引用本文
刘怀平, 刘树业. 国产试剂在罗氏MODULAR P-800生化分析仪上的应用评价. 2009, 24(7): 497-501
LIU Huaiping, LIU Shuye.. Evaluation of the application of homemade reagents on Roche MODULAR P-800 analyzer. Labratory Medicine, 2009, 24(7): 497-501  
Permissions
Copyright©2009, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
国产试剂在罗氏MODULAR P-800生化分析仪上的应用评价
刘怀平, 刘树业
天津市第三中心医院,天津 300170

作者简介:刘怀平,女,1967生,学士,副主任技师,主要从事临床生物化学工作。

摘要
目的

评价国产试剂在罗氏MODULAR P-800全自动生化分析仪(简称P-800)上应用的可行性。

方法

在P-800上同时使用国产试剂[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)试剂由上海荣盛生物技术有限公司提供;总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、尿素(Urea)试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供]和罗氏原装配套试剂。2种试剂的方法原理、分析类型、试剂组分及试剂剂型均相同。以罗氏原装试剂测定混合血清作为量值传递载体,用其校准国产试剂后对cafs校准品赋值,并以赋值后的cafs校准品、国产试剂组成测定系统。对国产试剂进行精密度评价、线性测定、偏差评估以及与罗氏原装配套试剂进行相关性分析,并对2种试剂进行抗干扰能力比较。

结果

国产试剂无论检测低值还是高值血清其结果批内、批间变异系数( CV)均<5%。与罗氏原装配套试剂同时检测40份临床样本,二者所测结果基本一致( P>0.05),相关系数( r)均>0.975。国产试剂与罗氏原装配套试剂的比对实验结果在医学决定水平处的偏倚均低于允许误差。2种试剂的抗干扰能力无明显差异, r均>0.975( P>0.05)。

结论

国产试剂与罗氏原装配套试剂相比相关性好、偏差小、精密度较高、线性较宽,对脂浊和黄疸样本有较好的抗干扰能力;其检验结果具有溯源性和可比性,可以替代罗氏原装配套试剂。

关键词: 诊断试剂; 中国制造; 评价; 偏倚
中图分类号:R446 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)07-0497-05
Evaluation of the application of homemade reagents on Roche MODULAR P-800 analyzer
LIU Huaiping, LIU Shuye.
Tianjin Third Centre Hospital,Tianjin 300170,China
Abstract
Objective

To evaluate the feasibility of homemade reagents on Roche MODULAR P-800 automatic biochemical analyzer (P-800).

Methods

The homemade reagents [made in China,the regents of alanine aminotransferase (ALT),aspartate aminotransferase (AST),γ-glutamyltransferase(GGT),alkaline phosphatase(ALP),triglyeride(TG)and total cholesterol(TG) form Shanghai Rongsheng Biotechnology Co.Ltd;the reagents of total protein(TP),albumin(Alb)and urea from Shanghai Fuson Long March Medical Science Co.Ltd] and Roche original reagents were applied on P-800. Technology principle,analysis type,component and dosage form of regent of two regents was identical.The fresh mixed serum was determined by Roche reagent, and used as temporary calibrator. The homemade reagent was calibrated by the temporary calibrator. The value of cafs calibrator was available from the calibrated homemade reagent and the cafs calibrator composed determination system with calibrated homemade reagent. The precision, linearity and bias of homemade reagent were determined. The correlation analysis of two reagents was evaluated. The interference tests of two reagents were done.

Results

No matter how to test the low or high level samples, the intra-assay and inter-assay coefficient of variation( CV)of homemade reagent were<5%. 40 clinical samples were detemined by two reagents. The results were similar ( P>0.05) and the correlation coefficient ( r) was>0.975. The bias at medical decision level was lower than permissible error range. Two regents' antiinterference abilities had no significant difference( r>0.975, P>0.05).

