引用本文
顾孔珍, 王晓春, 袁晓. 醛固酮合酶基因多态性与原发性高血压相关性研究. 2009, 24(2): 94-96
GU Kongzhen, WANG Xiaochun, YUAN Xiao. Study on the relation between the CYP11B2 gene polymorphisms and essential hypertension. Labratory Medicine, 2009, 24(2): 94-96  
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醛固酮合酶基因多态性与原发性高血压相关性研究
顾孔珍, 王晓春, 袁晓
中南大学湘雅医学院医学检验系,湖南 长沙 410013

作者简介:顾孔珍,女,1975年生,硕士,讲师,主要从事临床检验诊断教学和科研。

通讯作者:王晓春,联系电话:0731-2650279。

基金:湖南省科技项目(05SK3035)
摘要
目的

探讨醛固酮合酶基因(CYP11B2)-344T/C多态性与原发性高血压的相关性。

方法

采用关联分析,收集湖南地区汉族男性原发性高血压患者100例,正常对照100名。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP) 对2组对象的CYP11B2 -344T/C多态进行分析。

结果

2组对象CYP11B2基因型(TT型、CT型和CC型)的频率差异无统计学意义( χ2=0.34, P>0.05),等位基因的频率差异也无统计学意义( χ2=0.28, P>0.05),但各组内等位基因T的频率(原发性高血压组:67.67%)高于等位基因C(32.33%);对照组T 69.67%高于C 30.33%。

结论

多基因联合分析显示,在男性患者中,CYP11B2-344T/C多态性与原发性高血压无明显相关, 但CYP11B2 -344各组内等位基因T的频率高于等位基因C。

关键词: 原发性高血压; 醛固酮合酶; 多态性
中图分类号:Q503 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)02-0094-03
Study on the relation between the CYP11B2 gene polymorphisms and essential hypertension
GU Kongzhen, WANG Xiaochun, YUAN Xiao
Faculty of Laboratory Medicine, Xiangya Medical College of Central South University ,Hunan Changsha 410013, China
Abstract
Objective

To explore the relation between the polymorphism-344T/C of aldosterone synthase gene (CYP11B2) and essential hypertension.

Methods

Association analysis was employed and the single nucleotide polymorphisms of genomic DNA from 100 patients with essential hypertension and 100 normal Han subjects in Hunan randomly selected according to a standard were genotyped by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis.

Results

There was no significant difference of gene frequency (TT, TC, and CC) between the hypertensive and the control groups ( χ2=0.34, P>0.05), so did the distributions of T and C alleles in both groups ( χ2=0.28, P>0.05). The frequency of T allele was higher than that of C allele in both groups (hypertension: 67.67% vs 32.33%, P<0.05; controls: 69.67% vs 30.33%, P<0.05).

Conclusions

Polygene associated assay shows that the polymorphism of CYP11B2 -344C has not obvious connection with essential hypertension in male case, while the frequency of T allele of CYP11B2 -344C in both groups was higher than that of C allele, which has obvious connection with essential hypertension.

Keyword: Essential hypertension; CYP11B2; Polymorphism

肾素-血管紧张素-醛固酮系统是机体调控血压的重要系统之一, 在高血压病的发生发展中起着重要作用。醛固酮是人体内最重要、作用最强的盐皮质激素, 其过度分泌可使体内水、钠潴留, 血容量增加, 心脏前负荷增大; 并通过非基因快速作用和基因作用促血管平滑肌肥大, 平滑肌细胞增殖, 骨胶原基因表达增强, 骨胶原蛋白合成增多, 基质金属酶-2 活性增加, 血管重塑使外周血管阻力增高而增加心脏后负荷。本研究旨在采用关联分析法分析湖南人群醛固酮合酶基因(CYP11B2)5'端转录起始点上游顺式作用元件区域多态性与原发性高血压的相关性, 以进一步确定其在原发性高血压发生发展中的作用。

材料和方法
一、研究对象

研究对象均为无血缘关系的湖南籍汉族男性, 分为2组。原发性高血压组(简称高血压病组):随机选择湘雅医院和湖南省人民医院2005年10月至2006年6月期间经门诊确诊的原发性高血压男性患者100例, 年龄范围在35~70岁(54.2± 3.6岁)。入选标准:(1)高血压病诊断均符合1999年世界卫生组织/国际高血压协会(WHO/ISH)诊断标准[1]; (2)排除继发性高血压; (3)排除其他心血管系统疾病、糖尿病、肝肾功能不全; (4)排除吸烟、饮酒患者。正常对照组:随机选择湘雅医院和湘雅三医院同期的男性健康体检者100名, 年龄范围在33~70岁(53.7± 3.1岁)。正常对照组入选标准:(1)血压< 140/90mmHg, 未曾服用过任何抗高血压的药物; (2)无心、脑、肾、肝胆、糖尿病及肿瘤等病史, 且心电图、尿常规、肝、肾功能及血脂正常者; (3)无吸烟、饮酒史。

二、标本

每位研究对象抽取静脉血3 mL, 采用乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)抗凝, 储存于4℃, 于1周内进行基因组DNA提取。采用苯酚-氯仿抽提法抽提DNA, 溶于TE溶液中, -20℃保存待用。

