引用本文
传良敏, 邓君, 王文建, 曹万惠, 黄文芳, 饶绍琴. 肝素锂抗凝血浆与血清样本中34项生化检测结果的偏倚评估. 2009, 24(10): 727-730
CHUAN Liangmin, DENG Jun, WANG Wenjian, CAO Wanhui, HUANG Wenfang, RAO Shaoqin. Bias estimation of 34 biochemistry indexes between anticoagulant plasma with heparin lithium and serum. Labratory Medicine, 2009, 24(10): 727-730  
Permissions
Copyright©2009, 《检验医学》编辑部
《检验医学》编辑部
肝素锂抗凝血浆与血清样本中34项生化检测结果的偏倚评估
传良敏, 邓君, 王文建, 曹万惠, 黄文芳, 饶绍琴
四川省人民医院检验科,四川 成都 610072

作者简介:传良敏,女,1970年生,硕士,副主任技师,主要从事临床生物化学检验与质量管理工作。

摘要
目的

观察肝素锂对常规生化检测结果的影响,探讨肝素锂抗凝血浆能否用于生化检测以及能否用血清参考范围解释血浆检测结果。

方法

按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的《用患者样本进行方法比对及偏倚评估:批准指南》(EP9-A方案),随机抽取40例患者和健康体检者静脉血样本,分别注入红色真空采集管和肝素锂抗凝管中,于同一生化仪中对34项生化项目进行检测,并对结果进行统计学分析。

结果

34项测定指标中除脂蛋白(a)[Lp(a)]、前白蛋白(PA)、5'-核苷酸酶(5'-NT)、腺苷脱氨酶(ADA)外,其余各项目的相关系数( r)均≥0.975。34项指标中血浆与血清葡萄糖(Glu)、钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、磷(P)的平均偏倚>1/2美国临床医学检验部门修正法规(CLIA'88)允许误差。血浆Lp(a)、PA、5'-NT、ADA检测结果与其血清检测结果相比,差异有统计学意义( P<0.05),平均偏倚均较大,分别为-11.9%、27.68%、-37.03%、29.31%;其余25项指标血浆测定值与血清测定值之间差异均<1/2 CLIA'88允许误差。

结论

大部分常规生化检验项目可用肝素锂抗凝血浆代替血清,但Glu、K、Na、Cl、P应建立血浆参考范围,其余项目可用血清参考范围解释血浆检测结果。Lp(a)、PA、5'-NT、ADA项目不宜用肝素锂抗凝血浆作为样本进行测定。

关键词: 偏倚; 血清; 血浆; 肝素锂; 生化测定
中图分类号:R446.1 文献标志码:A 文章编号:1673-8640(2009)010-0727-04
Bias estimation of 34 biochemistry indexes between anticoagulant plasma with heparin lithium and serum
CHUAN Liangmin, DENG Jun, WANG Wenjian, CAO Wanhui, HUANG Wenfang, RAO Shaoqin
Department of Clinical Laboratory, Sichuan Provincial People's Hospital, Sichuan Chengdu 610072, China
Abstract
Objective

To observe the influence of heparin lithium on the results of routine biochemistry determination. To study the feasibility of plasma anticoagulated with heparin lithium used for biochemical assay and serum reference range used for analysing plasma results.

Methods

According to the method comparison and bias estimation using patient samples (Document EP9-A) approved by National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), 40 blood samples of patients and healthy subjects were separately poured into the red vacuum tube and heparin lithium anticoagulant tube. 34 routine biochemistry indexes were determined by the same auto biochemistry analyzer and analyzed statistically.

Results

Except for apolipoprotein(a) [Lp(a)],prealbumin(PA),5'-nucleotidase (5'-NT) and adenosine deaminase (ADA),the correlation coefficient ( r)of the other indexes was ≥0.975. Among 34 indexes, the average bias of glucose(Glu), potassium(K), sodium(Na), chlorine(Cl) and phosphrous(P) with plasma was more than 1/2 the Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA'88) allowable total error (TEa). The main biases of Lp(a), PA, 5'-NT and ADA were-11.9%,27.68%,-37.03% and 29.31% respectively. The results had significant difference between plasma and serum( P<0.05). The bias of the other 25 indexes in serum and plasma was less than 1/2 CLIA'88 TEa.

