引用本文
肖克林, 吴丽娟, 郑有为, 钱靖琳, 梅平, 王丁, 周克元. 第二代杂交捕获法诊断宫颈高度病变的临床评价. 2009, 24(6): 409-412
XIAO Kelin, WU Lijuan, ZHENG Youwei, QIAN Jinglin, MEI Ping, WANG Ding, ZHOU Keyuan. Evaluation of the diagnostic accuracy of HC2 in detecting high-grade cervical intraepithelial neoplasia. Labratory Medicine, 2009, 24(6): 409-412  
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第二代杂交捕获法诊断宫颈高度病变的临床评价
肖克林1, 吴丽娟1, 郑有为2, 钱靖琳2, 梅平2, 王丁2, 周克元3
1.深圳市宝安区妇幼保健院检验科,广东 深圳 518133
2.广东省人民医院病理医学部,广东 广州 510080
3. 广东医学院生物化学与分子生物学教研室,广东 湛江 524023

作者简介:肖克林,男,1980年生,硕士,主管技师,主要从事分子诊断研究。

通讯作者:王 丁,联系电话:020-83827812。

摘要
目的

评价第2代杂交捕获法(HC2)检测13种高危型人乳头瘤病毒(HPV)用于诊断宫颈高度病变的效能。

方法

利用HC2检测292位妇女宫颈上皮细胞13种高危型HPV感染状况,以组织病理学检测结果为金标准评价HC2诊断宫颈高度病变[≥宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)]的效能。

结果

≥CIN2组妇女13种高危型HPV感染率为95.56%(43/45),<CIN2组为66.40%(164/247),两组间差异有统计学意义( χ2=15.68, P<0.001)。HC2诊断宫颈高度病变的敏感性为95.56%,特异性为33.60%,阳性预测值为20.77%,阴性预测值为97.65%,阳性似然比为1.44,阴性似然比为0.13。受试者工作特征(ROC)曲线分析发现,HC2诊断宫颈高度病变时曲线下面积为0.64,最佳诊断值为3.46 pg/mL,此时方法的敏感性为93.30%,特异性为42.10%。

结论

宫颈高度病变与13种高危型HPV感染有关。HC2具有较高的敏感性和阴性预测值,但特异性和阳性预测值较低,临床上若用于宫颈高度病变的确诊,应与其他特异性较高的方法结合以提高其准确性。

关键词: 第2代杂交捕获法; 敏感性; 特异性; 受试者工作特征曲线; 人乳头瘤病毒; 宫颈高度病变
中图分类号:R446.5 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)06-0409-04
Evaluation of the diagnostic accuracy of HC2 in detecting high-grade cervical intraepithelial neoplasia
XIAO Kelin1, WU Lijuan1, ZHENG Youwei2, QIAN Jinglin2, MEI Ping2, WANG Ding2, ZHOU Keyuan3
1.Department of Clinical Laboratory, Bao'an Maternity and Child Health Hospital, Guangdong Shenzhen 518133, China
2.Department of Pathology Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital, Guangdong Guangzhou 510080, China
3. Department of Biochemistry, Guangdong Medical College, Guangdong Zhanjiang 524023, China
Abstract
Objective

To evaluate the diagnostic accuracy of hybrid capture 2 (HC2) in detecting high-grade cervical intraepithelial neoplasia (CIN).

Methods

292 women were enrolled and their cervical squamous cell specimens were collected for detecting 13 high-risk Human papillomavirus (HPV) genotypes by HC2, and the diagnostic accuracy of HC2 in detecting high-grade CIN (≥CIN2) was analyzed using histopathology result as standard.

Results

66.40%(164/247) women of histopathologically confirmed <CIN2 and 95.56%(43/45) women of histopathologically confirmed ≥CIN2 were infected by 13 high risk HPV, there was significant difference between them( χ2=15.68, P<0.001). The sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value, positive likelihook ratio and negative likelihook ratio of HC2 were 95.56%, 33.60%, 20.77%,97.65%, 1.44 and 0.13, respectively. Area under receiver operator characteristic (ROC) curve was 0.64, the optimal diagnostic value was 3.46 pg/mL, the sensitivity and specificity were 93.30% and 42.10% in the point, respectively.

