引用本文
王娜, 谢守军, 武英伟, 张敏. 间变性大细胞淋巴瘤骨髓侵犯的临床病理特点. 2009, 24(8): 591-594
WANG Na, XIE Shoujun, WU Yingwer, ZHANG Min. Analysis of clinicopathological, immunohistochemical and cytogenetic features in bone marrow involved by anaplastic large cell lymphoma. Labratory Medicine, 2009, 24(8): 591-594  
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间变性大细胞淋巴瘤骨髓侵犯的临床病理特点
王娜1, 谢守军2, 武英伟2, 张敏2
1. 承德医学院附属医院重症监护病房,河北 承德 067000
2.承德医学院附属医院检验科,河北 承德 067000

作者简介:王 娜,女, 1972年生,学士,主管护师,主要从事临床护理工作。

通讯作者:谢守军,联系电话:0314-2270067。

摘要
目的

探讨间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)骨髓侵犯的临床病理特点、免疫组化、骨髓涂片细胞形态及细胞遗传学特征。

方法

对皮下结节、淋巴结活检标本行石蜡包埋切片,苏木素-伊红(HE)染色,链霉素-生物素-过氧化物酶(SP)法免疫组化进行表型分析;应用骨髓细胞短期培养法制备染色体标本,以R显带技术进行核型分析。

结果

4例ALCL中3例为系统型ALCL (sALCL),高热伴全身淋巴结肿大;1例为原发皮肤型ALCL(cALCL),局限单发皮下结节,真皮内有密集的瘤细胞浸润。皮下、结内或骨髓涂片内瘤细胞胞体大,核形不规则,核仁明显。免疫组化4例均显示CD30(++)、CD45RO(+),3例上皮细胞膜抗原(EMA)(+),2例间变淋巴瘤激酶(ALK)(+)患者均为sALCL且伴有染色体2p23异常,而cALCL患者ALK(-)。

结论

ALCL CD30(++),但cALCL与sALCL的异质性较大。临床病理、免疫组化、染色体核型的联合检测有助于ALCL的诊断、分型及鉴别诊断。

关键词: 间变性大细胞淋巴瘤; 临床病理; 免疫组化; 细胞遗传学
中图分类号:R446.11 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)08-0591-04
Analysis of clinicopathological, immunohistochemical and cytogenetic features in bone marrow involved by anaplastic large cell lymphoma
WANG Na1, XIE Shoujun2, WU Yingwer2, ZHANG Min2
1.Intensive Care Unit, the Hospital Affiliated to Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China
2.Department of Clinical Laboratory, the Hospital Affiliated to Hebei Chengde Medical College, Chengde 067000, China
Abstract
Objective

To study the clinicopathological, immunohistochemical, bone marrow aspirates and cytogenetic features of bone marrow involved by anaplastic large cell lymphoma(ALCL).

Methods

Routine histologic examination was performed on hematoxylin-eosin(HE) stained sections with paraffin embeded samples of cutaneous nodules or lymphnodes biopsies. The phenotype was conducted by SP immunohistochemical method. Chromosome specimens were prepared by short-term culture of bone marrow cells and karyotype analyses were carried out using R-banding techniques.

Results

Of 4 patients with ALCL, 3 were primary systemic ALCL(sALCL) with fever and enlarged lymphnodes;1 was primary cutaneous ALCL(cALCL) with localized skin masses, the dermis was infiltrated densely with lymphoma cells. The lymphoma cells were large and varied in nuclei with prominent nucleolus. Immunohistochemistry showed that tumor cells was positive for CD30 and CD45RO in 4 patients, EMA was positive in 3 cases. 2 sALCL patients appeared ALK positive following with chromosomal abnormality 2p23, but cALCL showed ALK negative.

Conclusions

ALCL tumor cell express CD30 intensively, yet sALCL and cALCL show heterogeneous features. A combined examination of clinicopathology, immunohistochemistry and cytogenetics may play an important role in diagnosis, classification and differential diagnosis of ALCL.

Keyword: Anaplastic large cell lymphoma; Clinicopathology; Immunohistochemistry; Cytogenetics

间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma, ALCL)为非霍奇金淋巴瘤(NHL)的1个少见亚型, 骨髓侵犯发生率低, 仅约4%左右[1]。ALCL骨髓侵犯在国内少有报道, 我们报道4例, 对其病理学特征、免疫表型、染色体核型、鉴别诊断及预后进行初步探讨。

材料和方法

一、一般资料

4例ALCL患者均为本院住院患者, 骨髓涂片细胞形态学、染色体核型分析为承德医学院附属医院检验科血液室检测, 组织病理和免疫组化经承德医学院附属医院或北京协和医院病理室诊断。ALCL诊断及疗效标准参照《血液学诊断及疗效标准》[2]。

二、仪器及试剂

日本Sysmex公司的XE-2100全自动血液分析仪及原装配套试剂; Applied Imaging公司CytoVisionTM染色体成像分析系统; 瑞特-姬姆萨染液(珠海贝索生物技术有限公司); 秋水仙胺(美国Sigma公司)。

