引用本文
熊怡淞, 张玲珍, 林志跃, 梁艳, 杨再兴, 周运恒, 荣光华, 仲人前. 流式细胞术检测冠心病患者外周血白细胞唾液酸黏附素的表达及临床意义. 2009, 24(9): 667-670
XIONG Yisong, ZHANG Lingzhen, LIN Zhiyue, LIANG Yan, YANG Zaixing, ZHOU Yunheng, RONG Guanghua, ZHONG Renqian.. Detection of the expression of Siglec-1 on peripheral blood leukocytes in patients with coronary heart disease by flow cytometry and its clinical significance. Labratory Medicine, 2009, 24(9): 667-670  
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流式细胞术检测冠心病患者外周血白细胞唾液酸黏附素的表达及临床意义
熊怡淞, 张玲珍, 林志跃, 梁艳, 杨再兴, 周运恒, 荣光华, 仲人前
第二军医大学附属长征医院实验诊断科,上海 200003

作者简介:熊怡淞,男,1983年生,硕士,主要从事冠心病与免疫炎症研究。

通讯作者:仲人前,联系电话:021-81886071。

基金:国家高科技研究发展计划(863计划,2006AA02Z496); 上海市科学技术委员会优秀学科带头人基金资助项目(07XD14013)
摘要
目的

观察唾液酸黏附素(Siglec-1)在冠心病(CHD)患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达水平,并探讨其在冠状动脉粥样硬化发病过程中的作用。

方法

流式细胞术检测57例CHD患者及38名正常对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞Siglec-1的百分率;生化常规测定所有入选者血脂水平。

结果

流式细胞仪检测发现,Siglec-1在正常对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达;CHD组单核细胞Siglec-1阳性率为(12.7±2.4)%,显著高于正常对照组[(1.0±0.3) %, P<0.01],而CHD血脂正常组和血脂异常组的Siglec-1阳性率差异无统计学意义。

结论

作为单核巨噬细胞激活的标志,Siglec-1在外周血淋巴细胞和中性粒细胞上不表达,在正常人单核细胞上表达很低。CHD患者单核细胞Siglec-1表达明显升高,提示CHD患者外周血单核细胞已经激活,发生巨噬细胞化,Siglec-1在单核细胞黏附血管内皮及CHD的发病过程中可能起重要作用。

关键词: 唾液酸黏附素; 冠状动脉粥样硬化; 流式细胞术
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)09-0667-04
Detection of the expression of Siglec-1 on peripheral blood leukocytes in patients with coronary heart disease by flow cytometry and its clinical significance
XIONG Yisong, ZHANG Lingzhen, LIN Zhiyue, LIANG Yan, YANG Zaixing, ZHOU Yunheng, RONG Guanghua, ZHONG Renqian.
Department of Laboratory Diagnostics, Chang-zheng Hospital, the Second Military Medical University, Shanghai 200003, China
Abstract
Objective

To investigate the expression of sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin-1 (Siglec-1) on peripheral blood lymphocytes, monocytes and neutrophils in patients with coronary heart disease (CHD) and explore the role of Siglec-1 in coronary atherogenesis.

Methods

The percentage of Siglec-1 in lymphocytes, monocytes and neutrophils was determined by flow cytometry in 57 CHD patients and 38 healthy controls. The levels of serum lipids were determined by clinical chemistry analyzer.

Results

Siglec-1 protein was not found on lymphocytes and neutrophils in both CHD patients and healthy controls. The positive rate of Siglec-1 on monocytes in CHD patients was significantly higher than that in healthy controls[(12.7±2.4)% vs (1.0±0.3)% , P<0.01]. However, no significant difference was found between normal and abnormal levels of serum lipids in CHD patients.

Conclusions

As a major biomarker of the activation of monocytes/macrophages, Siglec-1 is not expressed on peripheral blood lymphocytes and neutrophils and is lightly expressed on monocytes in healthy controls. The increasing expression of Siglec-1 in CHD patients demonstrates the activation of monocytes in peripheral blood. Siglec-1 may mediate monocytes adhere to vascular endothelial cells and play an important role in the pathogenesis of CHD.

