引用本文
陈慧英, 肖艳群, 张健, 陆银华, 蒋玲丽, 简敏华, 邵维杰. 酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨. 25(6): 447-450
CHEN Huiying, XIAO Yanqun, ZHANG Jian, LU Yinhua, JIANG Lingli, JIAN Minhua, SHAO Weijie. The identification of the retesting range of the HBsAg borderline sample detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Labratory Medicine, 25(6): 447-450  
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酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨
陈慧英, 肖艳群, 张健, 陆银华, 蒋玲丽, 简敏华, 邵维杰
上海市临床检验中心,上海 200126

作者简介：陈慧英,女,1953年生,副主任技师,主要从事免疫学检验及质量控制研究。

基金:上海市科委基础研究重点项目（08JC1417900）
摘要
目的

探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)临界样本的复检范围。

方法

收集用ELISA初检HBsAg吸光度( A)值在0.07~2.00范围内的样本,用ELISA复检;初、复检结果不符和2次结果均在临界的样本,用微粒子酶免疫法(MEIA)进行复核,并用中和法做确认试验。统计分析结果,选择一个合适的样本复检范围。

结果

样本初检结果 A值在0.070~0.104、0.105~0.300范围内, ELISA复检符合率分别为85.2%、56.9%; MEIA与ELISA复检结果的符合率分别为90.1%、93.9%。 A值在0.301~0.500、0.501~1.000、1.001~1.500、1.501~2.000范围内, ELISA复检符合率依次为88.3%、93.8%、99.1%、99.2%, MEIA与ELISA复检结果的符合率为100%。确认试验和MEIA复检结果的符合率样本测定值(S)/阴性对照值(N)在1.50~1.99、2.00~5.00,分别为50.0%和92.7%,其他组均在97.1%以上。

结论

在操作规范化的实验室内,ELISA初检HBsAg复检范围宜选择样本 A值在0.070~0.300范围内;大批量体检时,复检范围应放宽至0.070~0.500;乙肝标志物模式异常的样本也需复检。规定适宜的复检范围既能确保检测结果的准确性,又能避免人力和试剂等物品的浪费。

关键词: 乙型肝炎病毒表面抗原; 临界样本; 酶联免疫吸附试验; 微粒子酶免疫法; 确认试验
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)06-0447-04
The identification of the retesting range of the HBsAg borderline sample detected by enzyme-linked immunosorbent assay
CHEN Huiying, XIAO Yanqun, ZHANG Jian, LU Yinhua, JIANG Lingli, JIAN Minhua, SHAO Weijie
Shanghai Center for Clinical Laboratory,Shanghai 200126, China
Abstract
Objective

To identify the retesting range of the hepatitis B surface antigen (HBsAg) borderline sample detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Methods

The HBsAg samples were selected by ELISA with absorbance (A) value ranged from 0.07 to 2.00, and were retested by ELISA. The unproper samples and samples in borderline in both tests were selected and detected by microparticle enzyme immunoassay (MEIA) and the results were confirmed by neutralization test. The retesting range was analyzed statistically and defined.

Results

For A value ranged from 0.070 to 0.104, the ELISA coincidence rate was 85.2%. For A value ranged from 0.105 to 0.300, the coincidence rate was 56.9%. The coincidence rates on MEIA and ELISA were 90.1% and 93.9%, respectively. For A value within 0.301 - 0.500, 0.501 - 1.000, 1.001 - 1.500 and 1.501 - 2.000, the ELISA coincidence rates were 88.3%, 93.8%, 99.1% and 99.2%, respectively. The MEIA and ELISA coincidence rates were all 100%. While sample measured value (S)/negative control value (N) range at 1.50- 1.99 and 2.00 -5.00, the coincidence rates on confirmatory test and MEIA were 50.0% and 92.7%. For other range,the coincidence rates were above 97.1%.

