引用本文
黄惠, 罗燕玲. 血清胸苷激酶1水平在乳腺癌术后疗效评估中的作用. 2011, 26(2): 79-81
HUANG Hui, LUO Yanling. The role of serum thymidine kinase 1 levels in the postoperative evaluation of curative effect of breast cancer. Labratory Medicine, 2011, 26(2): 79-81  
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血清胸苷激酶1水平在乳腺癌术后疗效评估中的作用
黄惠, 罗燕玲
广州中医药大学第二附属医院检验科,广东 广州 510120

作者简介:黄惠,女,1979年生,硕士,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。

摘要
目的

探讨血清胸苷激酶1(TK1)水平对乳腺癌的临床应用价值。

方法

采用CIS-1型印迹免疫-增强发光检测系统检测100例乳腺癌患者、30例乳腺良性疾病、30例正常对照者血清TK1水平。比较乳腺癌患者不同病理参数下血清TK1水平的差异。分析血清TK1水平与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的关系。

结果

乳腺癌患者血清TK1水平均明显高于乳腺良性疾病组和对照组( P<0.05),且血清TK1水平与乳腺癌分期密切相关。在有淋巴结转移或术后2年复发的乳腺癌患者中,TK1水平明显升高( P<0.05)。ER、PR双阳性的乳腺癌患者术后血清TK1水平高于术前( P<0.05),ER、PR双阴性的乳腺癌患者术前和术后1年的TK1水平无差异( P>0.05),ER、PR双阳性的乳腺癌患者术前血清TK1水平低于ER、PR双阴性患者( P<0.05)。

结论

血清TK1可为乳腺癌预后判断及病情监测提供重要价值。

关键词: 胸苷激酶1; 乳腺癌; 疗效评估
中图分类号:Q555 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)02-0079-03
The role of serum thymidine kinase 1 levels in the postoperative evaluation of curative effect of breast cancer
HUANG Hui, LUO Yanling
Department of Clinical Laboratory, the Second Hospital Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Guangzhou 510120, China
Abstract
Objective

To investigate the clinical application of the serum thymidine kinase 1 (TK1) levels in the curative effect of breast cancer.

Methods

100 patients with breast cancer,30 patients with benign breast disease and 30 controls were detected the level of serum TK1 by CIS-1 immune blot enhanced chemiluminescence detection system. The different pathological parameters were compared in the patients with breast cancer under different levels of serum TK1. The relationship of serum TK1 level with the estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) was analyzed.

Results

The serum TK1 concentrations in the patients with breast cancer were significantly higher than those in patients with benign breast disease and the controls ( P<0.05), and its serum TK1 concentration was closely associated with the breast cancer stages. In patients with lymph node metastatic breast cancer after surgery 2 years, TK1 concentration increased significantly ( P<0.05). The serum TK1 level was higher in breast cancer patients with both ER and PR positive after surgery 1 year than before the surgery ( P<0.05). The serum TK1 level had no difference in breast cancer patients with both ER and PR negative before and after the surgery 1 year ( P>0.05). The serum TK1 level in patients with both positive was lower than that in patients with both negative ( P<0.05).

Conclusions

Serum TK1 can provide important value for prognosis and disease progress monitoring of breast cancer.

Keyword: Thymidine kinase 1; Breast cancer; Curative effect evaluation
引言

乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤, 复发、转移常是其治疗失败的主要原因。若能在患者尚处于亚临床转移状态时及时、有效的给予正确治疗, 往往可控制肿瘤发展, 提高生存率[1]。因此, 对乳腺癌亚临床转移的早期诊断、早期监测极为重要。关于乳腺癌预后指标的研究已不少见, 如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、糖链抗原153(carbohydrate antigen 153, CA153)、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2, Her-2)等, 但这些指标的阳性预测值只有40%左右。对于乳腺癌术后体内缺乏临床可评价病灶的患者, 目前尚无特异性血清肿瘤标志物以监测预后。此外, 由于血清取材简便易行, 同时可以长期、动态、连续观测。因此, 寻找乳腺癌相关血清特异性标志物, 早期判断患者病情预后, 预测复发、转移, 成为乳腺癌研究的另一目标。

材料和方法
一、仪器与试剂

采用CIS-1型印迹免疫-增强发光法检测系统测定TK1浓度。检测仪器和试剂由深圳华瑞同康生物技术有限公司提供。试剂批号为NT 2090901。

二、样本来源

收集2008年至2010年广东省中医院100例乳腺癌患者术前和术后1年的血清样本, 同时选择30例乳腺良性疾病患者。正常对照组30名来自健康体检人群。所有对象于清晨空腹抽取静脉血2 mL, 3 h内以4 000 r/min(离心半径10.4 cm)离心10 min分离血清, 按编号分装于2个离心管保存于-80 ℃, 用于TK1水平测定。