Keyword: Sialic acid-binding immunoglobulin-like lectin-1; Coronary heart disease; Flow cytometry

唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素家族是特异性表达于各种免疫和造血细胞表面的一类黏附分子, 属免疫球蛋白超家族成员, 通过识别含有唾液酸的糖链结构而促进细胞与细胞间的结合和相互作用, 在介导细胞信号转导、调节造血细胞和免疫细胞功能等方面起重要作用[1]。人唾液酸黏附素(Siglec-1)表达于特定组织巨噬细胞上, 正常人外周血单核细胞上不表达[2]。当单核巨噬细胞受到炎症刺激时, Siglec-1表达迅速上调, 说明Siglec-1在巨噬细胞促炎症反应中起重要作用。动脉粥样硬化是心脑血管疾病的病理基础, 其发病机制倍受关注。近年来认为免疫炎症特别是由巨噬细胞介导的天然免疫在动脉粥样硬化的发生和发展中起重要作用[3]。Siglec-1作为单核巨噬细胞激活的重要标志, 是否可以通过与血管内皮细胞表面含唾液酸结构的糖链结合而参与动脉粥样硬化的发病过程, 至今未见相关报道。本研究利用流式细胞术检测Siglec-1在冠心病(CHD)患者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞上的表达变化, 探讨其在冠状动脉粥样硬化发生和发展中的意义。

材料和方法
一、对象

2007年9月至12月长征医院心内科住院的CHD患者57例, 其诊断均符合世界卫生组织(WHO)关于CHD的诊断标准。其中急性心肌梗死(AMI)组31例, 男28例, 女3 例, 平均年龄(68.6± 17.3)岁; 稳定性心绞痛(SA)组7 例, 男5 例, 女2 例, 平均年龄(71.1± 11.9)岁; 不稳定性心绞痛(UA)组19 例, 男14 例, 女5 例, 平均年龄(73.6 ± 11.4)岁。正常对照组38名, 其中男20名, 女18名, 平均年龄(42.0± 10.7)岁, 既往无CHD史, 血常规、血脂、肝肾功能指标均正常, 无其他自身免疫性疾病及急、慢性炎症。

二、标本收集

以上入选者均空腹采集静脉血6 mL , 其中1 mL用乙二胺四乙酸钾(EDTA-K2)抗凝, 用于流式细胞分析, 5 mL不抗凝, 用于血脂及肝肾功能测定等。

三、仪器与试剂

流式细胞仪FC500(Coulter公司, 美国), BECKMAN CX4全自动生化分析仪, 藻红蛋白(PE)标记鼠抗人Siglec-1 单抗(Santa Cruz, 美国), 异硫氰酸荧光素(FITC)标记鼠抗人CD14单抗(eBioscience, 美国), Stain缓冲液(pH值7.4 的磷酸盐缓冲液加2 %小牛血清和0.1%叠氮钠)。

四、方法

1.流式细胞术检测Siglec-1表达 取100 μ L 用EDTA-K2 抗凝的全血, 加入20 μ L抗Siglec-1单抗和20 μ L抗CD14单抗, 混匀后室温避光孵育30 min, 同时设不加标记抗体的阴性对照管。用Qprep 标本处理仪进行红细胞裂解和细胞固定, 离心后弃上清, 用2 mL Stain缓冲液洗2次, 细胞沉淀用500 μ L Stain缓冲液重悬后上流式细胞仪检测, 每份标本重复检测3次取平均值。

2.血脂水平的测定 按生化常规测定CHD患者血脂水平, 包括总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和脂蛋白a。以上指标均在正常参考值范围内即为CHD 血脂正常者, 有任何一项超出正常参考值范围即为CHD 血脂异常者。

五、统计学方法

采用SPSS 12.0统计软件进行分析, 计量资料用 x̅± s表示, 多组资料之间比较用方差分析, 2组之间比较采用t 检验, P< 0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、Siglec-1在CHD患者外周血白细胞的表达