Conclusions

Compared with Roche original reagent, homemade reagent has good correlation, little bias, high precision and wide linearity. Homemade reagents have good antiinterference ability for lipemia and icterus samples. The results can be compared and are traceable. Homemade reagent can be alternative to Roche original reagent.

Keyword: Diagnostic reagent; Made in China; Evaluation; Bias

罗氏MODULAR P-800全自动生化分析仪(简称P-800)是目前测定常规生化项目较先进的仪器。使用罗氏原装配套试剂, 不仅测试速度快捷, 而且测定结果准确、溯源性好。但由于其试剂成本较高, 导致检测费用增加。为此我们根据美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)的EP9-A2 文件[1]对国产试剂在P-800上的应用进行实验评价。

材料和方法
一、 材料

1. 样本来源 全部标本来源于天津市第三中心医院患者新鲜血清, 标本的浓度都在厂家声明的线性范围内。

2. 仪器 P-800。

3. 试剂 (1) 罗氏原装配套试剂和测定方法:罗氏公司总蛋白(TP)试剂(双缩脲法, 批号684975-01)、白蛋白(Alb)试剂(溴甲酚绿法, 批号685421-01)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂(速率法, 批号686325-01)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂(速率法, 批号686442-01)、γ -谷氨酰基转移酶(GGT)试剂(速率法, 批号688983-01)、碱性磷酸酶(ALP)试剂(速率法, 批号685514-01)、尿素(Urea)试剂 (脲酶速率法, 批号 685016-01)、三酰甘油(TG)试剂(甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶法, 批号 688431-01)、胆固醇(TC)试剂(胆固醇氧化酶法, 批号 685723-01), 其中TG、TC试剂为单试剂, 其余均为双试剂, 校准品 (cfas, 批号 17363200); (2)国产试剂和测定方法(方法原理、分析类型、试剂组分、试剂剂型均同罗氏原装配套试剂): ALT (批号 20070611)、AST(批号20070608)、GGT(批号20070523)、ALP(批号20070511)、TG(批号 20070426)及TC试剂(批号 20070510)由上海荣盛生物技术有限公司提供, TP(批号L070414)、Alb(批号L070514)及Urea试剂 (批号 D070623)由上海复星长征医学科学有限公司提供, 校准品(cfas, 批号 17363200); (3)质控品:罗氏公司Preeinorm和Precipath质控血清(批号176469、176287)。

二、方法

1. 实验方法 按操作规程开机、保养, 使检测仪器处于最佳状态。罗氏原装配套试剂放于封闭试剂通道, 采用试剂条码扫描设置仪器参数。国产试剂放于开放试剂通道, 按照试剂厂家提供的该试剂在P-800上的测定参数设置仪器参数。

2. 校准方法 (1)罗氏原装配套试剂:采用罗氏cafs校准品校准; (2)国产试剂采用重新赋值的cafs校准品校准:以4份患者新鲜血清充分混匀后, 作为临时校准血清, 以校准后的罗氏原装配套试剂对上述9个项目进行5次检测, 取各项目的均值(要求混合血清各项目测定值在中值水平)作为国产试剂校准值。以临时校准血清对国产试剂进行校准。校准后用国产试剂测定临时校准血清和cafs校准品 5次, 如果临时校准血清测定值与其校准值偏差< 5%, 则取cafs校准品各项目均值, 即为校准国产试剂cafs校准品的赋予值, 以赋值后的cafs校准品对国产试剂进行校准。

3. 精密度试验[2] 用蒸馏水严格按照说明书要求溶解多瓶罗氏公司Preeinorm和Precipath质控血清, 相同浓度水平的质控血清充分混匀在一起, 并分装多个小瓶置冰箱冰冻保存。每天分2批测定样本, 各批试验至少间隔2 h, 每批测定 2个浓度水平, 每个水平重复2次, 共20 d。计算批内和批间精密度。