三、方法

1. 组织病理及链霉素-生物素-过氧化物酶(SP)免疫组化 标本用4%甲醛固定, 石蜡包埋, 苏木素-伊红染色。切片脱蜡入水, 3 ml/L甲醇过氧化氢作用5 min, 非免疫血清阻断20 min, 依次加入稀释后(1∶ 50)Ⅰ 抗(孵育过夜)、Ⅱ 抗(孵育30 min)、Ⅲ 抗(孵育30 min), 期间用PBS缓冲液冲洗, 最后用二甲基联苯胺(DAB)液显色后, 复染、脱水、透明、封片。实验设阴性、阳性对照。所用抗体均购自晶美生物(Biolegend公司产品)。

2. 染色体核型 取患者初诊治疗前的骨髓, 经24~48 h培养后, 收集细胞常规制片, 应用R显带技术进行核型分析。分析中期细胞数16~42个, 根据细胞遗传学国际命名体制(ISCN, 1995)对核型进行描述。

结 果
一、临床表现

4例患者平均年龄39岁(11~80岁), 男3例, 女1例。例1为原发皮肤型ALCL(cutaneous ALCL, cALCL), 有反复口腔溃疡病史10余年, 初诊时无明显诱因大腿外侧出现单发皮下结节, 突出皮面, 质硬, 移动度差, 无压痛, 无瘙痒, 肝、脾及浅表淋巴结不大, 经激素或间断甲氨蝶呤(MTX)治疗结节消退。16个月后, 皮下结节明显增多, 局限多发, 部分结节融合, 行长春新碱+柔红霉素+环磷酰胺+L-门冬酰胺酶+强地松(VDCLP)方案化疗, 皮下结节消退。20个月后, 全身皮肤可见结节, 浅表淋巴结肿大, 肝、脾肿大, 联合化疗, 效果不佳, 1个月后死亡。例2、3和4为系统性ALCL(systemic ALCL, sALCL), 无明显诱因持续或间断发热1~2个月, 双颈部、腋窝和/或腹股沟多个淋巴结肿大, 最大直径2.7 cm, 例2肝肋下3 cm, 脾肋下3.4 cm可触及, 余2例肝、脾不大。例2确诊为ALCL后第2天出现Ⅱ 型呼吸衰竭, 即转入急诊监护病房, 5 d后死亡。例3、4行VDCLP、环磷酰胺+阿糖胞苷(CA)方案化疗, 分别随访31、19个月, 病情稳定。

二、皮下结节、淋巴结病理检查

例1皮下结节活检病理:表皮未见明显异常, 真皮及皮下密集肿瘤细胞浸润。瘤细胞弥漫性排列, 胞体大, 胞浆丰富、嗜碱淡蓝, 部分呈空泡状, 胞核偏位, 呈马蹄形、肾形, 扭曲不规则, 染色质较粗, 核仁明显(见图1)。瘤细胞中混有少量淋巴细胞、组织细胞、浆细胞。例2、3镜下改变基本相似, 淋巴结结构几乎完全被破坏, 仅个别淋巴窦残存。例4淋巴结结构破坏较轻, 瘤细胞量少, 部分围绕血管周围生长, 组织细胞明显增多。4例瘤细胞形态类似。免疫组化:例1为CD3(散在+)、CD15(-)、CD20(-)、CD45RO(+)、CD79α (-)、CD30(++)(见图2)、上皮细胞膜抗原(EMA)(-)、间变淋巴瘤激酶(ALK)(-); 例2、3为 CD2(散在+)、CD20(-)、CD45RO(+)、CD79α (-)、CD30(++)、EMA(+)、ALK(+); 例4为 CD 3(散在+)、CD15(-)、CD20(-)、CD45RO(+)、CD68(+散在)、CD79α (-)、CD30(++)、EMA(+)、ALK(-)。

图1 例1皮下结节组织病理

图2 例1皮下结节切片免疫组化

三、骨髓涂片检查

骨髓受累程度各异。例1骨髓增生极度活跃, 淋巴瘤细胞90%, 胞体大, 形态不规则, 部分呈梭形样改变, 胞质量丰富、淡染灰蓝色, 可见少许粗大紫红色颗粒, 细胞核大, 多明显凹陷扭曲, 肾形或马蹄形改变, 染色质粗颗粒网状, 核仁1至多个明显(见图3)。例2骨髓增生明显活跃, 瘤

图3 例1骨髓涂片

细胞 67.0%, 例3骨髓增生活跃, 淋巴瘤细胞7.5%, 嗜酸细胞偏多, 组织细胞散在易见。例4骨髓增生活跃, 淋巴瘤细胞散在分布占6.0%, 背景中组织细胞明显增多, 浆细胞、嗜酸细胞易见。4例瘤细胞形态大致相似。

