引用本文
成海恩, 金亚平. 尿液视黄醇结合蛋白检测在肾功能早期损伤中的诊断价值. 25(8): 640-643
CHENG Haien, JIN Yaping. The diagnosis significance of determining urine retinol-binding protein on early renal function injury. Labratory Medicine, 25(8): 640-643  
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尿液视黄醇结合蛋白检测在肾功能早期损伤中的诊断价值
成海恩, 金亚平
浙江大学医学院附属第二医院检验科,浙江 杭州 310009

作者简介：成海恩,男,1973年生,博士,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。

摘要
目的

探讨尿液视黄醇结合蛋白(RBP)在肾功能早期损伤中的诊断价值。

方法

检测445例肾功能损伤患者尿液RBP、微量白蛋白(mAlb)、免疫球蛋白(Ig)、转铁蛋白(Tr)、α1-微球蛋白(α1-MG)、N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG),同时测定其肌酐(Cr)值。根据mAlb/Cr值分为3组:正常蛋白尿组(mAlb/Cr<25.0 mg/g)、微量蛋白尿组(mAlb/Cr为25~250 mg/g)和大量蛋白尿组(mAlb/Cr>250 mg/g),分析各组患者尿RBP与上述蛋白含量水平的差异及其相关性。

结果

随着尿mAlb排泄率的增加, 尿液中各蛋白含量明显增高,大量蛋白尿组>微量蛋白尿组>正常蛋白尿组和对照组( P均<0.01)。正常蛋白尿组mAlb、α1-MG、及RBP均明显高于对照组( P<0.01),尿Ig、Tr和NAG无差异( P>0.05);微量蛋白尿组中除NAG与正常蛋白尿组无差异外( P>0.05),其他蛋白均高于正常蛋白尿组( P<0.01)。相关性分析发现,RBP与mAlb、Ig、Tr、α1-MG、NAG等均呈相关[相关系数( r)分别为0.904、0.707、0.701、0.392、0.301, P均<0.01]。但在各组样本中相关性有一定差异:正常蛋白尿组和微量蛋白尿组RBP均与mAlb、Ig、NAG呈正相关(正常蛋白尿组 r分别为0.746、0.178,0.224, P均<0.01;微量蛋白尿组 r分别为0.748、0.225、0.268, P均<0.01)。大量蛋白尿组中RBP与α1-MG呈正相关( r=0.374, P<0.01)。

结论

尿RBP是评价肾功能早期损伤的良好指标之一。

关键词: 视黄醇结合蛋白; 肾功能早期损伤; 尿液
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)08-0640-04
The diagnosis significance of determining urine retinol-binding protein on early renal function injury
CHENG Haien, JIN Yaping
Department of Clinical Laboratory, Second Affiliated Hospital, Zhejiang University College of Medicine, Zhejiang Hangzhou 310009, China
Abstract
Objective

To study the diagnosis significance of urine retinol-binding protein(RBP) on early renal function injury.

Methods

The concentrations of RBP, microalbumin(mAlb), immunoglobin (Ig), transferrin (Tr), α1-microglobulin(α1-MG) and N-acetyl-β-D glucosaminidase(NAG) in urine were determined in 445 patients with renal function injury. The concentration of creatinine (Cr) was determined simultaneously. According to the value of mAlb/Cr, the patients were classified into 3 groups: the normal albuminuria group (mAlb/Cr <25.0 mg/g), the microalbuminuria group (mAlb/Cr between 25-250 mg/g) and the macroalbuminuria group (mAlb/Cr>250 mg/g). The difference and correlation between RBP and other proteins were analyzed.

Results

With the increasing of mAlb excretory rate, the levels of the urine proteins were increasing. The levels in macroalbuminuria group were higher than those in microalbuminuria group, and the levels in normal albuminuria group and control group were lower than those in microalbuminuria group. The differences were significant in all groups ( P<0.01). The levels of mAlb, α1-MG and RBP in normal albuminuria group were higher than those in control group ( P<0.01), however, there was no difference in the levels of Ig, Tr and NAG between the two groups ( P>0.05). In microalbuminuria group, all the proteins were higher than those of normal albuminuria group ( P<0.01) except NAG ( P>0.05). RBP was positively correlated with mAlb, Ig, Tr,α1-MG and NAG( r=0.904, 0.707, 0.701, 0.392 and 0.301, P<0.01),but there was a bit of difference between each group. In normal albuminuria group, RBP was positively correlated with mAlb, Ig and NAG( r=0.746,0.178 and 0.224, P<0.01). In microalbuminuria group, RBP was positively correlated with mAlb, Ig and NAG( r=0.748, 0.225 and 0.268, P<0.01). In macroalbuminuria group,RBP was positively correlated with α1-MG ( r=0.374, P<0.01).

Conclusions

Urine RBP is one of the good indexes in evaluating early renal function injury.