4. 线性试验[2] 共使用 7个浓度水平, 高值样本应高于线性上限30 %, 低值样本应低于线性低限。收集低浓度(X1)、高浓度(X7)混合血清。其余血清按照以下方法配制:X2=5份X1+1份 X7, X3=4份X1 +2份X7, X4=3份X1+ 3份X7, X5=2份X1+4份X7, X6=1份X1+5份X7, 配制的样本浓度=( X1× V1 +X7 × V7)/(V1+V7)。 全部试验和数据收集在同一个工作日之内完成, 分析序列应随机排列。每个浓度样本重复4次, 记录测定结果。观察有无明显的数据错误, 若有明显异常时, 应判断为离群点。全部数据的离群点如果有 2个 以上, 则应保留全部数据或者重新进行测试, 计算线性范围。

5. 比对实验[1] 每天取8份样本, 浓度范围应覆盖该项目的分析测量范围, 且参考值范围以外的样本应在50%以上。分别用国产试剂和罗氏原装配套试剂按顺序 l→ 8再按顺序 8→ l重复测定, 共测定 5 d, 每个项目分析40个样本。

6. 抗干扰能力 分别用国产试剂和罗氏原装配套试剂测定外观正常血清、脂浊血清(TG> 5.0 mmol/L)、黄疸血清[总胆红素(TBiL)> 170 μ mol/L]各40份。

三、统计学方法

按照 NCCLS文件 EP9-A2[1] 进行数据处理, 计算相关系数(r)、斜率(b)、截距(a)和医学决定水平(Xc)处的偏倚。比对实验、抗干扰能力试验组间比较采用t检验。

结 果
一、精密度试验

国产试剂批内和批间精密度结果见表 1。

表1 精密度试验结果
二、线性试验

国产试剂线性试验结果分别为 ALT:4~800 U/L、AST:5~800 U/L、GGT:4~1 000 U/L、ALP:10~600 U/L、Urea:0.62~50.0 mmol/L、TG:0.09~10.00 mmol/L、TC:0.32~24.00 mmol/L、TP:30~100 g/L、Alb:16~50 g/L。

三、国产试剂与罗氏原装配套试剂比对实验

国产试剂的 9个项目检测与罗氏原装配套试剂进行比对, 其 r、b、a见表2, 以r≥ 0.975、b=1.0± 0.05、a接近0为判断标准[1]。国产试剂的9个项目全部符合要求。结果见表 2。

表2 国产试剂与罗氏原装配套试剂比对实验结果
四、国产试剂与罗氏原装配套试剂抗干扰能力比较

抗干扰能力比较结果见表3。

表3 国产试剂与罗氏原装配套试剂抗干扰能力测定结果
五、Xc处的偏倚

运用线性回归方程计算国产试剂与罗氏原装配套试剂的比对实验结果在Xc[3]处的偏倚, 结果见表4。以美国临床医学检验部门修正法规(CLIA'88)允许总误差(TEa)TP± 10%、 Alb± 10%、ALT± 20%、AST± 20%、GGT± 20%、 ALP± 20%、Urea± 9%、TG± 10%、TC± 10%的1/2为判断标准[4] 。国产试剂的 9个项目的试剂偏倚均低于允许误差标准。

表4 国产试剂与罗氏原装配套试剂比对实验结果在Xc处的偏倚(%)
讨 论

本研究利用P-800对国产试剂进行线性测定和精密度评价。结果显示, 国产试剂线性较宽; 低值、高值血清其结果批内、批间CV均< 5%; 均符合临床实验室质量管理规范要求[2]。

本研究使用国产试剂和罗氏原装配套试剂同时检测临床 40份样本的常规生化项目, 并进行相关性分析, 如果以 r≥ 0.975、b=1.0± 0.05为判断标准[1], 2种试剂9个项目所测结果无明显差异(r均> 0.975, P> 0.05), 均符合判断标准。