三、纳入标准

乳腺癌临床病例均经病理学检查证实, 排除其他肿瘤性疾病。.乳腺癌分期标准按照2003年修改的国际抗癌联盟和美国肿瘤联合会联合制定的TNM分期法。

四、测定方法

1.TK1水平测定

吸取3 μ L血清到硝酸纤维素膜上。晾干30 min, 用pH值7.5的四正丁基硫酸氢铵缓冲液(tetrabutylammonium hydrogen sulfate, TBS)[20 mmol/L三羟甲基氨基甲烷(hydroxymethyl aminomethane, Tris), 0.15 mol/L NaCl]在5 min内震摇洗涤3次。加入用TBS配制的6%脱脂奶粉, 室温封闭1 h后除去封闭试剂, 继续加入用TBS配制的最佳稀释浓度的TK1抗体, 免疫反应2 h。反应完成后用TBST (TBS加入0.1%吐温20)迅速漂洗2次, 震摇洗涤3次(5 min/3次)。再加生物素化二抗, 室温下震摇反应40 min。反应完成后, 同上方法洗涤后, 加入亲和素-辣根过氧化物酶1 h。同上方法洗涤以后, 用发光试剂精确反应1 min。甩干后, 该膜密封于薄膜袋, 挤干发光试剂, 放入 CIS-1型化学发光成像分析系统内分析。发光信号的强弱将通过成像系统分析仪捕获信号和扫描定量分析。每次测定均采用不同浓度的TK1(20.0、6.6、2.2 pmol/L)标准品制定标准曲线。按照TK1的标准曲线计算样本的TK1水平[1]。以TK1> 1.0 pmol/L为异常。

2.CA153水平

测定采用罗氏E601电化学发光分析仪。参考范围为025 U/mL。

3. Her-2、ER和PR水平测定

均采用免疫组化法。

五、统计学方法

计量资料以 ± s表达, 各组之间TK1水平的比较用双因素方差分析, 两两比较用Bonferroni法。TK1水平与ER、FR的关系采用中位数(范围)表示, 2组之间差异采用Wilcoxon轶和检验。数据处理均用SPSS13.0统计软件。P< 0.05表示差异有统计学意义。

结果
一、正常对照组、乳腺良性疾病组与乳腺癌组血清TK1水平的比较

正常对照组和乳腺良性疾病患者血清TK1水平差异无统计学意义(P> 0.05)。乳腺癌各期血清TK1水平均高于乳腺良性疾病组(P< 0.05)。乳腺癌Ⅱ 、Ⅲ 期 患者血清TK1水平高于0、Ⅰ 期患者(P< 0.05)。约有80%的0、Ⅰ 、Ⅱ 期乳腺癌患者CA153水平均不升高, 有部分Ⅲ 期患者CA153异常升高, 特别是有骨或腹部转移的乳腺癌患者。

表1 正常对照组与乳腺癌不同分期血清TK1及CA153水平的比较(± s)
二、血清TK1水平与乳腺癌临床病理特征的关系

血清TK1水平与乳腺癌患者的年龄、Her-2水平差异无统计学意义(P> 0.05), 但在有无淋巴结转移或术后复发之间差异有统计学意义(P< 0.05), 见表2。

表2 乳腺癌患者不同病理状态下血清TK1水平比较(± s, pmol/L)
三、乳腺癌患者血清TK1水平与ER、PR的关系

表3显示 ER、PR双阳性的乳腺癌患者术前和术后1年TK1水平差异有统计学意义(P< 0.05)。 ER、PR双阴性的乳腺癌患者术前和术后1年TK1水平差异无统计学意义(P> 0.05)。ER、PR双阳性的乳腺癌患者术前TK1水平低于ER、PR双阴性患者(P< 0.05), 见表3。

表3 乳腺癌患者血清TK1水平与ER、PR的关系
讨论

TK1是合成DNA的嘧啶补救途径激酶。存在于细胞质中的同工酶为细胞质胸苷激酶(简称TK1)。TK1参与细胞周期的调控, 与细胞分裂密切相关。 TK1可以从细胞中释放到血清中, 增殖周期中的TK1在细胞分裂的G1期含量比较低, 到S期后逐渐升高, 至G2期达到最高[2, 3]。正常情况下成人TK1体内含量极微, 几乎检测不出 。TK1水平在细胞过度增生时增高。