Conclusions

There is significant correlation between HPV infection and high-grade CIN. HC2 has good sensitivity and negative predictive value in screening high-grade CIN, but the specificity and positive predictive value are weak. It must be combined with other methods to improve its accuracy in ≥CIN2 diagnosis.

Keyword: Hybrid capture 2; Sensitivity; Specificity; Receiver operator characteristic curve; Human papillomavirus; Cervical intraepithelial neoplasia

第2代杂交捕获法(hybrid capture 2, HC2)是目前美国食品药品监督管理局(FDA)惟一批准可在临床应用的人乳头瘤病毒(HPV) DNA检测方法, 是一种液相杂交法, 其利用特异的RNA探针与变性后的HPV DNA单链杂交, 同时结合酶联免疫化学发光原理使基因信号放大, 从而达到检测靶基因的目的[1]。该法操作简便, 由于利用的是信号放大原理, 无需体外扩增目的基因, 不易污染, 所以对实验室设置无特殊要求, 是目前临床中用于筛查妇女宫颈细胞HPV感染的常用方法之一。HC2引入我国临床应用已有数年时间, 在我国的一些医疗机构也得到较广泛的应用, 但该法用于宫颈病变的诊断性能情况, 国内外学者的报道尚存在不同之处。本研究就该法诊断宫颈高度病变的效能进行评价。

材料和方法
一、研究对象

随机选取2004年10月至2005年12月广东省人民医院妇科门诊和体检中心女性患者292例, 年龄(36± 18)岁。

二、研究方法

1. 高危型HPV检测 利用Digene公司HC2高危型HPV检测试剂检测受检妇女高危型HPV感染状况, 该试剂能够检测出HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68共13种高危型HPV类型。HC2为一种半定量方法, 其将3个含有 1 ng/L HPV16 DNA的阳性标准检测到的发光值的均值作为阈值(cut-off, CO)[2], 然后将标本的发光值(relative light unit, RLU)与CO相除, 即可半量检测标本中的HPV核酸含量。(1)标本采集:Digene公司专用锥形采集刷自受检者宫颈口鳞、柱状上皮交界处采集标本后立即放于Digene公司专用标本保存管内; (2)实验步骤:按试剂说明书操作; (3)结果判断:标本检测结果以RLU/CO定量数值报告, 以试剂厂商提供的参考值为判断标准, 即RLU/CO< 1时, 高危型HPV阴性, 反之则为阳性, RLU/CO数值越高, 表示标本所含病毒载量越高。

2. 组织病理学检查 用电子阴道镜指引取材, 宫颈病变者在病变部位多点采样送检, 未见病变者按常规在宫颈移行带3、6、9和12点4个位点取样送检。阴道镜检查指征如下:(1)有性交出血或血性白带; (2)细胞学检查为≥ 意义不明的非典型鳞状上皮细胞(ASCUS); (3)细胞学检查阴性, 但临床可疑癌; (4)有癌症家族史, 患者要求排除宫颈病变者; (5)慢性宫颈炎长期治疗效果不佳者。本研究将组织病理学诊断结果为宫颈上皮内瘤变2级(CIN2)、宫颈上皮内瘤变3级(CIN3)及宫颈癌患者归为宫颈高度病变组(≥ CIN2), 其余归为对照组(< CIN2)。

三、统计学方法

利用SPSS 12.0软件包受试者工作特征(ROC)曲线分析HC2诊断宫颈高度病变的曲线下面积(AUC), 并计算出其最佳诊断CO。AUC> 0.5为具有诊断价值。利用χ 2检验比较宫颈高度病变组和对照组的高危型HPV感染率, P< 0.05为差异具有统计学意义。HC2的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比采用直接计算法。

