引用本文
郭玮, 葛伟光, 吴炯, 宋斌斌, 张春燕, 潘柏申. 血清胆红素不同检测方法的评价. 2009, 24(7): 510-513
GUO Wei, GE Weiguang, WU Jiong, SONG binbin, ZHANG chunyan, PAN Baishen.. Evaluation of the methods of the serum bilirubin determination. Labratory Medicine, 2009, 24(7): 510-513  
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血清胆红素不同检测方法的评价
郭玮, 葛伟光, 吴炯, 宋斌斌, 张春燕, 潘柏申
复旦大学附属中山医院检验科,上海 200032

作者简介:郭 玮,女,1970年,硕士,副主任技师,主要从事临床生化检验工作。

通讯作者:潘柏申,联系电话:021-64041990。

摘要
目的

评价临床上最为常用的3种胆红素检测方法。

方法

使用罗氏、强生、和光3种胆红素试剂对58份新鲜患者血清做相关性分析。使用3种试剂分别检测梗阻性黄疸患者术前及术后的血清样本,并比较检测结果。

结果

3种试剂对总胆红素(TBil)检测的结果相关性较好,强生、和光与罗氏试剂的相关系数( r)分别为0.99、0.98,和光与罗氏试剂对直接胆红素(DBil)检测结果的 r为0.99;强生试剂检测结合胆红素(Bc)/ TBil比值在梗阻性黄疸成功解除梗阻后迅速下降,下降趋势较罗氏、和光试剂检测结果更为明显。

结论

罗氏、强生、和光3种胆红素试剂由于方法不同,其对胆红素的检测结果有一定的差异。强生试剂测定Bc更能准确反映梗阻性黄疸的疗效观察。

关键词: 胆红素; 检测方法; 评估
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)07-0510-04
Evaluation of the methods of the serum bilirubin determination
GUO Wei, GE Weiguang, WU Jiong, SONG binbin, ZHANG chunyan, PAN Baishen.
Department of Laboratory Medicine,Zhongshan Hospital,Fudan University,Shanghai 200032,China
Abstract
Objective

To evaluate three methods of the serum bilirubin determination.

Methods

Bilirubin reagents from Roche, Johnson & Johnson and Wako companies were evaluated for their result correlation and comparative clinical application in obstructive jaundice patients before and after surgical operation .

Results

The correlation of total bilirubin assay by using the three methods was good; the correlation coefficients of Roche with Johnson & Johnson, and Roche with Wako were 0.99 and 0.98 respectively. The correlation coefficients of direct bilirubin assay by using the Roche and Wako was 0.99, the ratio of conjugated bilirubin (Bc) and total bilirubin (TBil) by using Johnson & Johnson was rapidly declining from the obstructive jaundice patients before and after surgery, the trend of declining was more obvious than the results of Roche and wako.

Conclusions

Since the principal of the three methods is not the same, the results correlations are not ideal. Bc detection by using Johnson & Johson reagent is better in the monitoring of obstructive jaundice.

Keyword: Bilirubin; Assay method; Evaluation

人体内胆红素主要来自衰老红细胞, 并通过一系列反应排出体外[1], 胆红素检测通常检测2种胆红素, 总胆红素(TBil)和直接胆红素(DBil)。检测方法多种多样, 结果缺乏可比性。美国病理家协会(CAP)调查发现TBil 为38 μ mol/L的样本不同方法的测定结果在34~46 μ mol/L之间, 24 μ mol/L的样本相同方法之间的变异系数(CV)> 8%。DBil方法间的差别更大, 大大影响了其在临床的应用[2]。为了解不同方法检测胆红素结果的差异, 我们对瑞士罗氏公司(以下简称罗氏)、美国强生公司(以下简称强生)、日本和光公司(以下简称和光)的三类应用较广、方法较有代表性的胆红素检测试剂进行了比较。

材料和方法
一、对象

收集中山医院就诊患者血清样本58份, 采集后立即分离, 避光隔绝氧气, -20 ℃保存。

二、试剂和仪器

1.试剂 (1)罗氏试剂:TBil试剂(批号:649255-01)、DBil试剂(批号:652149-01)均采用重氮法, 胆红素检测cfas校准品(批号:163009-07), 胆红素检测质控血清Precinorm和Precipath (批号:167969-01、163009-1); (2)强生试剂:TBil试剂(批号:1439-0195-0145)采用重氮法, 未结合胆红素(Bu)与结合胆红素(Bc)试剂(批号:0218-0287-7308)采用膜片分离光散射法, 胆红素检测校准品(批号:0414), 胆红素检测质控品(批号:L5782 、Q5886); (3)和光试剂:TBil试剂(批号:KM994/KM995)、DBil试剂(批号:M997/KM590)均采用矾酸法, 胆红素检测校准品(批号:KR747), 胆红素检测质控品(批号: RH981、RH982)。

2.仪器 罗氏及和光试剂的测定仪器为Hitachi 7170A全自动生化分析仪; 强生试剂的检测仪器为强生250全自动生化分析仪。

三、方法

1. 定标 所有试剂检测前均用配套校准品定标, 并同时检测各相应的质控品, 以确保检测结果的准确性。

2. 相关性分析 选取TBil不同水平样本。使用罗氏、和光试剂分别检测TBil、DBil; 强生试剂检测TBil。观察3种试剂之间相关性。

3. 临床应用评价 收集14例临床出现黄疸的患者(包括4例胆结石、3例胆总管结石、7例梗阻性黄疸, 均经手术解除梗阻)的术前及术后血清样本, 使用3种试剂分别检测。其中罗氏试剂和和光试剂检测TBil和DBil, 强生试剂检测TBil、Bu及Bc, 并计算得到δ -胆红素的值, δ -胆红素=TBil-Bu-Bc。