本研究显示, TK1在对照组(包括对照组和乳腺良性疾病组)和乳腺癌患者中有明显差异。提示TK1> 0.75 pmol/L为可能出现乳腺癌的警界值, 可用于人群的普查和筛选; 并对乳腺良性疾病与乳腺癌患者的区分诊断有一定的意义。本研究还显示 Ⅱ 、Ⅲ 期乳腺癌患者TK1水平明显高于0、Ⅰ 期患者(P< 0.05), 提示TK1能在一定程度上反映肿瘤病情的进展。而CA153在0Ⅱ 乳腺癌患者的检测值多数落在正常范围内, 阳性率< 20%。在Ⅲ 期乳腺癌患者中也只有约40%的阳性率。

表2列出乳腺癌相关的各项病例参数。其中Her-2是与乳腺癌关系最密切的一种癌基因。乳腺癌Her-2的表达是其癌基因扩增的结果, 阳性表达多见于分化差和浸润性乳腺癌。统计显示TK1水平与Her-2并不相关, 但与淋巴结转移有关。提示随着患者出现癌转移或局部复发, TK1的浓度趋向有意义的升高。应用这一参数将改善风险评估, 可帮助医生对患者采用不治疗、延长治疗或改变辅助治疗方案[1]。

ER、PR是乳腺癌重要的预后因素和预测激素治疗效果的参数。ER、PR阳性往往与乳腺癌组织高分化、肿瘤体积小、血管浸润少等因素有关。ER、PR阳性患者预后比阴性者好。表3显示血清TK1水平与ER、PR表达有关。ER、PR阴性乳腺癌患者血清TK1水平比ER、PR阳性患者高。ER、PR阳性患者术后1年血清TK1水平低于术前。提示TK1水平能在一定程度反映乳腺癌治疗的效果。

肿瘤标志物CA153 是在乳腺癌中应用比较广泛的血清标志物。在部分乳腺癌患者中CA153在手术及复发转移前、后有一定差异, 据文献[4]报道, CA153 在乳腺癌中约有42.42%的阳性率。CEA 是常见的恶性肿瘤标志物之一, 在乳腺癌患者血清中约有14.80%的阳性率。由于在其他的恶性和非恶性疾病中也可见CA153和CEA水平的升高, 美国临床肿瘤学会 (American society of clinical oncology, ASCO)临床实践指导原则规定不能仅使用CA153进行乳腺癌的筛查、诊断和病情监测[5]。因此, 寻找新的、简便的、可用于乳腺癌临床监测的血清标志物是研究的方向之一。

血清TK1在乳腺癌术前初发阶段与对照组的比较即有明显差异。随着患者出现癌转移或局部复发, TK1的浓度趋向有意义的升高。TK1的浓度还与淋巴结转移及ER、PR受体有关。应用这一参数将改善风险评估, 辅助临床对患者采用不同治疗方案。在放、化疗前后进行血清TK1浓度的检测可协助对乳腺癌患者进行临床效果的评估。TK1是否有望作为乳腺癌候选标志物之一, 仍需要增加检测数, 进一步进行临床试用。

有报道指出血清TK1在磷癌、腺癌及其他恶性肿瘤中都增高[1]。本研究所筛选的乳腺癌病例皆排除其他肿瘤性疾病。当患者同时兼并有多种肿瘤性疾病时, 血清TK1如何更好的应用于乳腺癌患者病情的评估, 有待进一步深入研究。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 涂植光. 依托现代科学管理和技术开展肿瘤标志物研究和应用[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(4): 289-292. [本文引用:4]
[2] 吴怡春, 徐笑红, 张毅敏, 等 . 血清TK1水平变化在恶性肿瘤诊疗转归过程的监测作用[J]. 中国卫生检验杂志, 2008, 18(6): 1122-1123. [本文引用:1]
[3] He Q, Fornand er T, Johansson H, et al . Thymidine kinase 1 in serum predicts increased risk of distant or loco-regional recurrence following surgery in patients with early breast cancer[J]. Anticancer Res, 2006, 26(6C): 4753-4759. [本文引用:1] [JCR: 1.713]
[4] 崔红霞, 韩存芝, 杜丽莉, 等. 肿瘤标志物在监测乳腺癌患者复发转移中的意义[J]. 中国循证医学杂志, 2008, 8(10): 842-845. [本文引用:1]
[5] Harris L, Fritsche H, Mennel R, et al. American Society of Clinical Oncology 2007 update of recommendations for the use of tumor markers in breast cancer[J]. J Clin Oncol, 2007, 25(33): 5287-5312. [本文引用:1] [JCR: 18.038]