引用本文
郑瑾, 吴蓉, 倪振华, 康向东. HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者PreS1-Ag与HBV复制的关系研究. 2009, 24(12): 904-906
ZHENG Jin, WU Rong, NI Zhenhua, KANG Xiangdong. Correlative analysis of the PreS1 antigen and HBV DNA in patients with positive HBsAg, anti-HBe and anti-HBc. Labratory Medicine, 2009, 24(12): 904-906  
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HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者PreS1-Ag与HBV复制的关系研究
郑瑾, 吴蓉, 倪振华, 康向东
上海中医药大学附属普陀医院检验科,上海 200062

作者简介:郑 瑾,女,1972年生,主管技师,主要从事临床免疫学检验工作。

摘要
目的

探讨乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)、HBV e抗体(抗HBe)、HBV核心抗体(抗HBc)阳性患者HBV前S1抗原(PreS1-Ag)与HBV复制的关系。

方法

采用化学发光微粒免疫法(MEIA)、荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者血清肝炎标志物、HBV DNA载量和PreS1-Ag,并分析HBV DNA载量和PreS1-Ag的相关性。

结果

456例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者标本中HBV DNA与PreS1-Ag的符合率为88.37%,两者阳性率间差异无统计学意义( P>0.05)。HBV DNA载量和PreS1-Ag吸光度之间显著相关( r=0.979 9, P<0.01)。对176例HBV DNA和PreS1-Ag均阳性的标本进一步进行分段分析,HBV DNA载量在2×103~7×104拷贝/mL之间及对应的PreS1-Ag吸光度在0.105~1.696之间的数据相关程度更为密切( r=0.993 9, P<0.01)。

结论

PreS1-Ag可能是一个很好的反映HBV复制的指标。

关键词: 前S1抗原; DNA; 乙型肝炎病毒; 荧光定量聚合酶链反应; 酶联免疫吸附试验
中图分类号:R446.62 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)12-0904-03
Correlative analysis of the PreS1 antigen and HBV DNA in patients with positive HBsAg, anti-HBe and anti-HBc
ZHENG Jin, WU Rong, NI Zhenhua, KANG Xiangdong
Department of Clinical Laboratory, Putuo Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200062, China
Abstract
Objective

To investigate the relationship between Hepatitis B virus (HBV) preS1 antigen (PreS1-Ag) and HBV replication in the patients with positive HBV surface antigen (HBsAg), HBV e antibody (anti-HBe) and HBV core antibody (anti-HBc).

Methods

Microparticle enzyme immunoassay (MEIA), fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to determine serum markers of hepatitis, HBV DNA load and PreS1-Ag, and the relativity of HBV DNA load and PreS1-Ag was analyzed.

Results

The coincidence of HBV DNA and PreS1-Ag in 456 cases of HBsAg, anti-HBe and anti-HBc-positive patients was 88.37% and the positive rates of them had no significant difference ( P>0.05). HBV DNA load was related to PreS1-Ag absorbance significantly ( r=0.979 9, P<0.01). 176 cases of HBV DNA and PreS1-Ag positive specimens were further sub-analyzed, and HBV DNA load in the 2×103-7×104 copies/mL was more closely related to the absorbance of PreS1-Ag at 0.105-1.696 ( r=0.993 9, P<0.01).

Conclusions

PreS1-Ag may be a good indicator of HBV replication.

Keyword: PreS1 antigen; DNA; Hepatitis B virus; Fluorescence quantitative polymerase chain reaction; Enzyme-linked immunosorbent assay

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染性疾病。我国是乙型肝炎的高发区, 判断乙型肝炎病毒(HBV)的复制和活动情况对于疾病的治疗和监测具有十分重要的意义。HBV前S1抗原(PreS1-Ag)是一个近年较为关注的乙型肝炎血清学标志物。有文献报道认为, PreS1-Ag与HBV复制关系密切[1]。我们应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV表面抗原(HBsAg)、HBV e抗体(抗HBe)、HBV核心抗体(抗HBc)阳性患者血清HBV DNA载量和PreS1-Ag, 以探讨他们之间的关系及临床检测的意义。