同时, 本研究对国产试剂与罗氏原装配套试剂进行抗干扰能力测定, 结果表明国产试剂与罗氏原装配套试剂测定脂浊血清、黄疸血清及外观正常血清的结果均无差异(r均> 0.975, P> 0.05), 说明国产试剂与罗氏原装配套试剂均不受异常样本干扰。

另外, 本研究对国产试剂与罗氏原装配套试剂的比对实验结果在Xc处的偏倚进行统计, 由于不同检测系统检验结果可比性的判定标准国际上还没有一致的看法, 用CLIA'88的TEa显得过宽, 不能用于方法学比较试验中可接受性能的判断; 根据生物学变异导出的允许偏差, 又显得太严, 也不适合临床应用。因此, 根据本研究结果, 建议判断同一检验项目不同检测系统检验结果的可比性可采用以下标准:在参考区间内可采用 < 1/2 CLIA'88 TEa作为可比性的判断标准, 而参考区间以外则采用 < CLIA'88 TEa。本研究结果显示, 国产试剂9个项目的偏倚误差均低于1/2 CLIA'88 TEa。

近年来, 国际上特别强调使用固定组合的检测系统即所谓的“ 封闭系统” (即分析仪器、校准品、试剂和检验程序等形成固定组合), 使用这样的检测系统对患者样本进行检验, 其检验结果具有溯源性和可比性[5] 。但由于检测成本的增加, 国内大量实验室望而却步, 这就限制了一些大型生化分析仪的应用, 或者部分实验室干脆不考虑检验结果是否具有溯源性, 而随便使用仪器及试剂, 从而造成检验结果不具有溯源性而且实验室间检验结果不具可比性。本研究首先以混合血清作为量值传递载体, 经罗氏原装配套检测系统测定后用以校准国产试剂, 再对校准国产试剂的cafs校准品重新赋值, 将赋值后的cafs校准品应用于国产试剂, 保证了结果的可溯源性。cafs校准品是公司指定用来校准本测定系统的, 是考虑到其具有基质效应的情况下, 人为赋予校准品的校准值, 因此校准品必须专用于某一测定系统。国产试剂直接使用cafs校准品其结果会有偏差。同一校准品用于不同试剂校准时, 应具有不同的校准值。因此, 不轻易使用同一校准品的单一校准值对各种系统进行校准, 已保证结果的量值溯源。

检验结果的量值溯源和不同检测系统检验结果的可比性是医学实验室认可标准 ISO 15189(医学实验室质量和能力的专用要求)的重要技术要素, 并强调比对试验是实现准确度溯源和检验结果可比性的重要途径[6]。本研究参考 NCCLS EP9-A2文件[1], 对国产试剂和罗氏原装配套试剂的不同检测系统的9项常规生化结果进行方法比对和偏差评估, 结果满意。因P-800检测系统具有量值溯源性, 因此根据准确度传递的原理, 国产试剂9项常规生化的检验结果亦具有溯源性, 其检验结果具有溯源性和可比性, 可以替代罗氏原装配套试剂。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. User comparison of quantitative clinical laboratory using patient samples;Proposed guideline[S]. 2nd ed. EP9-A2. NCCLS. 2002. [本文引用:6]
[2] 杨振华, 王治国. 临床实验室质量管理规范[M]. 北京: 人民卫生出版社, 2003: 153-160. [本文引用:3]
[3] 托马斯, 主编. 朱汉民, 沈霞, 吕元, 等译. 临床实验诊断学: 实验结果的应用和评估[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2004: 10-57. [本文引用:1]
[4] 冯仁丰. 临床检验质量管理技术基础[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2003: 66-99. [本文引用:1]
[5] 张秀明, 郑松柏, 孙蕾, 等. 应用 Westgard方法评价决定图判断生化检测系统性能的可接受性[J]. 中华检验医学杂志, 2007, 30(1): 86-90. [本文引用:1]
[6] 魏昊, 丛玉隆. 医学实验室质量管理与认可指南[M]. 北京: 中国计量出版社, 2004: 72-75. [本文引用:1]