四、染色体检查

染色体核型见图4、表1。

图4 例2染色体核型图

表1 4例ALCL细胞遗传学资料
讨 论

ALCL系1985年由Stein等首先报道。在2001年世界卫生组织(WHO)淋巴造血组织肿瘤分类方案中[3], 根据瘤细胞形态学特征, ALCL被分为普通型、淋巴组织细胞型、小细胞型和其他少见类型(肉瘤样型、印戒样型等)。本研究4例中3例为普通型, 例4为淋巴组织细胞型。在本研究4例组织活检、骨髓涂片资料中, 瘤细胞胞体大, 胞浆丰富、嗜碱淡蓝, 部分呈空泡状, 胞核偏位, 呈马蹄形、肾形, 扭曲不规则, 染色质较粗, 核仁明显, 偶见多核巨细胞。普通型背景较清晰, 但淋巴组织细胞型背景中伴有大量组织细胞, 还可见到组织细胞吞噬红细胞现象。

sALCL好发于儿童和青壮年, 常累及全身淋巴结和结外组织。cALCL好发于中老年男性, 皮损以四肢多见, 常以皮肤孤立性结节起病, 瘤细胞弥漫浸润真皮下, 极少向表皮性, 初诊6个月内无皮肤外组织器官受损的证据, 易与sALCL鉴别。本研究例1 cALCL诊断后20个月, 淋巴结、肝、脾相继受累。sALCL与cALCL细胞学形态类似, 但免疫表型不完全相同。sALCL瘤细胞50%~80%病例EMA阳性, 60%~85%ALK阳性, 而cALCL EMA常阴性, 几乎不表达ALK。ALK的表达与2号染色体上的ALK位点基因改变有关, 其中t(2; 5)(p23; q35)易位最为常见。2p23上的ALK与5q35的核磷酸蛋白 (nucleophosmin, NPM)结构域融合形成ALK- NPM融合基因, 编码80KD的融合蛋白P80, 该融合蛋白通过诱导ALK酪氨酸激酶活化, 导致细胞内信号传导途径异常活化, 促使肿瘤发生[4]。约20% ALK阳性的ALCL患者无t(2; 5) 易位[5], 可见到ALK基因易位的变异型, 本研究例2 ALK阳性的遗传学为伴t(2; 3)(p23; q21) 易位的复杂核型, 亦支持上述观点。例1、例4染色体核型无涉及2p23异常, ALK阴性, 亦提示ALK表达与2p23位点基因改变的内在关联。cALCL没有2p23易位, 因此ALK阴性表达, 此点有助于肿瘤原发部位的判断。

ALCL须与淋巴瘤样丘疹病(LP)、霍奇金淋巴瘤(HD)以及继发于恶性肿瘤的噬血细胞综合征(HPS)进行鉴别。LP为原发皮肤CD30阳性的T淋巴细胞增生性疾病, 但LP 皮损广泛, 有反复发作和自行消退的皮肤丘疹, 病变很少累及皮下组织, 瘤细胞散在少见。 HD多为B细胞起源, 且典型R-S细胞散在分布于反应性炎细胞背景中, 瘤细胞EMA、ALK阴性; HPS主要由组织细胞构成, 易见组织细胞吞噬血细胞现象, 肿瘤细胞CD30(-)。

就sALCL而言, ALK的表达不仅有助于ALCL的诊断, 而且有助于预后的判断, ALK阳性提示有利的预后, 而阴性者预后差[6]。但就cALCL而言, 其ALK呈阴性, 却是所有ALCL中预后最好的, 若无皮肤以外脏器受累, 病变局限, 则预后较好, 而皮损泛发是预后不良的信号。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Fraga M, Brosset P, Schaifer D, et al. Bone marrow involvement in anaplastic large cell lymphoma: immunohistochemical detection of minimal disease and its prognostic significance[J]. Am J Clin Pathol, 1995, 103(1): 82-89. [本文引用:1]
[2] 张之南, 沈悌. 血液病诊断及疗效标准[M]. 第3版, 北京: 科学技术出版社, 2007: 224-227. [本文引用:1]
[3] Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al. World Health Organization classification of tumors pathology and genetic, tumors of hematopoietic and lymphoid tissues[M]. Lyon: JARC Press, 2001: 230-253. [本文引用:1]
[4] Stein H, Foff HD, Marafioti T, et al. CD30+ anaplastic large cell lymphoma: a review of its histopathologic, genetic, and clinical features[J]. Blood, 2000, 96(24): 3681-3695. [本文引用:1]
[5] Falini B, Pulford K, Pucciarini A, et al. Lymphomas expressing ALK fusion protein other than NPM-ALK[J]. Blood, 1999, 94(10): 3509-3515. [本文引用:1]
[6] Ten Berge RL, De Bruin PC, Oudejans JJ, et al. ALK-negative anaplastic large-cell lymphoma demonstrates similar poor prognosis to peripheral T-cell lymphoma, unspecified[J]. Histopathology, 2003, 43(5): 462-469. [本文引用:1]