材料和方法
一、标本来源

收集普陀医院2008年1至7月门诊及住院HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者456例, 男285例, 女171例, 年龄21~76岁, 均经临床确诊。

二、方法与试剂

1. HBV血清标志物定量检测 采用化学发光微粒免疫法(MEIA), 雅培ARCHITECT i2000全自动免疫发光仪及配套试剂进行测定。

2. HBV DNA定量检测 采用FQ-PCR, 利用美国PE公司的ABI7300进行扩增定量分析。采用广州达安生物工程有限公司生产的HBV DNA荧光定量试剂盒进行测定, 检测敏感性为103拷贝/mL。

3. PreS1-Ag半定量检测 采用双抗体夹心ELISA测定, 试剂由上海阿尔法生物技术有限公司提供。严格按试剂盒操作说明进行。

三、统计学方法

采用SPSS 15.0统计软件进行配对χ 2检验及相关分析。

结 果
一、HBV DNA和PreS1-Ag检测

456例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者标本中, HBV DNA载量和PreS1-Ag阳性率之间差异无统计学意义(χ 2=3.18, P> 0.05), 两者符合率为88.37% 。HBV DNA载量与PreS1-Ag检测结果见表1。

表1 HBV DNA载量与PreS1-Ag检测结果
二、对HBV DNA载量和PreS1-Ag吸光度的相关性分析

456例数据排序后进行线性关系研究, 结果显示HBV DNA载量和PreS1-Ag吸光度显著相关(r=0.979 9, P< 0.01)。见图1。

图1 HBV-DNA载量与PreS1-Ag吸光度的线性关系

三、 对176例HBV DNA和PreS1-Ag均阳性的标本分段分析

1. HBV DNA载量在2× 103~7× 104拷贝/mL及对应的PreS1-Ag吸光度在0.105~1.696之间数据做线性关系研究, 结果显示此段相关程度更为密切(r=0.993 9, P< 0.01), 见图2。

图2 HBV DNA载量(2× 103~7× 104拷贝/mL)与PreS1-Ag吸光度(0.105~1.696)的线性关系

2. HBV DNA载量> 7× 104拷贝/mL及对应的PreS1-Ag吸光度> 1.696数据进行线性关系研究, r=0.980 1(P< 0.01)。由此可见HBV DNA载量在2× 103~7× 104拷贝/mL之间及对应的PreS1-Ag吸光度在0.105~1.696之间的数据相关程度更为密切 , 见图3。

图3 HBV DNA载量(> 7× 104拷贝/mL)与PreS1-Ag吸光度(> 1.696)的线性关系

讨 论

HBV基因S区存在3个不同的编码:HBsAg、PreS1、PreS2表达蛋白[2], 其中PreS1蛋白由108或119个氨基酸组成, 是HBV外膜蛋白的主要部分, 是与细胞接触的前沿。PreS1-Ag只存在于具有传染性的完整的HBV Dane颗粒上, 其含有肝细胞受体, 因而认为PreS1-Ag也是病毒复制的标志物之一, 在HBV感染后细胞和机体免疫应答方面起重要作用[3]。检测PreS1-Ag对HBV感染的早期诊断、病毒复制和预后估计具有重要的临床意义, 可作为早期诊断HBV感染的指标[4]。在慢性HBV感染中, PreS1-Ag持续阳性提示病情进展和恶化, 急性乙型肝炎患者PreS1-Ag转阴越早, 预后越好, 是病毒清除的最早迹象。反之, 如果PreS1-Ag持续阳性, 将发展至慢性乙型肝炎, 预后较差[5, 6]。PreS1-Ag的21~47肽段是HBV侵入肝细胞的结合位点, 与HBV侵入肝细胞有关。由于PreS1-Ag的自身结构特点及其在HBV复制中所起的作用, 当PreS1-Ag出现阳性时, HBV侵入肝细胞的能力加强, 造成肝细胞的损害, 导致血中丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高, 故PreS1-Ag阳性对肝细胞的损害有一定的提示作用[7]。

