速率散射比浊法测定血清可溶性转铁蛋白受体及临床应用
引用本文
徐克, 池胜英, 陈绵平. 速率散射比浊法测定血清可溶性转铁蛋白受体及临床应用. 25(8): 609-611
XU Ke, CHI Shengying, CHEN Mianping. Evaluation and clinical application of determining serum soluble transferrin receptor by rate nephelometry. Labratory Medicine, 25(8): 609-611
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XU Ke, CHI Shengying, CHEN Mianping. Evaluation and clinical application of determining serum soluble transferrin receptor by rate nephelometry. Labratory Medicine, 25(8): 609-611
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速率散射比浊法测定血清可溶性转铁蛋白受体及临床应用
作者简介：徐克,男,1972年生,学士,副主任技师,主要从事临床免疫检验工作。
摘要
目的
评价速率散射比浊法测定血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR),并探讨sTfR在区分缺铁性贫血(IDA)与其他类型贫血中的作用。
方法用速率散射比浊法测定IDA组、其他贫血组及正常对照组的血清sTfR,并按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)评价方案系统评价其重复性、回收率、线性范围和溶血、脂血、胆红素对sTfR测定的干扰影响。
结果速率散射比浊法测定血清sTfR在0.73~8.23 mg/L内线性良好(线性回归方程为 Y=1.031 X-0.12, r=0.997 8),批内和批间变异系数( CV)均<4%,回收率分别为94.2%和98.6%。干扰试验发现,胆红素<325 μmol/L、三酰甘油<19.8 mmol/L和血红蛋白<5 g/L对测定结果无明显干扰。IDA组血清sTfR的浓度为(2.89±1.31)mg/L,其他贫血组血清sTfR的浓度为(1.53±1.42)mg/L,正常对照组sTfR的浓度为(0.84±0.15)mg/L。与其他贫血组及对照组比较,IDA组血清sTfR明显升高,受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)达0.939( P<0.01)。
结论速率散射比浊法检测血清sTfR简单、快速、检测线性范围宽,能有效抵抗溶血、脂血、黄疸的干扰,在IDA的诊断及与其他贫血的鉴别诊断上有明显的实际应用价值,值得临床推广。
关键词:
速率散射比浊法; 可溶性转铁蛋白受体; 缺铁性贫血
中图分类号:R446.61
文献标志码:A
文章编号:1673-8640(2010)08-0609-03
Evaluation and clinical application of determining serum soluble transferrin receptor by rate nephelometry
Abstract
Objective
To evaluate the diagnostic value of determining serum soluble transferrin receptor (sTfR) by rate nephelometry and investigate the significance of differentiating iron deficiency anemia (IDA) from other types of anemia.
MethodssTfR was detected by rate nephelometry in patients with IDA, in patients with other anemia and in healthy subjects.The reproducibility,recovery rate, linear range and the influence of interference on sTfR detection by hemolysis, blood lipid and bilirubin were analyzed according to the Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI) documents.
ResultsThe good linear range was between 0.73-8.23 mg/L (the linear regression equation: Y=1.031 X-0.12, r=0.997 8). Both of the within-run coefficient of variation ( CV) and the between-run CV were <4%.The recovery rates were 94.2% and 98.6% respectively. The results of interference test were bilirubin <325 μmol/L, triglyceride <19.8 mmol/L and hemoglobin <5 g/L. There was no obvious interference on the results of the detection. The levels of sTfR were (2.89 ± 1.31) mg/L in patients with IDA, (1.53 ± 1.42) mg/L in patients with other anemia and (0.84 ± 0.15) mg/L in healthy subjects. The level of sTfR in patients with IDA was obviously higher than that in patients with other anemia and healthy subjects.Its area under receiver operating characteristic (ROC) curve (AUC) was 0.939 ( P<0.01).
ConclusionsRate nephelometry is a simple and rapid method for detecting sTfR with wide linear range and high resistance to hemolysis,blood lipid and icterus. It could be used to diagnose and differentiate IDA from other anemia.