三、基因型检测

CYP11B2基因扩增及Hae Ⅲ 多态检测:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测, CYP11B2(基因库号D13752)基因正向引物序列:5'- CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC -3', 反向引物序列:5'-CCT CCA CCC TGT TCA GCC C -3'。PCR反应总体系为50μ L, 反应条件:94 ℃ 3min; 94 ℃ 60s, 60 ℃ 45s, 72 ℃ 50s, 32个循环; 72 ℃ 10min。扩增产物长度为537bp, 产物以限制性内切酶Hae Ⅲ 于37 ℃消化3h后经8%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离, 银染显色后, 扫描成图记录结果。

四、统计学方法

2组对象基因型频率与等位基因频率、Hardy-Weinberg平衡用χ 2检验。采用社会科学统计软件SPSS6.0进行统计学处理, 以P< 0.05为差异有统计学意义。

结 果
一、CYP11B2基因PCR-RFLP

限制性内切酶Hae Ⅲ 酶切位点为-GG↓ CC-, CYP11B2基因其-344位点(-GGCT-)可发生胸腺嘧啶(T)与胞嘧啶(C)的互换, 即T-344C, 当-344位点为C时, 产生了Hae Ⅲ 酶切位点而能被水解, 因此CC型酶切后产生202bp、138bp、126bp、71bp片段, TT型酶切后产生273bp、138bp、126bp片段, CT型酶切后产生273bp、202bp、138bp、126bp、71bp片段, 见图1。

图1 CYP11B2基因PCR-RFLP结果图

二、 高血压病组与对照组CYP11B2基因型的比较

正常对照组与高血压病组基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律, 所选人群具有代表性(对照组χ 2=0.01, P> 0.05; 高血压病组χ 2=0.06, P> 0.05)。2组基因型的分布均以TT型最多, 其次为CT型, 而CC型最少, 但2组基因型的构成比差异无统计学意义(χ 2=0.34, P> 0.05)。2组等位基因的频率差异也无统计学意义(χ 2=0.28, P> 0.05), 但是各组内等位基因T的频率高于等位基因C(高血压病组T 67.67%高于C 32.33%; 对照组T 69.67%高于C 30.33%), 见表1。

表1 CYP11B2基因型和T-344C等位基因频率在高血压病组和对照组中的比较(%)
讨 论

醛固酮合酶基因定位在8q2.4.3, 约含有7 000个碱基, 与编码类固醇11β -羟化酶的相关基因(CYP11B1) 相距40bp。CYP11B2基因的多态性在原发性高血压易感基因的研究中成为许多学者关注的焦点和热点, 目前主要研究其5'端转录起始点上游顺式作用元件区域多态性, 因为该区域多态性可能直接影响到CYP11B2基因转录水平的表达, 但目前国内外报道不一致。本实验研究的-344T/C 变异位于CYP11B2 基因顺式作用元件类固醇生成转录因子-1(steroidgenic transcription factor-I, SF-I)结合区, -344T/C多态性和与之连锁的其他多态性可能影响CYP11B2 基因启动子与SF-I因子结合进而影响醛固酮合成酶mRNA的转录和醛固酮的合成分泌。有些学者的研究发现该多态性与原发性高血压的相关性仅表现在女性患者中, 这可能是因为该基因多态性与Y染色体相互作用所致。Matsubara等[2] 对日本人群进行的大样本研究中发现-344T等位基因与原发性高血压显著相关, Tsukada等[3]则发现-344C等位基因与原发性高血压显著相关。Komiya等[4]对日本人群的研究则进一步表明-344C等位基因与低肾素性原发性高血压显著相关。然而Tsujita等[5]在日本大样本人群中按性别分别分析, 结果显示原发性高血压和对照组之间-344T/C多态性各基因型和等位基因分布差异无统计学意义, 未发现CYP11B2 基因-344T/C多态性与原发性高血压相关。本实验结果显示原发性高血压组和对照组之间-344T/C多态性各基因型和等位基因分布差异无统计学意义, 未发现CYP11B2 基因-344T/C多态性与原发性高血压相关。以上研究结果的差异, 可能与不同地区、种族及研究人群的遗传异质性相关。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 叶任高, 陆再美. 内科学[M]. 第六版. 北京: 人民卫生出版社, 2004(2): 247. [本文引用:1]
[2] Matsubara M, Sato T, Nishimura T, et al. CYP11B2 polymorphisms and home blood pressure in a population-based cohort in Japanese: the Ohasama study[J]. Hypertens Res, 2004, 27(1): 1-6. [本文引用:1]
[3] Tsukada K, Ishimitsu T, Teranishi M, et al. Positive association of CYP11B2 gene polymorphism with genetic predisposition to essential hypertension[J]. J Hum Hypertens, 2002, 16(11): 789-793. [本文引用:1]
[4] Komiya I, Yamada T, Takara M, et al. Lys(173)Arg and -344T/C variants of CYP11B2 in Japanese patients with low-renin hypertension[J]. Hypertension, 2000, 35(3): 699-703. [本文引用:1]
[5] Tsujita Y, Iwai N, Katsuya T, et al. Lack of association between genetic polymorphism of CYP11B2 and hypertension in Japanese: the suite study[J]. Hypertens Res, 2001, 24(2): 105-109. [本文引用:1]