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陈荣仓, 陈筱华, 林碧, 孔令光, 黄国永, 刘保林, 甄伟春, 林杰. RhD阴性血型抗原分析在临床输血安全中的应用研究. 2011, 26(2): 105-107
CHEN Rongcang, CHEN Xiaohua, LIN Bi, KONG Lingguang, HUANG Guoyong, LIU Baolin, ZHEN Weichun, LIN Jie. Application research of antigen analysis on RhD-negative blood type in the clinical transfusion safety. Labratory Medicine, 2011, 26(2): 105-107  
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RhD阴性血型抗原分析在临床输血安全中的应用研究
陈荣仓, 陈筱华, 林碧, 孔令光, 黄国永, 刘保林, 甄伟春, 林杰
温州市中心血站,浙江 温州 325027

作者简介:陈荣仓,男,1973年生,学士,主管技师,主要从事医学检验和免疫学、血液学研究工作。

摘要
目的

从临床输血安全的研究角度,实施有效的管理和应用,指导对RhD阴性血型稀有血液资源的保存与实用性稀有血型库的建立。

方法

采用瓷板法对RhD抗原进行初筛,RhD初筛阴性的血液标本,用间接抗人球蛋白法(IAT)进行确认试验;RhD确认阴性的试验标本再进行吸收和放散试验;再用盐水试管法对RhC、Rhc、RhE和Rhe抗原的鉴定。

结果

从165 041名献血者初筛出651名RhD抗原阴性者,其中RhD阴性抗原确认为633名,弱D型为18名,在633名RhD抗原阴性献血者中,ABO血型分布为:O型(36.81%)﹥A型(30.49%)>B型(26.07%)﹥AB型(6.63%);RhD阴性血型抗原表现型以ccdee(59.08%)和Ccdee(30.96%)居多,其次为CCdee、ccdEe、CcdEe、CCdEe、CcdEE和ccdEE表现型,未见CCdEE表现型。从整体随机抽取确认为阴性的316名献血者中共检测出DEL型71名,所占比例为22.47%。

结论

把O型CCdEE和ccdEE表现型红细胞,在工作中发现后及时冻存并在临床上针对使用,在建立使用型稀有血型库和解决临床对特殊血型的需求具有实际的临床应用意义。

关键词: RhD阴性; 血型抗原; 应用
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2011)02-0105-03
Application research of antigen analysis on RhD-negative blood type in the clinical transfusion safety
CHEN Rongcang, CHEN Xiaohua, LIN Bi, KONG Lingguang, HUANG Guoyong, LIU Baolin, ZHEN Weichun, LIN Jie
Central Blood Station of Wenzhou, Zhejiang Wenzhou 325027,China
Abstract
Objective

To establish the effective management and application guideline for the preservation of RhD-negative blood type scarce resource and the practicality of rare blood bank from the view of blood transfusion safety.

Methods

By porcelain plate method for screening of RhD antigen, RhD-negative blood samples were detected. The indirect anti-human-globulin test(IAT) was the confirmation test. The RhD-negative specimens were determined by absorb and diffuse test further. RhC, Rhc, RhE and Rhe antigens were identified by the brine tube method.

Results

In 165 041 blood donors, 651 donors were RhD antigen negative. After confirmation test, 633 out of 651 donors were identified. There were 18 weak D type. In the 633 RhD antigen negative blood donors, ABO blood type distribution was: O type (36.81 %)> A type (30.49%)> B type (26.07%)> AB type (6.63%). The major antigen phenotypes of RhD-negative blood type were ccdee (59.08%) and Ccdee (30.96%), which were followed by CCdee, ccdEe, CcdEe, CCdEe, CcdEE and ccdEE. There was no CCdEE phenotype. 316 donors were selected randomly from whom were confirmed as RhD-negative blood type. There were 71(22.47%) DEL type cases.

Conclusions

When the O type CCdEE and ccdEE phenotype red blood cells are found in the work, they should be preserved promptly by cryopreservation. It will be significant in the establishment of the use of rare blood bank and the demand of rare blood type.

Keyword: RhD-negative; Blood type antigen; Application
引言

自从20世纪40年代人类红细胞(RBC)Rh血型被发现以来, 是仅次于ABO血型系统的在临床输血医学上具有重要意义的血型系统, 也是人类29个血型系统中最复杂最具有多态性的一个系统, 在世界人口比例中属RhD阴性血型人只占0.3%, 在中国汉族人群中占0.2~0.5%, 这就造成RhD阴性血液难以储备, 不难确保临床用血的需求。为了保证RhD阴性血液的充足供应, 建立一支RhD阴性稀有血型队伍就显得日益重要。因此, 我们对温州地区RhD阴性献血者的Rh血型进一步分型研究, 为临床输血提供科学依据, 并结合ABO血型分布进行统计分析, 以掌握其分布规律, 以便从临床输血安全的研究角度, 实施有效的管理和应用, 指导对RhD阴性血型稀有血液资源的保存与实用性稀有血型库的建立, 从而更好地指导各大医院对临床血液的输注。

材料和方法
一、检测对象

采取整体抽样的原则, 随机收集温州地区2004年1月1日至2009年5月31日的165 041名无偿献血者的血液标本, 重复献血者只收集1次, 4 ℃保存。随机选择其中318名确认为RhD阴性献血者进行吸收放散试验。

二、主要试剂和仪器

IgG抗-D血清、IgM抗-D、C、c、E、e血清和多抗人球蛋白试剂均为上海血液生物医药有限责任公司产品, 2个不同厂家的IgG+IgM的抗-D血清分别为法国Diagast公司和德国Biotest公司产品; 聚乙二醇(PEG)试剂为长春博得生物技术有限公司产品; 乙醚为常熟市杨园化工有限公司生产; O型RhD阳性RBC悬液(本室自配); 细胞洗涤离心机(型号KA-2200, 日本KUBOTA公司生厂); 开口浴槽循环器(型号MB-19, 优莱博技术北京有限公司生产)。