尽管各种资料提示PreS1-Ag可能是反映HBV DNA复制的指标之一, 但有关直接从实验室水平观测PreS1-Ag与HBV DNA载量的关系研究仍不多。本研究分析了部分患者HBV DNA载量与PreS1-Ag水平的关系, 发现456例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性患者标本中, HBV DNA载量和PreS1-Ag吸光度之间显著相关(r=0.979 9, P< 0.01)。进一步分析176例HBV DNA和PreS1-Ag均阳性的标本, HBV DNA载量在2× 103~7× 104拷贝/mL之间及对应的PreS1-Ag吸光度在0.105~1.696之间的数据相关程度更为密切(r =0.993 9, P< 0.01)。因此可根据吸光度在0.105~1.696之间的PreS1-Ag初步推断HBV DNA载量。总之无论从阴阳性方面, 还是从PreS1-Ag吸光度与HBV DNA载量看, PreS1-Ag是一个很好的反映病毒复制的指标。

HBV DNA阳性的209例标本中仍有33例PreS1-Ag阴性, 推测与前S区缺失突变有关。Sugauchi等[8]研究表明, HBV携带者前S区缺失突变率为23%。国内蒋栋等[9]检测363例慢性乙型肝炎和无症状携带者血清, 发现30例存在前S区缺失突变, 而前S区突变并不影响病毒的复制和装配。此外, HBV DNA阴性的247例标本中有20例PreS1-Ag呈现阳性结果, 但阳性的吸光度均< 0.500(> 0.105为阳性), 原因可能是HBV拷贝数较低处于检测限以下或由于检测方法的原因未能检测到, 此时PreS1-Ag阳性是对HBV复制情况的一个重要补充。

FQ-PCR检测HBV DNA是诊断HBV复制的金标准, 但此技术操作复杂且较昂贵, 基层单位不易开展。因此, 特别是对没有条件进行FQ-PCR检测HBV DNA载量的医院, 检测PreS1-Ag是一种简单易行的方法。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 徐蓓, 姚光弼. 血清乙型肝炎病毒前S1抗原检测及其与病毒复制的关系[J]. 中华实验和临床病毒学杂志, 1997, 11(2): 117-119. [本文引用:1]
[2] Borisova G, Borschukova O, Skrastina D, et al. Be-havior of a short preS1 epitope on the surface of hepatitis B core particles[J]. Biol Chem, 1999, 380(3): 315-324. [本文引用:1]
[3] 姚云清, 张定凤. 乙型肝炎病毒感染、复制及其清除机制[J]. 中华肝脏病杂志, 2002, 10(5): 398-400. [本文引用:1]
[4] Barrera A, Guerra B, Notvall L, et al. Mapping of the Hepatitis B virus pre-S1 domain involved in receptor recognition[J]. J Virol, 2005, 79(15): 9786-9798. [本文引用:1]
[5] Pichoud C, Berby F, Stuyver L, et al. Presistence of viral replication after anti-HBe seroconversion during antiviral therapy for chronic hepatitis B[J]. J Hepatol, 2000, 32(3): 307-316. [本文引用:1]
[6] Caeta GB, Stornaiuolo G, Precone DF, et al. Epidemio-logical and clinical burden of chronic Hepatitis B virus/Hepatitis C virus infection. A multicenter Italian study[J]. J Hepatol, 2003, 39(6): 1036-1041. [本文引用:1]
[7] Stoeckl L, Funk A, Kopitzki A, et al. Identification of a structural motif crucial for infectivity of Hepatitis B viruses[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103(17): 6730-6734. [本文引用:1]
[8] Sugauchi F, Ohno T, Orito E, et al. Influence of He-patitis B virus genotypes on development of preS deletions and advanced liver disease[J]. J Med Virol, 2003, 70(4): 537-544. [本文引用:1]
[9] 蒋栋, 许军, 李若冰, 等. 乙型肝炎病毒前S基因区缺失突变发生机制的探讨[J]. 病毒学报, 2002, 18(4): 317-324. [本文引用:1]