结 果
一、相关性分析

1. 使用3种试剂对58份样本进行TBil(1.3~184.5 μ mol/L)检测。罗氏试剂的检测均值为50.3 μ mol/L(s=58.9); 强生试剂的检测均值为42.6 μ mol/L(s=51.9); 和光试剂的检测均值为49.1 μ mol/L(s=47.5)。相关方程分别为Y罗氏=0.87X和光-0.95, r=0.99, P=0.00; Y罗氏=1.06X强生-9.33, r=0.98, P=0.00; Y和光=1.21X强生-9.38, r=0.98, P=0.00。

2. 使用2种试剂对58份样本进行DBil(1.3~116.4 μ mol/L)的检测。罗氏试剂的检测均值为31.6 μ mol/L(s=39.6); 和光试剂的检测均值为36.6 μ mol/L(s=41.7)。相关方程为Y罗氏=0.94X和光-3.00, r=0.99, P=0.00。

二、临床应用评价

使用3种试剂检测14例临床出现黄疸的患者术前及术后的血清, 结果见表1和表2。将术前、术后各组分胆红素与TBil之比的平均值作图, 结果见图1。

表1 14例临床出现黄疸的患者手术前后罗氏、和光试剂测定结果 (μ mol/L)
表2 14例临床出现黄疸患者手术前后强生试剂测定结果(μ mol/L)

图1 14例临床出现黄疸患者手术前后各组分胆红素/TBil的变化

讨 论

胆红素的检测方法多种多样, 使用历史最为悠久的是重氮法[3], 也是目前应用较为广泛的方法。本研究的3种方法中罗氏试剂检测的TBil和DBil均采用此反应原理。

化学氧化法也是应用较为广泛的一类方法, 和光试剂采用的矾酸氧化法是以矾酸作为氧化剂, 在pH值3.0的条件下将血清或血浆中的胆红素氧化为胆绿素, 通过添加不同的表面活性剂分别测定TBil和DBil。

强生试剂是一种干化学方法, 采用了多层膜片技术, 其中TBil检测也是基于重氮反应原理。Bu和Bc的检测原理是利用各种异构胆红素不同的反射特性, 使样本中绝大多数的胆红素组分被检测出来。其采用的标准品溯源至通过高效液相色谱(HPLC)分离的胆红素各组分, 所以其结果与HPLC的结果相关较好。此外强生还可通过TBil、Bu、Bc计算出δ -胆红素。

为了解目前常用几种试剂的应用情况, 我们选择了以上3种试剂进行分析, 结果发现3种试剂对TBil的检测具有相对较好的一致性。和光、强生与罗氏之间的相关性分别为0.99、0.98。目前, TBil的检测国际上已有了标准化方案, 以传统的J-G法作为参考方法, 使用世界卫生组织(WHO)参考物质SRM916作为二级参考物质。虽这3种试剂的TBil标准品都可溯源至这一标准, 但由于检测方法的不同, 对白蛋白配制胆红素标准品的反应不相同[4], 且适用各自校准品, 故结果一致性之间仍存在差异。

临床上长期以来习惯于将DBil作为Bc, 而将间接胆红素作为Bu[5]。DBil的检测目前仍然是一难点。因其并非人体内实际存在的组分, 所以无法找出一个合适的参考物质及参考方法。不同试剂之间的相关性较差[5]。和光试剂采用的矾酸氧化法特异性较差, 检测DBil反应过程中有较多的Bu参与到反应之中, 结果要高于罗氏试剂。

在胆道梗阻的情况下, 体内Bc由于无法正常分泌入胆汁排泄而大大上升, 由于体内长期处于高胆红素状态, 胆红素与白蛋白共价结合形成较多的δ -胆红素。Bc与δ -胆红素是DBil的主要组分, 所以在胆道梗阻时DBil水平上升, DBil/TBil比值特异性的上升。胆道梗阻解除后, Bc因能正常排泄而迅速下降, 而δ -胆红素由于半衰期较长, 浓度下降较慢, 在胆道梗阻后成为黄疸的主要组分, 由此可能造成DBil/TBil比值下降趋势并不十分明显。而使用强生试剂可直接检测Bc, 排除了δ -胆红素的影响, 梗阻解除后Bc/TBil比值迅速下降, 更敏感反映了手术解除梗阻的疗效 (见图1)。因此在梗阻性黄疸中测定Bu+Bc可更准确的反映梗阻前后黄疸变化情况。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Kuiper EMM, Hansen BE, De Vries RA, et al. Improved prognosis of patients with primary biliary cirrhosis that have a biochemical response to ursodeoxycholic acid[J]. Gastroenterology, 2009, 136(4): 1281-1287. [本文引用:1]
[2] Stanley FL, Doumas BT, Ashwood ER. Performance of Bilirubin Determinations in US Laboratories-Revisited[J]. Clin Chem, 2004, 50(1): 190-194. [本文引用:1]
[3] Garber C. Jendrassik--Grof analysis for total and direct bilirubin in serum with a centrifugal analyzer[J]. Clin Chem, 1981, 27(8): 1410-1416. [本文引用:1]
[4] 冯仁丰. 胆红素方法学发展的历史与现状及标准化[J]. 中华医学检验杂志, 2008, 31(5): 595-600. [本文引用:1]
[5] Lott JA. “Direct” and total bilirubin tests: contemporary problems[J]. Clin Chem, 1993, 39(4): 641-647. [本文引用:2]