旦学报(医学版), 2008, 35(6): 889-891. [本文引用:1]
[5] Cheng Y, Wong RS, Soo YO, et al. Initial treatment of immune thrombocytopenic purpura with high-dose dexamethasone[J]. N Engl J Med, 2003 , 349(9): 831-836. [本文引用:1]