24小时尿肌酐检测样本保存方法的探讨
鲍云非, 王兰, 左力
北京大学第一医院肾脏内科 北京大学肾脏疾病研究所,北京 100034

作者简介:鲍云非,女,1981年生,硕士,护师,主要从事慢性肾脏病临床研究工作。

摘要
目的

分析尿液不同保存方法对24 h尿肌酐(UCr)检测值的影响,探讨留取24 h尿测定UCr的适宜保存条件。

方法

在同一时间收集尿液后,分别在不同保存时间、不同保存温度和加入不同防腐剂的条件下,检测初始和保存后的UCr浓度。采用单因素方差分析探讨时间、温度和防腐剂3种因素对UCr测定值的影响。

结果

在室温和4 ℃保存条件下,UCr均可稳定保持24 h,在24 h内测定值没有明显变化;加入甲醛会降低UCr测定值( P<0.05),而二甲苯对UCr测定值没有影响。

结论

留取24 h尿测定肌酐,只需将24 h尿在室温下放置即可,无需额外添加防腐剂。

关键词: 肌酐; 24小时尿; 保存
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)12-0866-03
Investigation of the preservation methods for 24-hour urine creatinine test sample
BAO Yunfei, WANG Lan, ZUO Li
Institute of Nephrology, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China
Abstract
Objective

To analyze the influence of different preservation conditions for 24 h urine creatinine (UCr) test sample, and investigate the appropriate condition.

Methods

The urine samples were collected simultaneously, and the initial and preserved UCr were determined under the conditions of different holding times, different temperatures and different preservatives,and the influence of these three factors for UCr determination was analyzed by one-way anova statistics.

Results

Under the room temperature and 4 ℃,urine Cr had no significant changes during 24 h and was steady-going all the time. When the formaldehyde was added in urine samples,the UCr level decreased ( P<0.05), but dimethylbenzene did not influence it.

Conclusions

24 h urine sample can be preserved at the room temperature without preservative for the 24 h UCr determination.

Keyword: Creatinine; 24 hour urine; Preservation

尿肌酐(urine creatinine, UCr)的测定在临床中应用广泛, 要获得准确的测定结果, 正确留取并保存好尿液样本是第一步。通常, 检测UCr需要留取24 h尿, 这就意味着24 h UCr测定会受到很多因素的干扰, 如历时24 h的长时间放置、留取方法不当、环境因素等[1]。这些因素会不会导致24 h UCr的检测结果误差较大呢?针对这一问题, 我们在统一了留尿方法的前提下, 将24 h尿保存过程中的常见原因进行分析, 探讨以检测UCr为目的的24 h尿液的适宜保存方法。

材料和方法
一、尿液样本

随机选择2008年9月在北京大学第一医院肾内科病房住院患者留取尿液。

二、实验材料

容量3 000 mL的带盖塑料桶, 冰箱, EP管, 冻存盒, 防腐剂(40%甲醛和二甲苯溶液)。

三、方法

在同一时间嘱患者排尿于一清洁塑料桶中, 并混匀放置。根据实验设计需要, 采用以下3种方法:(1)时间:采集29份尿液, 各自于桶中混匀后, 取出少量于EP管中冻存于-30 ℃低温冰箱, 之后分别在室温(17~28 ℃)放置12 h、16 h、20 h、24 h后, 取出少量尿液置EP管中并冻存于-30 ℃低温冰箱; (2)温度:采集51份尿液, 各自于桶中混匀后, 分成2部分, 其中29份尿液保存于室温(17~28 ℃), 其余22份尿液保存于4 ℃冰箱, 在留尿即刻和放置24 h后, 取出少量于EP管中并冻存于-30 ℃低温冰箱; (3)防腐剂:采集50份尿液, 各自于桶中混匀后分为2组。先分别取出少量置EP管中冻存于-30 ℃低温冰箱, 2组的剩余尿液分别按1:50的比例加入99%二甲苯溶液和按1:200的比例加入40%甲醛溶液, 其中有21份尿液加入二甲苯溶液, 29份尿液加入甲醛溶液; 加入防腐剂的尿液混匀后再分别取出少量置EP管中并冻存于-30 ℃低温冰箱, 2组尿液在室温放置24 h后再分别取出少量置EP管中并冻存于-30 ℃低温冰箱保存。待全部尿液样本留取完毕后, 将所有冻存的尿液样本在同一时间进行检测。

四、检测方法

将所有尿液样本同时取出于室温下复溶, 待充分溶化后, 混匀并同时进行UCr测定。仪器为HITACHI 7170A全自动生化分析仪, 方法为苦味酸法, 试剂由北京中生北控生物科技有限公司生产。

五、统计学方法

使用SPSS11.5统计软件对测定结果进行统计分析。所有数据均建立数据库, 计量资料以 x̅± s表示, 统计方法使用单因素方差分析, P< 0.05表示有统计学意义。