Keyword:
Rate nephelometry; Soluble transferrin receptor; Iron deficiency anemia
贫血患者铁状态的评价参数有许多, 传统实验室指标包括血清铁、铁蛋白(SF)、总铁结合力、红细胞参数以及骨髓铁染色。近来推荐的血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)被认为能准确反应机体的缺铁状况, 可以区分缺铁性贫血(IDA)与慢性病所致贫血[1]。目前, 国内以酶联免疫吸附试验(ELISA)测定sTfR多见。该法为手工操作, 没有一个明确的标准, 精密度和稳定性均不佳[2]。本研究采用芬兰Orion Diagnostica公司的sTfR试剂, 在特定蛋白分析仪上以速率散射比浊法测定血清sTfR, 并做方法评价及临床应用。
材料和方法
一、研究对象
标本来自2007年11月至2008年9月温州市第二人民医院就诊的患者, IDA诊断标准采用张之南主编的第2版《血液病诊断及疗效标准》。IDA组38例, 男22例, 女16例, 平均年龄(44± 18)岁; 其他贫血组30例, 男16例, 女14例, 平均年龄(49± 16)岁; 正常对照组40名, 男26名, 女14名, 平均年龄(50± 14)岁, 均为体检健康者。上述各组研究对象空腹抽血2 mL, 分离血清置-35 ℃保存。
二、仪器与试剂
美国BECKMAN COULTER IMMAGE特定蛋白分析仪, sTfR试剂由芬兰Orion Diagnostica公司提供(批号397001)。使用配套多点定标液。
三、仪器分析参数设置
采用自定义试剂盒。标本量20 μ L; 反应缓冲液0 μ L; 试剂 A 10 μ L; 试剂B 235 μ L; 单位为mg/L; 方法为近红外颗粒速率法免疫分析(NIPIA); 反应时间为3 min。
四、统计学方法
采用SPSS 16.0统计学软件包, 对变量进行正态性检验及方差齐性检验, 多组用单因素方差分析, 以LSD检验, 2组之间用配对资料t检验。使用受试者工作特征(ROC)曲线描述sTfR 的诊断效率。
结 果
一、方法性能评价
1. 不精密度 批内重复性试验:取高、中、低3种浓度sTfR血清各测定20次, 计算批内变异系数(CV)。批间重复性试验:连续测定10 d, 计算批间CV。见表1。
2. 线性评价试验 取sTfR浓度为0.73、8.23 mg/L血清各1份, 按照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)制定的评价方案[3]配成5种浓度:低值标本为1号, 高值标本为5号, 二者3∶ 1混匀为2号, 等份混匀为3号, 1∶ 3混匀为4号; 各浓度用本法重复测定4次, 取均值为测定值, 本组数据未发现离群值, 线性回归方程为Y=1.031X-0.12, r=0.997 8(P< 0.01)。由此可见采用速率散射比浊法测定血清sTfR在0.73~8.23 mg/L内线性良好。
 | 表1 速率散射比浊法测定血清sTfR的重复性试验结果 |
3. 回收试验 取1份sTfR为2.12 mg/L标本分别加入5.53和8.31 mg/L标准液做回收试验, 回收率分别为94.2%和98.6%。
4. 比对试验 与日立7170生化分析仪(X)上的结果作比较。每天选取8份新鲜标本在2台仪器上测定2次, 取其均值, 连续测定5 d, 共计40对结果。本研究方法与日立7170生化分析仪测定sTfR的结果相关性好[Y=0.995X-0.013, r=0.998 0, P< 0.05], 而且结果一致性良好(P> 0.05), 斜率和截距均符合要求。