Conclusions

Serum could be replaced by plasma with heparin lithium as anticoagulant for most of biochemistry assay. The serum reference range could be used for explaining plasma results except Glu,K,Na,Cl and P,which should establish their related plasma reference range.The plasma with heparin lithium as anticoagulant could not be used for Lp(a),PA,5'-NT and ADA determination.

Keyword: Bias; Serum; Plasma; Heparin lithium; Biochemistry determination

样本采集过程是保证样本质量的关键环节, 其中就有抗凝剂的使用和样本容器的要求[1]。一次性真空采血管意在规范样本的采集, 不同的检测项目要求使用不同颜色的真空采血管, 使之在整个检验过程中有显著的、不同的惟一标识。但在实际操作过程中, 常会遇到采血管用错而使检测样本为血浆, 或者是为了使患者尽快拿到检测报告而使用肝素锂抗凝血浆进行生化项目的检测。在这种情况下, 按理应使用血浆参考范围, 但目前大多数实验室以及《全国临床统一操作规程》第3版上给出的参考范围多为血清参考范围, 因此就存在用血清的参考范围去解释患者血浆检测结果的现象。这样解释是否可行以及是否会引起误诊需要进行研究。为了解肝素锂对生化检测结果的影响, 按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A方案[2]评估肝素锂抗凝血浆与血清样本中生化检测结果的偏倚, 观察肝素锂抗凝血浆生化检测结果的偏倚是否在临床可接受范围之内, 探讨能否用血清参考范围解释血浆检测结果。

材料和方法
一、材料

1. 样本收集管 红色真空采血管(无抗凝剂)及绿色肝素锂抗凝管均由美国BD公司提供。

2. 样本收集 同一患者分别用绿色肝素锂抗凝管和红色真空采血管采集空腹静脉血, 绿色肝素锂抗凝管及时分离血浆, 红色真空采血管待血液自然凝固后离心分离。样本的浓度选择按照NCCLS EP9-A文件中方法比对实验数据分布建议表的要求, 尽可能覆盖检测范围。

3. 检测项目 包括尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、葡萄糖(Glu)、钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、钙(Ca)、磷(P)、镁(Mg)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A-Ⅰ (apo A-Ⅰ )、载脂蛋白B(apo B)、脂蛋白(a)[Lp(a)]、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、胆碱酯酶(ChE)、肌酸激酶(CK)、α -羟丁酸脱氢酶(α -HBD)、γ -谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、前白蛋白(PA)、5'-核苷酸酶(5'-NT)、腺苷脱氨酶(ADA)、淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)共34项指标。

4. 仪器与试剂 仪器为OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪, 所有试剂均由北京中生北控股份有限公司提供。

5. 质控品和校准品 校准品采用试剂的配套校准品; 质控品为Beckman液体质控血清(2、3水平)。

二、方法

1. 质量控制 每天检测Beckman液体质控血清(2、3水平), 当质控结果符合要求后, 方可开始样本分析。

2.样本检测 每天同时分析8名患者的血清和血浆样本的34项常规生化项目。每份样本检测2次, 第1次按血清或血浆的1至8号编号顺序检测, 第2次检测顺序相反, 按8至1号进行, 在2 h之内测定完毕, 连续分析5 d。

3.数据处理 按照NCCLS EP9-A文件进行。首先对每个项目的血清和血浆检测结果进行相关性分析, 若相关系数(r)< 0.975, 则使用配对t检验对检测结果进行分析, 并计算每份血清和血浆样本的相对偏倚, 再计算其平均偏倚; 若r≥ 0.975, 则以血清检测结果为X, 血浆检测结果为Y, 计算回归方程Y=a+bX, 以美国Statland建议的医学决定水平(Xc), 将各个项目给定的Xc带入回归方程, 计算血浆(Y)与血清(X)检测结果之间的相对偏倚(SE%) 。SE(%) = [ | ( b-1) Xc + a | / Xc ] × 100%, 再计算其平均偏倚, 以美国临床医学检验部门修正法规(CLIA'88)允许误差或根据生物学变异确定的偏倚[3]为判断依据, 若SE(%)≤ 1/2 CLIA'88允许误差或根据生物学变异确定的偏倚属临床可接受水平, 即肝素锂对生化检测结果的影响在临床可接受范围之内, 可用血清参考范围解释血浆检测结果。