Conclusions

The A value of the retesting range by ELISA is considered appropriate from 0.070 to 0.300 under a standardized laboratory condition. For health examination,the range can be enlarged to 0.070 - 0.500. Samples with abnormal hepatitis B virus marker model should also be retested. The appropriate retesting range can assure the accuracy of the testing results and can avoid the waste of manpower and reagents.

Keyword: Hepatitis B surface antigen; Critical sample; Enzyme-linked immunosorbent assay; Microparticle enzyme immunoassay; Confirmatory test

乙型病毒性肝炎是重大的传染病之一, 我国是乙型病毒性肝炎的高发区, 人群感染率接近10%[1, 2], 严重威胁着人们的健康。乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)是乙型肝炎的重要血清学标志物, 阳性即表明受检者感染乙型肝炎病毒(HBV), 是临床诊断的重要依据[3]。目前我国临床实验室广泛采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg, 其有操作简便、快速、成本低的优势, 但由于ELISA方法有诸多影响检测结果的因素[4], 导致检测结果的重复性较差, 特别是有一部分处于阴、阳性判断值(cut off值)临界样本就会产生假阳性或假阴性的结果[5]。为解决此问题, 目前有些实验室采取极端的方法, 将所有的阳性样本全部复检, 导致大量的人力和试剂的浪费; 反之是所有的临界样本都不复检, 导致假阳性或假阴性的报告发出。本研究从各级医院的实验室收集了用ELISA初检HBsAg结果吸光度(A)值在 0.07~2.00范围内的样本, 用相同和不同的方法进行复检和确认, 选择了一个较为合适的样本复检范围, 既能确保检测结果的准确性, 为临床提供可靠的诊断依据, 又能避免人力和试剂等物品的浪费。

材料和方法
一、材料

1. 样本 2007年5月至2010年1月, 从上海市临床检验中心和各级医院的实验室收集用ELISA初检HBsAg结果A值在0.07~2.00范围内的样本1 698例, 其中男1 192例, 女506例, 年龄2~92岁。

2. 试剂和仪器 上海科华公司和上海荣盛公司的ELISA快速检测HBsAg试剂盒, Labstem MK3酶标仪; 雅培公司的微粒子酶免疫法(MEIA)HBsAg检测试剂和确认试剂, AXSYM全自动酶免疫荧光分析系统。

3. ELISA检测 HBsAg室内质控品 浓度为2 ng/mL, 由上海市临检中心提供; MEIA和确认试验的室内质控品由检测试剂配套提供。

二、方法

1. 用ELISA初检HBsAg结果A值在0.07~2.00范围内的样本, 用同一品牌的ELISA试剂复检。

2. 抽选 ELISA初检HBsAg和复检结果不符(阴性、阳性)、2次检测结果A值均在0.070~0.104或0.105~0.300范围内, 血清量较多的样本, 用MEIA检测。

3. MEIA检测HBsAg结果为弱阳性或临界阴性的样本, 即:其样本测定值(S)/阴性对照值(N)在1.00~10.00的样本, 用AXSYM全自动酶免疫荧光分析系统的中和法确认。

4. 结果判断 本研究中ELISA检测的阴性对照A值均< 0.050, 因此, 结果cut off值≥ 0.105为阳性; MEIA的结果cut off值S/N ≥ 2.00为阳性; 中和法确认结果cut off值S/N ≥ 1.50且抑制率≥ 50.0%为阳性。

5. 上述方法均严格按操作规程操作。

结 果
一、1 698例样本用ELISA初、复检HBsAg结果见表1。
表1 1 698例样本ELISA初、复检HBsAg(%)
二、ELISA初、复检HBsAg结果均在临界范围内或2次检测结果不符的样本, 用MEIA检测, 结果见表2。
表2 MEIA检测 ELISA初、复检HBsAg结果不符或均为临界样本(%)
三、MEIA检测HBsAg结果呈弱阳性反应或临界阴性的样本, 用AXSYM中和法做确认试验, 结果见表3。
表3 AXSYM中和法确认试验的结果(%)
四、MEIA与ELISA复检HBsAg结果不符或均处于临界的样本, 检测乙肝标志物其他4项, 以了解这些样本乙肝标志物的状态, 表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体分别以2、3、4、5表示, 结果见表4。
表4 MEIA与ELISA复检HBsAg结果不符或一致的样本乙肝标志物的状态
讨 论