Keyword: Retinol-binding protein; Early renal function injury; Urine

近年来, 由于生态环境的变化, 人们生活环境、生活节奏、饮食结构等多种因素的变化, 诸如高血压、冠心病、糖尿病、恶性肿瘤等成为常见病、多发病。而这些病最易累及肾脏, 引起肾脏损害。这些原发病伴发肾损害往往会在不知不觉中发生, 缺乏明显的临床特征, 因此早期实验室诊断就显得尤为重要。尿液检测中, 目前临床上常用的反映肾小球功能早期损伤的检测指标主要有:尿微量白蛋白(microalbumin, mAlb)、尿免疫球蛋白(Ig)和尿转铁蛋白(transferring, Tr); 反映肾小管早期损伤的指标有:尿α 1-微球蛋白(α 1-microglobulin, a1-MG)和尿N-乙酰-β -D氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β -D-glucosaminidase, NAG)。视黄醇结合蛋白(retinal-binding protein, RBP)被认为是近来发现的监测肾功能早期损伤的良好指标之一[1]。我们通过测定445例肾脏病患者的RBP、Ig、Tr、mAlb、a1-MG、NAG和肌酐(Cr)等指标, 分析尿液中RBP、mAlb、Ig、Tr、α 1-MG和NAG的含量变化以及RBP与上述蛋白的相关性, 以探讨尿RBP在肾功能损伤监测中的临床应用价值。

材料和方法
一、对象选择

选择2009年2月至6月浙江大学医学院附属第二医院门诊和住院患者中临床明确诊断的患者, 包括糖尿病、高血压、肾透析、系统性红斑狼疮、肿瘤化疗患者等, 共445例。其中男234例, 女211例, 年龄14~82岁。糖尿病和高血压诊断均符合1999年世界卫生组织(WHO)标准; 系统性红斑狼疮诊断符合1997年美国风湿病协会标准。根据尿mAlb/Cr比值将患者分为3组:mAlb/Cr比值< 25.0 mg/g为低值组, 即正常蛋白尿组, 共214例; mAlb/Cr比值在25~250 mg/g为中值组, 即微量蛋白尿组, 共132例; mAlb/Cr比值> 250 mg/g为高值组, 即大量蛋白尿组, 共99例。选取健康体检者102名作为对照组, 其中男59名、女43名, 年龄18~72岁, 均未发现肝、肾疾病及高血压病、糖尿病。

二、仪器和试剂

RBP采用免疫透射比浊法(上海北加生化试剂有限公司, 批号20090110); NAG采用4-对羟基苯基-2-吡啶基2-(乙酰胺)-2-脱氧-1-硫代-β -D-吡喃葡糖苷(4HP-NAG)底物法(日本和光纯药株式会社, 批号KQ547); Cr用肌氨酸氧化酶法(上海科华东菱诊断试剂公司, 批号20090120); 以上3个项目采用东芝40全自动生化分析仪检测。尿lg、Tr、mAlb、α 1-MG 测定采用美国贝克曼公司IMMAGE800全自动散射比浊仪检测, 其定标液、质控液试剂均为配套试剂, 尿样取新鲜晨尿8 h内完成检测。尿液质控采用患者新鲜混合尿液样本(自配, 分装保存于-20 ℃冰箱)。为减少机体尿生成量的变化对结果的影响, 所有尿样本同时测定尿Cr, 并以结果除以尿Cr值作为报告结果, 分别以mAlb/Cr、lg/Cr、Tr/Cr、α 1-M/Cr、NAG/Cr比值表示mAlb、Ig、Tr、α 1-MG、NAG的结果, 尿RBP也同样以Cr作校正。

三、方法

取患者随机尿20 mL, 3 000 r/min(离心半径12 cm)离心10 min分离上清, 取上清约5 mL, 按操作程序上机检测; 同时检测质控尿液, 收集并记录检测结果。

四、统计学方法

检测结果采用SPSS13.0 软件进行统计学分析, 以中位数(M) [四分位数(P25P75)]表示。多组间差异的比较采用Kruskal-Wallis检验, 2组间差异的比较采用Mann-Whitney 检验, RBP与其他尿蛋白之间相关性采用Spearman相关分析。

结 果

一、随着尿mAlb排泄率的增加, 尿液RBP、mAlb、Ig、Tr、α 1-MG及NAG含量明显增高, 大量蛋白尿组> 微量蛋白尿组> 正常蛋白尿组和对照组(P均< 0.01)。分组比较中, 正常蛋白尿组mAlb、α 1-MG、及RBP均高于对照组(P< 0.01), Ig、Tr和NAG 2组间无差异(P> 0.05); 微量蛋白尿组中除NAG与正常蛋白尿组无差异外(P> 0.05), 其他各蛋白均明显高于正常蛋白尿组(P< 0.01); 大量蛋白尿组各蛋白明显高于微量蛋白尿组。见表1。

表1 各组间尿mAlb、Ig、Tr、α 1-MG、NAG及RBP含量的比较[M(P25~P75)]