流式细胞仪检测结果见图1。检测发现, Siglec-1在对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达, 正常对照组单核细胞上表达很低, 而CHD组表达明显升高。CHD组单核细胞的Siglec-1阳性率为(12.7± 2.4)%, 显著高于正常对照组 [(1.0± 0.3)% , P< 0.01]。AMI组、SA组和UA组的阳性率分别为(13.2± 2.6)%、(12.7± 1.9)%和(12.0± 2.1)%, 均显著高于正常对照组(P< 0.01), 而AMI、SA、UA 3组之间的阳性率差异无统计学意义(P> 0. 05)。

图1 外周血白细胞Siglec-1分子表达情况

二、 Siglec-1的表达与血脂水平

57例CHD患者血脂正常者31例, 血脂异常者26例。CHD血脂正常组、异常组Siglec-1的表达分别为(12.2± 2.3)%和(13.4± 2.5)%, 均显著高于正常对照组(P< 0.01), 而CHD血脂异常组与血脂正常组之间差异无统计学意义(P> 0.05)。

讨 论

近年来不断有研究表明, Siglec-1在自身免疫性疾病和炎症性疾病发病中具有重要作用。在类风湿性关节炎患者中可以观察到, 炎症部位表达Siglec-1的巨噬细胞含量增加[2]; 人类免疫缺陷病毒(HIV)感染并具有高病毒载量的患者, 其外周血单核细胞上Siglec-1基因表达比正常人高10倍[4]; 在增殖性肾小球肾炎中, Siglec-1的表达与蛋白尿水平呈正相关[5]; 系统性硬化患者外周血单核细胞上Siglec-1表达增加, α 干扰素(IFN-α )和Toll样受体(TLR)能刺激其表达上调[6]; 在抗原肽诱导的实验性自身免疫性葡萄膜视网膜炎中, Siglec-1基因敲除小鼠表现为视网膜炎症减轻, 从淋巴结引流液中分离出的T细胞显示出体外低增殖活性[7]。上述发现证实了Siglec-1在炎症反应时参与T细胞活化。

动脉粥样硬化是一种多因素疾病, 由其导致的心脑血管疾病发病率和死亡率居高不下, 成为人类死亡的主要原因。其确切的发病机制虽尚未阐明, 但近些年来的研究已经将免疫炎症与动脉粥样硬化形成和斑块破裂联系在一起[8]。巨噬细胞作为一种重要的炎症反应细胞, 一旦被活化, 就可以使低密度脂蛋白(LDL)氧化成氧化型LDL(ox-LDL), 并分泌大量细胞因子, 如单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血管内皮细胞间黏附分子(VCAM-1)和细胞间黏附分子(ICAM-1)等, 以致大量的单核巨噬细胞和T淋巴细胞向血管内皮细胞迁移、黏附和聚集, 并沉积于内膜下摄取ox-LDL形成大量泡沫细胞, 直接或间接造成内皮细胞损伤, 构成动脉粥样硬化的初始发病阶段。Siglec-1作为单核巨噬细胞激活的重要标志, Siglec-1蛋白在CHD患者外周血单核细胞上表达显著升高, 提示Siglec-1可能通过与血管内皮细胞表面含唾液酸结构的糖链结合而使单核细胞黏附于血管内皮, 向血管内皮下移动并激活, 分泌大量细胞因子和趋化因子, 诱导更多的巨噬细胞和淋巴细胞募集和活化, 参与动脉粥样硬化的初始发病过程。

本实验利用流式细胞术检测了57 例CHD 患者及38 名正常对照者外周血淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞Siglec-1的表达。实验结果表明, Siglec-1在对照组及CHD组淋巴细胞和中性粒细胞上均无表达, 正常对照组单核细胞上表达很低, 而CHD组表达明显升高, 且其表达与CHD组别(AMI组、SA组和UA组)和血脂正常与否无明显相关性。本研究初步提示, 外周血单核细胞Siglec-1激活及其介导的炎症反应与动脉粥样硬化的发生和发展存在一定相关性。但Siglec-1在动脉粥样硬化发病过程中究竟起什么作用, 是否通过黏附血管内皮及吞噬脂质而参与动脉粥样硬化的发生和发展, 仍需要进一步研究与探索。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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