随着广大民众文化素质及生活水平的不断提高, 对医疗保健的关注度逐年提高, 随之对临床检验的要求也越来越高。特别是近几年医疗保险制度的改革, 人们可以自主选择到不同的医院就诊, 有些还可以跨省市就诊。然而, 这就产生了同一项目, 不同医院出具不同结果的报告, 导致医患纠纷。为减少医疗费用的支出, 卫生部有关文件要求部分检验项目互认。HBsAg是临床诊断乙型肝炎常规体检和血液筛查的必检项目, 也是应予以互认的检验项目之一。

目前国内临床实验室大多采用ELISA检测HBsAg。我国自1995年开始对ELISA检测HBsAg试剂实行批批检制度后, 试剂质量有了很大的提高。但由于该方法的局限, 样本的前处理和操作误差都会造成结果的偏差, 特别是一部分处于结果cut off值临界的样本, 结果的准确性就较差。

表1结果显示:样本检测结果A值在0.105~0.300和0.301~0.500阳性范围内, 初检和复检的符合率分别为56.9%和88.3%。统计分析结果, 发现这部分样本大多来自于一些大批量的体检样本, 这些样本通常是抽血当天检测、发报告。上海市临床检验中心曾有过体检样本初检188份阳性, 复检后的符合率仅为16%。分析原因是由于血液样本的凝集不完全所致[6]。在本研究中, 这部分样本未统计在内。因此ELISA检测HBsAg, 首先要把好样本的前处理关, 特别是采样和检测分处二地的实验室。

表2结果显示:不同范围内初、复检不符的样本用MEIA复检, ELISA复检结果的阳性漏检率和假阳性率均在10.0% 左右。不同的复检方法之间的差异是由于敏感性和特异性的差异所造成的, 也有可能是HBV的变异所导致的[7~9]。

临床在考核药物疗效和预测愈后情况时, 采用发光法检测乙肝标志物。进口发光法试剂检测HBsAg, 结果为阳性时, 要求做双孔复检, 双孔复检结果不一致的, 再做确认试验。由于检测成本等种种原因, 国内目前还不能做到这点。表3结果显示:MEIA检测结果S/N值在1.50~5.00范围内的样本需复检, 可避免HBsAg含量较低或加样针的污染等原因产生的结果误差。

表4结果显示:初、复检均在临界范围内, 初检为阴性复检结果为阳性的样本, 约有85%的样本处于乙肝“ 小三阳” 状态。造成结果偏差的主要原因是, 病程在转换过程中, HBsAg含量较低; 检测试剂的敏感性偏低[10, 11]。

本研究结果显示:复检能提高检验结果的准确率, 各级实验室应根据本单位的具体情况制定复检规程。在保证检测过程规范化操作的前提下, 综合考虑检测结果的准确性、检测成本和工作量等多种因素, ELISA检测HBsAg, 复检范围以cut off值× 0.7≤ 样本A值≤ cut off值× 3为宜。简而言之, 当ELISA检测HBsAg的阴性对照A值均≤ 0.05时, 复检范围即为样本A值在0.070~0.300; 当检测大批量体检样本时, 复检范围应放宽至0.070~0.500。

通常情况下, HBsAg阳性时应加做乙肝标志物其他4项的检测, 从中可发现一些高值的假阳性结果; 当出现乙肝标志物异常模式的结果时也应复检, 从中可发现一些漏检的结果。当初、复检HBsAg结果不符时, 也可加做乙肝标志物其他4项, 以辅助判断HBsAg的检测结果。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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