结 果

一、血清和血浆检测结果的相关性和回归方程见表1。除Lp(a)、PA、5'-NT、ADA外, 其余各项目的r≥ 0.975。

二、血浆检测结果与血清检测结果的平均偏倚见表2。其中血浆与血清Glu、K、Na、Cl、P结果的平均偏倚在可接受范围之外; Lp(a)、PA、5'-NT、ADA检测结果与其血清检测结果相比, 差异有统计学意义(P< 0.05)。

表1 血清和血浆34项生化检测结果的相关性和回归方程
表2 血浆与血清34项生化检测结果的平均偏倚
讨 论

从表1和表2结果可知, 34项测定指标中有25项指标血浆测定值与血清测定值之间偏依均< 1/2 CLIA'88允许误差, 其中Urea、Cr、UA、Mg、TG、TC、HDL-C、apo A-Ⅰ 、apo B、ALT、AST、ALP、LDH、CK、α -HBD、GGT、TBil、DBil、Amy、LPS血浆测定值与血清测定值非常接近, 平均偏倚< 1/5 CLIA'88允许误差, 与国内文献报道一致[4, 5]。另外, 这25项指标的血清测定值略高于血浆测定值, 一是肝素可能对各种试验产生不同程度的干扰; 二是因为血液凝固过程中血块收缩挤压, 细胞膜通透性发生改变, 使血细胞中的部分成分释放到血清中, 导致血清中各指标的浓度偏高。

34项指标中血浆与血清Glu、K、Na、Cl、P的平均偏倚> 1/2 CLIA'88允许误差; 血浆Lp(a)、PA、5'-NT、ADA检测结果与其血清检测结果相比, 差异有统计学意义(P< 0.05), 平均偏倚均较大, 分别为-11.9%、27.68%、-37.03%、29.31%; 血清Glu、K、Na、Cl、5'-NT、Lp(a)测定值高于血浆测定值, 相反血清P、PA、ADA测定值低于血浆测定值。血清K、Na、Cl浓度明显高于肝素锂抗凝血浆K、Na、Cl 的浓度。其原因一是血液凝固过程中血块收缩挤压, 细胞膜通透性发生改变, 使红细胞中发生离子交换从而使血清中离子浓度发生改变; 二是肝素与血液中阳离子结合, 即肝素与K、Na 结合, 影响离子电极对K、Na的响应, 导致血清K、Na浓度较肝素锂抗凝血浆高。肝素锂对 5'-NT的活性有明显的抑制作用, 因此不能用肝素锂血浆检测5'-NT; 血清中P、PA、ADA、Glu的测定结果与血浆测定结果相差大的原因不是很清楚, 可能是肝素锂对P、PA、ADA、Glu的测定产生干扰。

分析前阶段质量保证是临床实验室质量保证体系中最重要、最关键的环节之一, 而样本的正确采集是分析前阶段质量保证的重要内容。一次性真空采血管意在规范样本的采集, 不同的检测项目要求使用不同颜色的真空采血管, 使之在整个检验过程中有显著的、不同的惟一标识。本研究结果表明, 大部分常规生化检验项目可用肝素锂抗凝血浆代替血清, 但Glu、K、Na、Cl、P应建立血浆参考范围, 其余项目可用血清参考范围解释血浆检测结果; Lp(a)、PA、5'-NT、ADA等项目不宜用肝素锂抗凝血浆样本进行测定, 因此当发生乱用真空采血管的现象时, 必须把其当不合格样本处理, 不能盲目应用血清参考范围来解释血浆检测结果, 否则会导致检验结果无溯源性。

The authors have declared that no competing interests exist.

参考文献
[1] 丛玉隆. 临床实验室分析前质量管理及对策[J] . 中华检验医学杂志, 2004, (27)8: 483-487 . [本文引用:1]
[2] National Committee for Clinical Laboratory Stand ards. Method comparison and bias estimation using patient samples ; approved guideline[S]. EP9-A, NCCLS, 2002. [本文引用:1]
[3] 叶应妩, 王毓三, 申子瑜. 全国临床检验操作规程[M]. 第3版. 南京东南大学出版社, 2006: 81-86. [本文引用:1]
[4] 王龙武, 葛亚娟, 王妹芳, 等. 肝素锂抗凝血用于门急诊临床化学检验的可行性评价[J]. 检验医学, 2007, 22(1): 75-76. [本文引用:1]
[5] 罗春华, 李国静, 赵武, 等. 肝素锂抗凝血浆代替血清用于临床生化检验的可行性研究[J]. 国际检验医学杂志, 2006, 27(7): 658-660. [本文引用:1]