引用本文
丁磊, 胡翊群, 姜叙诚. 健康人群外周血各类血细胞CD55/CD59的表达. 2009, 24(3): 205-207
DING Lei, HU Yiqun, JIANG Xucheng. Analysis of the expression of CD55 and CD59 on various cell in peripheral blood in healthy population. Labratory Medicine, 2009, 24(3): 205-207  
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《检验医学》编辑部
健康人群外周血各类血细胞CD55/CD59的表达
丁磊1, 胡翊群1, 姜叙诚2
1. 上海交通大学医学院检验系,上海 200025
2. 上海交通大学医学院病理教研室,上海 200025

作者简介:丁 磊,女,1969年生,学士,主要从事血液学和临床检验工作。

摘要
目的

了解健康人群外周血细胞CD55/CD59表达情况。

方法

用流式细胞仪检测健康人红细胞、粒细胞、单核细胞、淋巴细胞膜上CD55/CD59表达。

结果

80名健康人外周血不同类型的血细胞膜上CD55/CD59表达不同。正常红细胞CD55/CD59双阳性的红细胞中位数为85.100%, 阵发性血红蛋白尿症(PNH)细胞<0.200%;正常中性粒细胞双阳性细胞中位数为99.900%, PNH细胞<0.100%;单核细胞双阳性细胞的中位数为93.000%,PNH细胞<2.900%。淋巴细胞双阳性细胞中位数为72.600%,PNH细胞<18.000%。正常淋巴细胞中所含的PNH细胞比例明显高于其他细胞( P<0.01),且主要为T淋巴细胞。

结论

健康人的外周血各种血细胞CD55/CD59表达不同,分析结果有助于对PNH等干细胞疾病的诊断和发病机制进行探讨。

关键词: CD55; CD59; 流式细胞仪; 外周血细胞
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)03-0205-03
Analysis of the expression of CD55 and CD59 on various cell in peripheral blood in healthy population
DING Lei1, HU Yiqun1, JIANG Xucheng2
1.Faculty of Medical Laboratory Sciences, Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200025,China
2.Department of Pathology,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200025,China
Abstract
Objective

To investigate the expression of CD55/CD59 on peripheral blood cell in healthy population.

Methods

The expression of CD55/CD59 on peripheral blood erythrocyte, granulocyte, monocyte and lymphocyte was quantified respectively by flow cytometry.

Results

In 80 healthy persons, the median of CD55+/CD59+ on normal erythrocyte was 85.100%, paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) cell <0.200%; The median of CD55+/CD59+ on normal granulocyte was 99.900%, PNH cell<0.100%; The median of CD55+/CD59+ on normal monocyte was 93.000%, PNH cell<2.900%; The median of CD55+/CD59+ on normal lymphocyte was 72.600%, PNH cell<18.000%.The PNH cell in lymphocyte was obviously more than in other blood cell( P<0.01), and mainly for T lymphocytes.

Conclusions

There is different expression of CD55/CD59 on peripheral blood cell in healthy population. Quantitative analysis of the expression of CD55 and CD59 on peripheral blood cell may be important both in diagnosis and disclosing nosogenesis of the pluripotent stem cells disease such as PNH.

Keyword: CD55; CD59; Flow cytometry; Peripheral blood cell

补体调节蛋白CD55、CD59已被广泛应用于阵发性血红蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)诊断中[1], 将CD55/CD59表达缺乏的细胞称为PNH细胞。PNH细胞也存在于造血干细胞疾病患者中, 除了PNH, 目前很多学者采用敏感的流式细胞仪技术检测后发现, 很多干细胞疾病患者均可检出存在PNH细胞, 再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、淋巴增殖性疾病、急慢性白血病患者中均可检出PNH异常克隆和PIG-A基因突变, 且有证据表明其与疾病的治疗效果和预后有关[2~5]。以往的文献报道中对正常对照标本血细胞CD55、CD59表达的研究都集中在红细胞和粒细胞上, 而各种研究说明, 完整研究血细胞的补体调节蛋白在诊断和机制探讨中更有价值。我们采用流式细胞仪检测了健康人外周血红细胞、粒细胞、淋巴细胞、单核细胞的CD55、CD59表达情况, 为进一步研究干细胞疾病提供依据。

材料和方法
一、标本来源

80份标本均取自上海交通大学医学院附属瑞金医院体检的健康人群外周血[乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝], 男42名, 女38名, 年龄20~60岁, 平均41岁。入选的80名健康人的年龄、性别组成分布情况见表1。

表1 80名健康人年龄、性别组成
二、材料

1.仪器和试剂 BD FACSCanto 流式细胞仪购自美国BD公司; CD45-别藻青蛋白偶联物(APC-cy7) IgG购自美国Invitrogen公司, CD55-藻红蛋白(PE) IgG、CD59-异硫氰酸荧光素(FITC) IgG、CD3-PE-cy7 IgG、CD19-APC IgG、同型对照小鼠IgG购自美国Beckman Coulter公司。

