引用本文
李启亮, 李玉清, 靳剑芸. 实验前相关因素对测定新生儿血浆PT、APTT的影响. 25(1): 33-35
LI Qiliang, LI Yuqing, JIN Jianyun. The influence factors of anticoagulant, centrifugation and icterus on the test of plasma prothrombin time and activated partial thromboplastin time in newborns. Labratory Medicine, 25(1): 33-35  
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实验前相关因素对测定新生儿血浆PT、APTT的影响
李启亮, 李玉清, 靳剑芸
北京儿童医院检验中心,北京 100045

作者简介：李启亮,女,1979年生,硕士,技师,主要从事血液学检验工作。

摘要
目的

探讨抗凝、离心、黄疸等实验前相关因素对测定新生儿血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响,从而进一步优化试验条件。

方法

本试验选取100名外科术前体检无异常发现的新生儿,所有入选新生儿均无血栓性疾病及出凝血功能障碍,无心、肾、肝等重要脏器疾病。将此100名新生儿分为3组,分别为抗凝剂比例影响组(包括抗凝剂比例9∶1组和抗凝剂比例校正组)、离心条件影响组[2 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min;3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min组;2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min组]、生理性黄疸影响组。利用STAGO全自动血凝分析仪对以上几个处理组的标本进行检测,并且使用SPSS 13.0统计软件对得到的数据进行比较,从而逐步优化实验条件。

结果

在相同离心条件下,抗凝剂9∶1组的PT、APTT明显延长。在抗凝剂比例经过校正的情况下,2 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min组的PT、APTT明显延长;3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min组中大部分标本PT、APTT正常,个别出现溶血的标本PT明显延长。2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min是新生儿检测PT、APTT的最适离心条件。在抗凝剂比例经过校正,2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min的条件下,生理性黄疸组与无生理性黄疸组的PT、APTT比较差异无统计学意义。

结论

在处理新生儿血浆标本时,应进行抗凝剂比例校正,离心转速不宜过快,否则容易引起溶血,从而引起实验误差。可以通过适当降低离心速度,延长离心时间来避免这种情况的发生。生理性黄疸基本不影响PT、APTT的测定。

关键词: 新生儿; 凝血酶原时间; 活化部分凝血活酶时间
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2010)01-0033-03
The influence factors of anticoagulant, centrifugation and icterus on the test of plasma prothrombin time and activated partial thromboplastin time in newborns
LI Qiliang, LI Yuqing, JIN Jianyun
Laboratory Center, Beijing Children's Hospital,Beijing 100045, China
Abstract
Objective

To study the influence of anticoagulant,centrifugation and icterus on the tests of plasma prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) in newborns and further optimize the experimental conditions of PT and APTT.

Methods

100 healthy newborns without thrombotic disease, disorder of blood clotting, cardiac disease, renal disease and liver disease were selected and divided into 3 groups (influence factor of anticoagulant, influence factor of centrifugation and influence factor of physiologic icterus). The group influence factor of anticoagulant included 2 groups (the anticoagulant ratio of 9∶1 group and the anticoagulant ratio of correction group). The group influence factor of centrifugation included 3 groups (2 000 r/min (centrifugal radius=10 cm) 10 min group; 3 000 r/min (centrifugal radius=10 cm) 10 min group and 2 500 r/min (centrifugal radius=10 cm) 15 min group). The samples were detected by STAGO automatic blood coagulation analyzer. The results were compared by SPSS 13.0. The conditions were optimized step by step.

Results

PT and APTT in the anticoagulant ratio of 9∶1 group were obviously longer than those in the anticoagulant ratio of correction group under the same centrifugation condition. PT and APTT in the group of 2 000 r/min (centrifugal radius=10 cm) 10 min were obviously longer than those in the other groups. Most results in the group of 3 000 r/min (centrifugal radius=10 cm) 10 min were normal, but the results of PT in some haemolytic samples were obviously longer. The optimum condition for centrifugation was 2 500 r/min (centrifugal radius=10 cm) 15 min in the tests of PT and APTT. There was no significant difference of PT and APTT between the groups of physiologic icterus and no physiologic icterus.

Conclusions

It is very important to correct the volume of anticoagulant for the plasma samples of the newborns. If the speed of centrifugation is too fast, the samples are easy to hemolysis. The haemolytic samples can interfere the results of PT and APTT. The problem can be solved by reducing the speed and extending the time of centrifugation. The physiologic icterus samples do not interfere the results of PT and APTT.

Keyword: Newborn; Prothrombin time; Activated partial thromboplastin time

血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)是检测外、内源性凝血系统功能最常用的筛选指示,不仅是术前患者必做项目,也是测定机体止血与凝血系统病理变化、指导心肌梗死的溶栓治疗、人工瓣膜的抗凝剂使用及用药剂量选择的重要指标。很多文献表明测定成人的PT、APTT试验的影响因素颇多[ 1~ 3],但报道测定新生儿血浆PT、APTT影响因素的文献比较少,我们从标本的抗凝比例、离心的条件以及新生儿生理性黄疸是否影响新生儿血浆PT、APTT的测定等方面作了探讨, 从而有利于实验条件的优化与改良。