二、对RBP与其他蛋白的相关性分析发现, RBP与mAlb、Ig、Tr、α 1-MG、NAG均呈正相关[相关系数(r)分别为0.904、0.707、0.701、0.392、0.301, P均< 0.01]。进一步分组分析发现, 正常蛋白尿组中RBP与mAlb、α 1-MG、NAG呈正相关(r分别为0.746、0.178、0.224, P均< 0.01)。微量蛋白尿组中RBP与mAlb、Ig、NAG相关(r分别为0.748、0.225、0.268, P均< 0.01)。大量蛋白尿组中RBP与α 1-MG呈正相关(r=0.374, P< 0.01)。

讨 论

临床早期肾病是指出现mAlb尿, 即24 h尿白蛋白排泄率在30~300 mg/d(尿白蛋白排泄率持续在20~199 μ g/min, 正常人< 10 μ g/min, 尿mAlb/Cr比值为17~250 mg/g)[2]。目前评价肾功能早期损伤的指标可分为外源性和内源性两大类:前者包括菊粉和一些放射性核物质, 因测定操作复杂, 要求高, 临床上一般采用较少; 后者包括尿Ig、Tr、mAlb、α 1-MG和NAG等蛋白, 目前在临床诊断中应用较多。 尿Ig、Tr、mAlb、α 1-MG 的相对分子质量分别为160 000、77 000、69 000及23 000, 代表尿液大、中、小分子蛋白, 可明确反映肾小球及肾小管的受损情况[3]。尿mAlb、Ig和Tr为肾小球电荷选择性屏障损伤的主要标志蛋白质, mAlb与Tr在尿中出现时表明肾小球的“ 电荷屏障” 受到破坏[4]。Ig通常不能透过肾小球的滤膜。当尿中Ig含量增高, 表明肾小球的“ 机械屏障” 受破坏。原尿中的α 1-MG约99%被肾小管重吸收并分解, 当近曲小管受损时, 其排泄率明显增高。NAG广泛分布于机体各组织细胞内, 其中以近端小管含量最高。正常情况下肾小球不能滤过NAG, 当各种原因所致肾小管细胞损伤时, NAG释放至尿液导致其尿液中含量升高[5]。

RBP是一种低分子量的亲脂载体蛋白(相对分子质量为21 000), 广泛分布在人体血清、脑脊液、尿液中。RBP本身具有很好的稳定性, 在体内的含量相对恒定, 一般情况下, 正常人尿中RBP的含量很少。当肾小管的重吸收功能受损时, 尿RBP含量明显升高。为探讨RBP在肾功能早期损伤的作用, 本研究主要就尿RBP与尿Ig、Tr、mAlb、α 1-MG及NAG等蛋白质差异及相关性进行了分析。

由于尿中各微量蛋白浓度随着机体尿流率而变动, 本研究以尿Cr水平作为校正系数[6]。用各蛋白除以Cr的比值来报告尿蛋白的排出率, 以避免随机尿稀释或浓缩因素对测定结果产生的差异。从结果中可以看出, 随着尿蛋白排泄率的增加, RPB与尿液中Ig、Tr、mAlb、α 1-MG及NAG等反映肾功能损伤的指标一样, 随着肾功能受损程度的加重而明显升高。正常蛋白尿组中, mAlb、α 1-MG、及RBP升高(P< 0.01), 提示在出现明显蛋白尿之前, 肾小球滤过率可能已经有轻微受损, 肾小管的重吸收功能也有一定损伤。微量蛋白尿组中, 除NAG外, RPB与Ig、Tr、mAlb、α 1-MG均明显高于正常蛋白尿组与对照组, 表明此时肾功能已有明显受损, 但肾小管尚未出现实质性损伤。在微量蛋白尿组和正常蛋白尿中, RBP与mAlb、α 1-MG、NAG均有良好的相关性, 而在大量蛋白尿组中, RBP则仅与α 1-MG相关。可能的原因是:在肾功能受损的早期, 尿蛋白中主要以mAlb、Tr、α 1-MG和RBP升高为主。同时, 本研究主要以mAlb/Cr比值对患者样本进行分类, 在未出现临床蛋白尿的患者中(mAlb/Cr< 25.0 mg/g), 主要以α 1-MG和NAG的升高为主。对样本的来源分析发现, 此时样本主要以糖尿病和高血压患者为主, 而糖尿病肾功能损伤的患者早期肾小管损害往往早于肾小球 [7], 与本研究结果相一致。大量蛋白尿组中, 由于该组患者肾功能损伤程度不一, 尿液中各蛋白含量变化的区间很大, 故此时RBP与其他蛋白相关较差; 而只与α 1-MG呈正相关, 这也与RBP作为反映肾小管重吸收功能的指标相一致[810]。

结果表明, 在肾功能受损的早期, RBP能较为敏感的反映肾功能的损伤, 并与尿液中其他蛋白具有良好的相关性。尿RBP检测是评价肾功能早期损伤的良好指标, 具有较好的临床应用价值。

The authors have declared that no competing interests exist.

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