5. 干扰试验 添加胆红素、脂肪乳、血红蛋白检测该法抗干扰能力, 结果见表2。以偏差系数< 10%判断为无干扰, 结果表明当胆红素< 325 μ mol/L、三酰甘油< 19.8 mmol/L、血红蛋白< 5 g/L时, 对测定结果无明显影响。
| 表2 干扰试验结果 |
6. 正常参考范围 经各科及实验室检查为正常的健康体检者40名, 血清sTfR水平为(0.84± 0.15)mg/L, 男女间差异无统计学意义(P> 0.05)。
二、临床应用结果
IDA患者组血清sTfR的浓度为(2.89± 1.31)mg/L, 其他贫血组血清sTfR的浓度为(1.53± 1.42)mg/L, 正常对照组sTfR的浓度为(0.84± 0.15)mg/L。IDA组同另外2组比较, 差异均有统计学意义(P< 0.01)。ROC曲线下面积(AUC)为0.939[95%可信区间(CI):0.885~0.993], 与AUC= 0.5时比较, 差异具有统计学意义(P< 0.01), 说明sTfR指标可以用来判断IDA。为了确定sTfR判断IDA的最佳临界点。在ROC曲线上找到敏感性和特异性均较高的一点, 该点所对应的原始值即为最佳的诊断临界点, 本试验得出sTfR(速率散射比浊法)> 1.73 mg/L为判断IDA的最佳临界点, 此点对应的敏感性为94.3%, 特异性为91.2%, 阳性似然比为10.71。
讨 论
实验室在诊断IDA中有多种铁参数, 临床应用较普遍的一些参数如血清铁和SF均存在一些不确定因素, 如SF是一种急性时相蛋白, 可影响临床判断, 血清铁特异性较差, 多种疾病都可导致血清铁浓度下降。最近推荐的血清sTfR被认为比传统指标优越, 可以不受体内炎症、肿瘤、性别、体内激素状态等因素的影响, 可以区别IDA与慢性病贫血[1, 4]。转铁蛋白受体(TfR)是一种细胞膜转运蛋白, 广泛分布于机体多种细胞, 在增殖活跃的肿瘤细胞、幼红细胞及胎盘绒毛滋养层合体细胞膜上TfR数目尤为丰富, 而sTfR是存在于血清中完整的TfR单体的水解片段。组织细胞的生成发育都需要铁的参与, 而组织细胞摄取铁是通过细胞表面的TfR介导, 以胞饮内吞模式进行, 即携带铁的转铁蛋白(Tf)与细胞表面的TfR结合形成复合体, 以胞饮的形式进入细胞, 细胞内pH值降至5.5或更低时铁被释放进入细胞质, 然后Tf-TfR经胞吐作用返回至细胞表面。TfR的调节分为转录和转录后2个阶段, 转录后TfR的mRNA受到细胞内铁浓度的调控, 所以测定血清sTfR可以反映红细胞缺铁情况和红细胞生成速率[5]。我们的结果证实了这一观点, 与其他贫血组及对照组比较, IDA组血清sTfR明显升高, AUC达0.939, 说明血清sTfR诊断IDA的效率很高。
测定sTfR有ELISA、放射免疫法和免疫比浊法。前2种方法只能批量检测, 存在重复性差、检验不稳定、难以自动化、没有一个明确的标准等缺点, 导致sTfR在实际中未得到充分应用。为此, 我们利用方法学比较先进的速率散射比浊法, 采用芬兰Orion Diagnostica公司的sTfR试剂, 该试剂采用乳胶增强抗体(结合有单克隆抗体的聚苯乙烯珠)技术, 乳胶增强抗体明显提高了检测的敏感性和稳定性, 重复性试验证明该法在特定蛋白分析仪的批内和批间CV值均< 4%。本研究测定结果与试剂盒说明书内推荐的透射免疫比浊法(即生化分析仪测定)相关性好, 两者差异无统计学意义(P> 0.05), 对黄疸、溶血、脂浊的抗干扰能力以及检测线性范围等均符合临床要求。因此, 通过速率散射比浊法可以方便、快捷而准确地检测出血清sTfR, 为临床诊断IDA以及判断慢性病贫血是否合并IDA提供有力帮助, 值得临床推广。
The authors have declared that no competing interests exist.
参考文献
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