2.红细胞裂解液 储存液NH4Cl(1.5 mol/L)80 g, KHCO3(100 nmol/L)10 g, Na4EDTA(10 nmol/L)3.7 g, 双蒸水1 000 mL, 储存液1: 9稀释后作为工作液使用。

3.磷酸盐缓冲液(PBS) 0.15 mol/L, pH值为7.2。

三、方法

1.流式细胞仪用前向角散射光(FSC)、侧向角散射光(SSC)设门检测红细胞 抗凝血0.5 μ L用PBS 100 μ L悬浮, 加荧光标记单抗CD55、CD59各10 μ L, 室温避光20 min后用PBS洗1次, 离心后倾去上清液, 用PBS重悬至200 μ L, 上流式细胞仪检测红细胞。另设同型对照管。

2.流式细胞仪用CD45设门检测白细胞 抗凝血100 μ L加红细胞裂解液3 mL, 20 min后以1 000 r/min离心5 min, 用PBS洗2次, 调整细胞数量至105, 加CD45、CD55、CD59各10 μ L, 室温避光20 min后PBS洗1次, 倾去上清液, 用PBS悬浮至200 μ L, 上流式细胞仪检测白细胞。另设同型对照管。

3.流式细胞仪用CD3、CD19设门检测T、B淋巴细胞 抗凝血100 μ L加3 mL红细胞裂解液, 20 min后以1 000 r/min离心5 min, 用PBS洗1次, 调整细胞数量至105, 加CD45、CD55、CD59、CD3、CD19各10 μ L, 室温避光20 min后用PBS洗1次, 离心后倾去上清液, 用PBS重悬至200 μ L, 上流式细胞仪用CD45设门圈出淋巴细胞群, 再用CD3、CD19区分出T、B淋巴细胞亚群, 分别分析T、B淋巴细胞的CD55/CD59表达情况。

四、统计学方法

所有数据以百分率表示, 用SPSS 13.0统计软件对各组数据进行统计学秩和检验。

结 果

一、用流式细胞仪检测80名正常健康者外周血各类型血细胞CD55/CD59定量分析结果见表2, 各类细胞CD55/CD59表达的典型散点图见图1~6。除红细胞和中性粒细胞外, 单核细胞和淋巴细胞中均有相当比例的CD55/CD59双阴性细胞(PNH细胞), 尤其是T淋巴细胞中PNH细胞比例最高。

表2 外周血各类血细胞CD55、CD59表达[%, 中位数(范围)]

图1 红细胞CD55/CD59表达

图2 中性粒细胞CD55/CD59表达

图3 单核细胞CD55/CD59表达

图4 淋巴细胞CD55/CD59表达

图5 B淋巴细胞(CD19+)CD55/CD59表达

图6 T淋巴细胞(CD3+)CD55/CD59表达

讨 论

补体调节蛋白CD55/CD59存在于所有血细胞中, 在补体介导的细胞杀伤过程中起重要的作用, 且与患者的临床表现密切相关[6]。CD55/CD59最早用于PNH诊断, 将CD55/CD59表达缺乏的细胞称为PNH细胞。有文献报道, 正常对照组中红细胞和中性粒细胞均有少量的PNH细胞存在[7], 但对正常淋巴细胞及淋巴细胞亚群未见报道。我们采用六色荧光的流式细胞仪, 对80名20~60岁健康人群的外周血细胞膜上CD55/CD59进行检测, 结果显示健康人不同种类的血细胞膜上CD55/CD59表达不同。PNH克隆累及造血细胞次序为粒细胞、单核细胞、红细胞、淋巴细胞, CD59-粒细胞最早被检出, 具早期诊断PNH的价值, 且受输血影响少[8]。骨髓出现CD59-粒细胞比外周血早, 网织红细胞略早于红细胞。淋巴细胞PNH克隆在粒细胞、红细胞PNH克隆消失后仍可维持多年。在大部分PNH患者中, PNH克隆和正常克隆并存, 但两者的比例在不同患者中有所区别, 中性粒细胞和单核细胞的CD55/CD59表达不一致, 红细胞的CD55/CD59表达也不同, 随着机体内环境的变化和不同治疗手段共同导致PNH克隆演变后, 两者的比例会变得更复杂多变, 可能既有量变(克隆比例的增高或减低)又有质变(原有克隆的消减、新克隆的产生)。

越来越多的学者发现除了PNH, 很多干细胞疾病患者也存在PNH细胞, 因此了解外周血各类正常血细胞的CD55/CD59表达情况对于诊断PNH, 判断PNH克隆的演变, 探讨造血干细胞异常克隆性病变的发病机制都有重要的参考价值。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] Savage WJ, Brodsky RA. New insights into paroxysmal nocturnal hemoglobinuria[J]. Hematology, 2007, 12(5): 371-376. [本文引用:1]
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[3] Wang H, Chuhjo T, Yasue S, et al. Clinical significance of a minor population of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria-type cells in bone marrow failure syndrome[J]. Blood, 2002, 100(12): 3897-3902. [本文引用:1]
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[8] 孙健. 关于PNH克隆演变的研究进展[J]. 上海第二医科大学学报, 2005, 25(9): 975-978. [本文引用:1]