三、方法

1.RhD阴性初筛试验[1]

严格按照试剂说明书操作, 采用IgM抗-D血清, 白瓷板法快速检测, 结果可疑用试管法确认, 不出现凝集者为RhD初筛阴性。

2.RhD阴性确认试验[1]

对初筛阴性的血液标本, 用3个不同厂家的IgG 或IgG+IgM抗-D血清试剂, 做间接抗人球蛋白(IAT)试验进行确认。IAT试验也不出现凝集, 判为RhD阴性, 出现凝集为弱D型。

3.吸收放散试验[1]

将IAT试验为RhD阴性的标本做吸收和放散试验, 结果为凝集者为DEL型。

4.Rh因子筛选[1]

采用IgM抗-C、c、E和e 血清试管法进行筛选, 凝集者为阳性, 不凝集者为阴性。

结果

一、从165 041名的无偿献血人群中共筛查出ABO各型633名RhD阴性献血者和18名弱D型(含弱D和部分D等)。其Rh血型分布分别见表1和表2。

表1 633名RhD阴性献血者血型抗原分布
表2 弱D型献血人群Rh血型抗原分布

二、随机抽取316名RhD阴性的献血者进行吸收和放散试验, 显微镜下观察, 视野中为混合凝集者为DEL型。共检出DEL型71名, 所占比例为22.47%。其Rh血型抗原分布, 见表3。

表3 DEL型献血人群Rh血型抗原分布
讨论

Rh血型D抗原是输血医学中重要的血型抗原, 具有较强的免疫原性, 约80%的RhD阴性个体在接受1U的RhD阳性RBC刺激后产生抗-D情况[1], 临床上许多血液病、肿瘤需反复输血治疗的患者以及孕妇, 会有于外来Rh抗原的刺激而产生抗体, 再次输血时就有可能会出现配血困难的情况, 有些患者会由于找不到相合血液而失去生命, 有些只能冒险输注不能完全相合的血液[13]。为了确保临床输血安全, 卫生部向全国颁发了《临床输血技术规范》。明确规定医疗机构、采供血机构在采集、供应血制品前必须进行Rh血型检测[3]。

因此, 本站对所有的献血者初筛时进行ABO血型鉴定, 还必须同时检测RhD血型, 其重要意义是显而易见的。我们从165 041名献血者中检出RhD阴性633名, 其ABO血型分布为O型(36.81%)﹥A型(30.49%)﹥B型(26.07%)﹥AB型(6.63%), RhD阴性率为0.38%, 符合我国汉族人群RhD阴性分布率0.2%~0.5%的特点[4]。而从临床疑难输血病例的分析中发现, 由于Rh血型系统各抗原不规则抗体导致的输血比例约占86.0%, 其中D抗原占35.2%, 其他Rh抗原占64.8%[5]。而RhD阴性血液在中国汉族人群中本来就很少, 在其中要为有Rh抗体的患者寻找相合的血液就更为困难, 有些患者会因找不到相合的血液而失去生命。因此, 现代临床输血的理念要求我们不应简单满足于ABO血型输注, 还要保证Rh等其他意义的抗原输注, 尤其是对于有免疫史的患者, 同型输注可避免产生免疫性抗体。若患者产生免疫性抗体, 那么配血的关键是要找到针对相应抗体的抗原是阴性的供体, 这样才可以避免产生输血反应, 达到良好的输血效果。

同样需要关注的是由于D基因的重组、点突变、缺失以及mRNA的表达下降会导致RBC出现的D弱表型, 主要是弱D型和DEL型[3], 按照卫生部《临床输血操作规程》的规定, 在临床血型为弱D型和DEL型患者也是作为RhD阴性血型患者对待, 必须输注RhD阴性血液, 我们检测也发现弱D型和DEL型的献血者Rh血型的分布也类似有RhD阴性血型分布, 因此, 弱D型和DEL型的患者有Rh血型系统不规则抗体产生, 同样有可能存在疑难配血和供血困难的问题, 我们还发现温州地区DEL表型在RhD阴性献血者所占比例为22.47%, 符合其他兄弟省市所报道的20.65%~29.25%的比例[6~8]。

随着RBC甘油冻存技术的推广应用, 本站已采用此项技术冻存RhD阴性RBC来调剂和应对紧急情况使用, 使得建立实用型的稀有血型库成为现实。但从温州地区无偿献血者工作状况来看, 日常RhD阴性RBC的供应仅能满足需要, 因此, 真正需要关注的是RhD阴性血中稀有的Rh血型抗原表现型, 如ccdEE和CCdee表型。要满足临床RhD阴性患者的用血要求, 应该充分考虑患者对血液的特殊要求, 采供血机构应在日常工作发现O型的ccdEE和CCdee表型RBC应及时冻存, 并在RhD阴性患者存在抗-c和抗-e抗体时针对性使用。同时因O型的ccdEE(0.16%)和CCdee(4.90%)表型所占比例少, 既不会对日常Rh(D)阴性患者的用血需求造成冲击, 又由于O型RBC无A、B抗原的特点而在急需时具有通用性好的特点, 节约有效, 因而更具有实际的临床应用意义。此外, 对于需要依赖长期输血维持和治疗的RhD阴性患者, 在初次输血时不应仅仅满足配血相合, 而应考虑Rh因子的因素, 可能的情况下尽量输注Rh因子完全相合的血液, 从而进一步保证临床输血的安全性和有效性, 从而促进温州市输血事业的不断发展, 具有重大的经济效益和社会效益。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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