材料和方法
一、材料

1. 标本来源 标本均来自于北京儿童医院外科术前体检新生儿,年龄2~28 d。其血液分析均正常,无血栓性疾病及出凝血功能障碍,无心、肾、肝等重要脏器疾病。

2. 仪器与试剂 法国STAGO全自动血凝分析仪及配套试剂和质控品。

二、方法

1. 抗凝比例对新生儿PT、APTT测定的影响 使用109 mmol/L的枸橼酸钠,分别按照抗凝剂比例9∶1和抗凝剂比例540∶(100-新生儿红细胞比容)[ 4]抽取30名新生儿静脉血后,以成人检测PT、APTT最适离心条件3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min[ 2~ 5],上机检测PT、APTT。其中发生溶血的3例标本不参与检测和比较。所有实验过程均在20 ℃下2 h内完成。

2. 离心条件对新生儿PT、APTT测定的影响 使用109 mmol/L的枸橼酸钠,按照抗凝比例540∶(100-新生儿红细胞比容)抽取30名新生儿静脉血后平均分为3份,分别以2 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min;3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min;2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min,上机检测PT、APTT。所有实验过程均在20 ℃下2 h内完成。

3. 生理性黄疸对新生儿PT、APTT测定的影响 使用109 mmol/L的枸橼酸钠,按照抗凝比例540∶(100-新生儿红细胞比容)抽取40名新生儿静脉血,其中包括20名生理性黄疸新生儿。按照2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min,上机检测PT、APTT。所有实验均在20 ℃下2 h内完成。

三、统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,所有数据均用 x- ±s表示,2个抗凝剂比例影响组之间采用配对 t检验;3个离心影响组之间采用方差分析;生理性黄疸组与无黄疸组之间的比较采用两独立样本 t检验。

结果

结果见 表1、2、3。

表1 抗凝比例对新生儿PT、APTT测定的影响
表2 离心条件对新生儿PT、APTT测定的影响
表3 生理性黄疸对新生儿PT、APTT测定的影响
讨论

多年来,PT、APTT检测的标准化和质量控制一直是大家关注的热点,而且PT、APTT检测的影响因素很多,检测不同人群的PT、APTT时有不同的注意事项。我们系统地研究了抗凝剂比例、离心条件以及有无生理性黄疸对测定新生儿血浆PT、APTT的影响。

从结果中可以看出,抗凝剂比例对新生儿PT、APTT的测定具有明显的影响。其重要原因在于新生儿的红细胞压积比较大,新生儿的血液往往是细胞多、血浆少。因此,如果按照成人检测PT、APTT的最适抗凝比例9∶1[ 1]进行抗凝后,新生儿的血浆被抗凝剂稀释,从而导致检测到的PT、APTT明显延长。目前预留抗凝剂的真空采血管被广泛应用,极大地简化了护理人员的工作流程。但是随之而来也带来一些问题,其中重要的一点就是新生儿抗凝剂比例的调整往往被忽视。对于红细胞压积比较大的标本(红细胞压积>0.7 L/L)时由于其血浆量少,抗凝剂的量相对过剩,过剩的抗凝剂可使PT、APTT明显延长。此时需要利用公式取血量=540∶(100-新生儿红细胞比容)× 抗凝剂量来校正取血量,通过加大取血量来调整抗凝比例。

离心条件对新生儿PT、APTT的测定具有明显的影响。2 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min时,由于离心不够充分,导致PT、APTT的结果明显延长。这可能是由于离心力度不充分,血液中的血小板存在于血浆中,从而激活内、外源凝血因子,导致结果偏差。很多文献报道检测成人PT、APTT的最适宜离心条件是3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min[ 2, 5]。本实验使用此条件,检测新生儿标本发现,大部分标本结果可信。但是此离心条件下部分标本出现溶血,这可能是由于新生儿红细胞中富含血红蛋白,红细胞较成年人饱满,所以在3 000 r/min(离心半径为10 cm)离心10 min条件下,容易发生溶血。一旦发生溶血后,红细胞磷脂表面释放进入血浆时激活凝血因子,从而使得PT的结果明显延长[ 6]。新生儿红细胞中富含血红蛋白易于沉降,所以我们选用比较慢的离心速度和比较长的离心时间来充分沉降血浆中的各种细胞和血小板等,经过实验发现2 500 r/min(离心半径为10 cm)离心15 min是检测新生儿PT、APTT最适宜的离心条件。

本研究发现,生理性黄疸血浆对测定PT、APTT无显著影响。这主要是由于 STAGO全自动血凝仪以磁珠凝固法检测PT、APTT等值,该方法直接模拟人体血液凝固变化过程,以钢珠运动衰减50%为凝固终点,计算系统根据小钢珠振荡幅度精确测试凝固时间及含量,消除了光学法的干扰因素,因此避免了生理性黄疸血浆对测定PT、APTT的影响。此部分结果、结论仅限于STAGO全自动血凝仪,新生儿生理性黄疸对于其他机型和方法是否有影响,还有待于进一步探讨。

除上述3种最主要的实验前处理因素之外,新生儿检测PT、APTT的影响因素还有很多。比如在给新生儿采血时不宜加压过重和抽取过快,防止采样过程中的溶血。在采集时,应该舍弃前1 mL血或不使用第1管血,防止由于针刺等机械刺激而导致组织因子释放影响试验结果等。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 李宏魁, 邹掌玉, 吴雄. 抗凝剂比例对APTT检测的影响分析[J]. 实用医技杂志, 2007, 14(7): 840-841. [本文引用:2]
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