结 果
一、保存时间对UCr测定的影响

各保存时间点所测得的UCr值间差异无统计学意义(P> 0.05)。各检测时间点与初始时间点的测定值之间进行两两比较差异无统计学意义(P> 0.05)。

二、保存温度对UCr测定的影响

无论是4 ℃还是室温(17~28 ℃)的保存条件, 尿液放置24 h后UCr的测定值与即刻测定值比较均无差异(P> 0.05), 见表1

表1 不同保存温度下的24 h UCr检测结果( x̅± s, mmol/L)
三、不同防腐剂对UCr的影响

在尿中加入甲醛防腐后, 肌酐即刻测定值明显低于未加防腐剂的即刻测定值(P< 0.05), 加入甲醛后再放置24 h, UCr的测定值与未加防腐剂的即刻测定值相比也有明显差异(P< 0.05), 但与加入甲醛的即刻测定值比较无明显差异(P> 0.05)。在尿中加入二甲苯防腐后, 加入即刻及放置24 h后UCr的测定值与未加防腐剂的即刻测定值比较, 差异无统计学意义(P> 0.05), 见表2

表2 不同防腐剂保存的24 h UCr检测结果( x̅± s, mmol/L)
讨 论

在临床上, 测定UCr的意义非常广泛。首先, 由于UCr排出量昼夜相对恒定, 受干扰的因素较少, 是校正尿量不同及个体差异的一个好方法[2]。利用UCr的这一特点, 可以辅助诊断很多临床疾病, 如尿淀粉酶与UCr的比值辅助诊断急性胰腺炎[3]; 尿蛋白肌酐比值诊断糖尿病早期肾损害[4]。其次, 24 h排出UCr的多少与肾功能有关。利用这一特点将24 h UCr与血肌酐一起测定, 可计算24 h肌酐清除率(Ccr)[5]。Ccr是临床上常用的评价肾小球滤过率(GFR)的方法之一。Ccr不仅可帮助确诊、预测慢性肾脏病的病情发展, 而且能为治疗方案的选择提供科学依据[6]。第三, 24 h UCr的测定还可以反映机体的营养状况, 将连续3 d的24 h UCr平均值与相同性别及身高的标准肌酐值比较可得到肌酐身高指数(CHI), 该指数是衡量机体蛋白质水平的灵敏指标, 广泛用于营养评价[7]。因此, UCr的准确测定十分重要。

指导患者正确留取检验样本并妥善保存和及时送检样本是得到准确检验结果的基础。对于尿液样本的保存要求中提到, 一般尿液检验应及时检查新鲜样本, 如不能及时检查, 或作某些特殊试验需留取大量样本时, 应根据不同检查目的妥善保存。保存方法一般有冷藏法和化学防腐剂法[8]。然而, 在实际保存24 h尿的过程中, 不论是冷藏法还是化学防腐剂法, 应用起来都不方便。很多慢性肾脏病随诊的患者都需要定期在家留取24 h尿来测定Ccr以监测病情的进展。如果将24 h的全天尿液保存在自家冰箱显然是不合适的, 而采用化学防腐的方法, 在操作上也存在很多困难, 比如防腐剂的用量有严格的限制, 患者很难掌握合适的防腐剂用量; 并且这些化学防腐剂均有一定的毒性和危险性, 使用时也会存在一定的安全隐患。

依据本研究的结果, 如果留取24 h尿测定UCr, 上述的这些不便均可得到避免。尽管以往的研究表明, 放置时间是影响尿液检测结果的重要因素, 如将尿液放置3 h, 尿糖浓度即有显著下降; 放置9 h, 尿蛋白、酮体和尿白细胞计数也明显下降, 其原因与细菌的分解作用有关[9]。但是对于UCr测定, 虽然在留取24 h尿的过程中, 最常见的影响因素— — 细菌污染是无法避免的, 但本实验的结果显示, 在24 h的放置时间里, UCr浓度始终保持稳定。这个最常见的因素对UCr测定没有明显影响。将尿液进行冷藏和加入防腐剂也进一步说明了这一点。将尿液放入4 ℃冰箱、加入二甲苯防腐和室温放置具有同样的效果, 保存24 h的UCr浓度均没有明显下降。

尽管UCr十分稳定, 但是却对不同种类的防腐剂反应不一。甲醛对于肌酐影响较大, 会造成检测结果的显著下降, 而使用二甲苯作为防腐剂对检测结果没有影响。因此, 虽然在一般条件下UCr的稳定性很好, 但如遇到高温等特殊条件需要加入防腐剂的时候, 我们应当选用二甲苯而不应使用甲醛。

总之, 本研究的结果表明, 尿液中的肌酐成分比较稳定, 在室温条件下, 可以保持24h检测结果基本不变, 故一般不用额外加入防腐剂。如遇特殊情况需要加入防腐剂, 宜使用二甲苯而不应使用甲醛。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
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