结 果
一、组织病理学及高危型HPV检测结果

292位妇女组织病理学检测结果显示, 诊断为CIN2及以上者45例, CIN2级以下者247例。宫颈病变≥ CIN2组妇女高危型HPV阳性者43例, 阴性2例; < CIN2组妇女高危型HPV阳性者164例, 阴性83例。≥ CIN2组高危型HPV感染率(95.56%, 43/45)高于< CIN2组(66.40%, 164/247), 两组比较差异有统计学意义(χ 2=15.68, P< 0.001), 见表1。

表1 受检妇女组织病理学及13种高危型HPV检测结果
二、HC2诊断宫颈高度病变的敏感性及特异性

以组织病理学结果为评判标准, HC2诊断宫颈高度病变的敏感性为95.56%(95%可信区间为89.54%~100.00%)、特异性为33.60% (95%可信区间为27.71%~39.49%)、阳性预测值为20.77% (95%可信区间为15.25%~26.29%)、阴性预测值为97.65% (95%可信区间为94.41%~100.00%)、阳性似然比为1.44、阴性似然比为0.13。

三、HC2诊断宫颈高度病变ROC曲线

HC2诊断宫颈高度病变时AUC为0.64 (95%可信区间为0.57~0.71)。当诊断RLU/CO为3.46 pg/mL时, HC2的敏感性和特异性达到最佳平衡, 此时敏感性为93.30%, 特异性为42.10%, 见图1。

图1 HC2检测宫颈高度病变ROC曲线注:AUC=0.64, P=0.003

讨 论

本研究利用HC2检测292位妇女的13种高危型HPV感染情况, 发现≥ CIN2组妇女13种高危型HPV的感染率明显高于< CIN2组(χ 2=15.68, P< 0.001), 此结果表明宫颈病变与13种高危型HPV感染存在相关性, 且随着病变程度的加深, 高危型HPV的感染率不断上升, 尤其是宫颈癌患者, 其感染率更是高达100%。

国内外一些学者的研究表明, HC2用于检测宫颈高度病变具有较高的敏感性, 但特异性则报道各异[2~5]。本研究发现, HC2用于检测宫颈高度病变具有较高的敏感性和阴性预测值, 分别达到95.56%和97.65%, 但特异性和阳性预测值相对较差, 分别为33.60%和20.77%。此结果中的敏感性与以前的大部分报道相似, 而特异性则介于他们之间。研究结果之间存在差异的原因可能与病例的收集、受检人群的来源及生活方式不同有关, 同时也表明不同地区和不同人群中HPV的感染率存在一定的差异。本研究结果还显示, HC2诊断宫颈高度病变的阳性似然比为1.44, 阴性似然比为0.13, 这些结果均表明HC2用于确诊宫颈高度病变的效能不强, 但排除高度病变的能力相对较好。

HC2高危型HPV检测试剂生产厂商提供的诊断RLU/CO为1 pg/mL, 然而有学者研究发现, 此值并非HC2的最佳诊断标准[2, 6]。本研究发现当诊断RLU/CO为3.46 pg/mL时, HC2的检验效能达到最佳。此结果与Guyot等[2]的报道相似, 但与Kulmala等[6]的报道存在差异。研究结果存在差异的原因可能与采用的评判标准不同有关, 本实验所采用的评判标准为组织病理学检查结果, 而Kulmala等则是采用宫颈细胞学作为评价标准; 同时, 研究时病例收集方式不同亦可造成差异。本研究还发现, HC2用于诊断宫颈高度病变的AUC为0.64, 相对较小, 但较Castle等[7]报道的略高。本结果表明, HC2用于诊断宫颈高度病变具有一定的价值, 但效能并不高。

总之, 本研究表明HC2可作为宫颈高度病变的一种筛查方法, 用于宫颈高度病变的初筛具有较高的价值, 但不能单独用于宫颈高度病变的确诊, 临床应用时, 应与其他特异性较高的方法(如宫颈液基细胞学检查)结合以提高其准确性, 这也是目前国际上及我国妇产科学相关协会和组织推荐的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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